沙立超 天津市第一中心醫(yī)院 （天津 300110）

內(nèi)容提要： 目的：分析某型血細(xì)胞分離機(jī)在外周血干細(xì)胞采集中的應(yīng)用效果。方法：從2023年3月23日～2023年5月31日在本院接受造血干細(xì)胞移植的患者中抽取24例進(jìn)行研究，所有患者全部使用血細(xì)胞分離機(jī)獲取外周血干細(xì)胞懸液，記錄血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白以及CD34+等血細(xì)胞參數(shù)，而后再采集患者外周血同樣分析上述血細(xì)胞參數(shù)，明確相關(guān)設(shè)備的采集效果。結(jié)果：相較于外周血，外周血干細(xì)胞懸液CD34+、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白以及血小板水平更高。結(jié)論：使用費(fèi)森尤斯卡比COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)對(duì)外周血進(jìn)行處理能夠采集到更符合造血干細(xì)胞移植需求的外周血干細(xì)胞懸液，應(yīng)用該設(shè)備可優(yōu)化外周血干細(xì)胞參數(shù)，有助于進(jìn)一步強(qiáng)化造血干細(xì)胞移植的整體治療效果。

從性質(zhì)上看造血干細(xì)胞分化程度相對(duì)較低，其具有分化成不同類(lèi)型免疫細(xì)胞和造血細(xì)胞的潛能。造血干細(xì)胞移植的本質(zhì)是先通過(guò)放療或化療清除患者體內(nèi)異常血細(xì)胞，然后移植匹配的造血干細(xì)胞來(lái)重建患者造血功能和免疫功能。由于造血干細(xì)胞分化程度較低，因此其再生能力相對(duì)較強(qiáng)，分化潛力也相對(duì)較高，成功進(jìn)行造血干細(xì)胞移植后，患者將以移植的造血干細(xì)胞為基礎(chǔ)，通過(guò)細(xì)胞的自我復(fù)制和自我更新來(lái)逐漸恢復(fù)自體造血功能。以往臨床工作中骨髓移植是造血干細(xì)胞移植的主要形式，而隨著外周血干細(xì)胞培養(yǎng)和血細(xì)胞分離技術(shù)的不斷發(fā)展，外周血干細(xì)胞移植受到廣泛關(guān)注，相較于骨髓移植，外周血干細(xì)胞采集難度相對(duì)較低，采集過(guò)程中患者承受的痛苦相對(duì)較小且無(wú)須全身麻醉，各類(lèi)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)也得到較好控制。從受者角度看，外周血干細(xì)胞移植后患者自身造血功能恢復(fù)速率相對(duì)較快，而且整體治療周期短、治療費(fèi)用低，因此外周血造血干細(xì)胞移植應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大。根據(jù)當(dāng)前臨床實(shí)踐情況來(lái)看，通過(guò)細(xì)胞動(dòng)員后采集到的外周血干細(xì)胞水平仍舊偏低，這在很大程度上影響了移植效果[1]。血細(xì)胞分離機(jī)是一種利用血細(xì)胞密度差進(jìn)行分離提取的設(shè)備，使用此類(lèi)設(shè)備對(duì)外周血進(jìn)行分離采集，能夠進(jìn)一步優(yōu)化血細(xì)胞參數(shù)、獲取更多干細(xì)胞。費(fèi)森尤斯卡比是一家在血液治療領(lǐng)域頗具影響力的多元化醫(yī)療企業(yè)，其所生產(chǎn)的COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)，其具有功能完備、分離效率高、安全性強(qiáng)等多種優(yōu)勢(shì)，該型設(shè)備在國(guó)內(nèi)相關(guān)方向臨床工作中應(yīng)用極為廣泛，設(shè)備品質(zhì)得到一致認(rèn)可。為進(jìn)一步明確相關(guān)設(shè)備在外周血干細(xì)胞移植中的應(yīng)用價(jià)值，本文將采取分組對(duì)照分析的形式進(jìn)行研究。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

所有患者均取自2023年3月23日～2023年5月31日在本院接受造血干細(xì)胞移植的患者，患者數(shù)共計(jì)24例，以外周血和設(shè)備采集前患者血細(xì)胞參數(shù)作為對(duì)照組，以外周血干細(xì)胞懸液以及采集后患者血細(xì)胞參數(shù)作為觀察組。24例患者中女11例，男13例，患者年齡21～62歲，平均（38.75±7.52）歲。24例患者中包括異基因造血干細(xì)胞移植20例以及自體干細(xì)胞移植4例，異基因造血干細(xì)胞移植患者情況如下：女性患者9例，包括骨髓增生異常綜合征2例，急性髓系白血?。ü撬柙錾惓＞C合征轉(zhuǎn)化）1例，急性髓系白血病3例，原發(fā)性骨髓纖維化1例，急性淋巴細(xì)胞白血病2例。男性患者11例，包括再生障礙性貧血1例，急性淋巴細(xì)胞白血病2例，急性白血病1例，急性髓系白血病4例，骨髓增生異常綜合征3例。自體干細(xì)胞移植患者4例，其中男性患者2例，包括套細(xì)胞淋巴瘤1例，惡性淋巴瘤1例。女性患者2例，包括彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤1例，原發(fā)縱隔大B細(xì)胞淋巴瘤1例。所有納入病例均了解且同意參與本次研究，相關(guān)資料呈報(bào)倫理委員會(huì)獲批，分組情況具有組間比較價(jià)值。

納入標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)合臨床診斷擬采取外周血干細(xì)胞移植的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：基礎(chǔ)疾病嚴(yán)重且控制不佳者、原發(fā)疾病緩解程度不滿(mǎn)足移植需求者。

1.2 方法

所有患者均在外周血采集前先行細(xì)胞動(dòng)員，過(guò)程中對(duì)基礎(chǔ)血細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行監(jiān)控，達(dá)標(biāo)后使用費(fèi)森尤斯卡比COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)對(duì)外周血進(jìn)行采集分離處理。選擇MNC程序（半自動(dòng)采集程序）并準(zhǔn)備相關(guān)耗材，其中包括PIYA、抗凝劑、生理鹽水以及穿刺針。采集外周血前分析患者血細(xì)胞壓積，≥25%時(shí)可正常采集，低于這一數(shù)值應(yīng)先輸入紅細(xì)胞予以改善。設(shè)備開(kāi)機(jī)后按“繼續(xù)”按鈕選擇程序，使用操作鍵盤(pán)上的方向鍵將選擇光標(biāo)移至Leukocyte-Apheresis并確定，次級(jí)程序選擇MNC。根據(jù)系統(tǒng)提示安裝分離套件，過(guò)程中不灌注鹽水溶液，也不連接ACD，操作界面顯示Install set后依次關(guān)閉白色夾子（4個(gè)）和紅色夾子（1個(gè)），而后對(duì)管路進(jìn)行調(diào)整，以6號(hào)夾為基準(zhǔn)，滴室管路在右、濃縮物袋管路在左。在進(jìn)行管路預(yù)沖前連接鹽水和抗凝劑，按下準(zhǔn)備完成按鍵進(jìn)行報(bào)警系統(tǒng)測(cè)試，排除報(bào)警系統(tǒng)故障后執(zhí)行預(yù)沖作業(yè)[2]。系統(tǒng)提示預(yù)充完畢后檢查耗材管路內(nèi)的氣體殘留量，正常則按繼續(xù)鍵執(zhí)行下一程序，過(guò)多則進(jìn)行二次預(yù)充。完成預(yù)沖后進(jìn)行分離設(shè)置，檢查回輸管路情況，關(guān)閉該管路上的藍(lán)色夾子并將鹽水控制閥調(diào)至50%并按繼續(xù)鍵執(zhí)行下一程序。打開(kāi)回輸管路上的藍(lán)色接頭（位于兩藍(lán)色夾子中間），連接采血針并排除管路中的空氣，打開(kāi)鹽水管線(xiàn)上的夾子檢查鹽水灌注情況，確認(rèn)無(wú)異常情況后按繼續(xù)鍵執(zhí)行下一程序。根據(jù)系統(tǒng)提示輸入患者基礎(chǔ)信息，包括性別、身高、體重、術(shù)前白細(xì)胞濃度、紅細(xì)胞壓積以及CD34+計(jì)數(shù)，按確定鍵繼續(xù)輸入下一項(xiàng)參數(shù)。每循環(huán)血量、白膜泵出量以及白膜收集量可使用系統(tǒng)默認(rèn)值也可通過(guò)觀察白膜具體情況在一定程度上進(jìn)行加減調(diào)節(jié)，設(shè)置完成后，按確定鍵進(jìn)入過(guò)程參數(shù)菜單，此部分需要設(shè)置的參數(shù)主要包括全血流速、離心機(jī)轉(zhuǎn)速以及抗凝劑比例三項(xiàng)，全血流速一般設(shè)置為60mL/min，離心機(jī)轉(zhuǎn)速一般設(shè)置為1400r/min（注意觀察白膜形成情況前期可適當(dāng)調(diào)低），抗凝劑比例需根據(jù)處理全血量與患者總血容量比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，確認(rèn)參數(shù)設(shè)置無(wú)誤后按確認(rèn)鍵保存設(shè)置。進(jìn)入分離程序后，按下開(kāi)始按鈕執(zhí)行分離程序，分離完畢后根據(jù)分離需求和實(shí)際分離情況選擇完成分離或繼續(xù)分離，如需繼續(xù)分離則按“選項(xiàng)”按鍵，在其中找到繼續(xù)分離選項(xiàng)再次執(zhí)行分離程序。完成分離后進(jìn)行回輸，在切斷采血管路后將紅色滾輪開(kāi)度調(diào)至100%，檢查鹽水管路并使其復(fù)原，確認(rèn)鹽水量充足后，按下回輸開(kāi)始按鈕，程序執(zhí)行完畢后，根據(jù)實(shí)際情況選擇進(jìn)一步回輸或停止回輸。最后斷開(kāi)患者連接，取下分離好的外周血干細(xì)胞懸液以及耗材，記錄系統(tǒng)匯總參數(shù)后執(zhí)行關(guān)機(jī)操作（如需執(zhí)行下一次操作可在記錄完各項(xiàng)數(shù)據(jù)后按下復(fù)位鍵）。以常規(guī)方法少量采集患者外周血，使用流式細(xì)胞儀分析外周血干細(xì)胞懸液和外周血各項(xiàng)數(shù)據(jù)，包括CD34+、單核細(xì)胞、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板相關(guān)參數(shù)[3]。

1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)比分析外周血和外周血干細(xì)胞懸液中CD34+、單核細(xì)胞、紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板參數(shù)。同時(shí)對(duì)采集前后患者血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白水平以及白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行分析。根據(jù)造血干細(xì)胞移植需求和采集前后患者血細(xì)胞參數(shù)變化情況對(duì)費(fèi)森尤斯卡比COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)外周血干細(xì)胞采集效果進(jìn)行分析，外周血與外周血干細(xì)胞懸液對(duì)比時(shí)CD34+絕對(duì)計(jì)數(shù)、CD34+細(xì)胞占比、單核細(xì)胞占比、白細(xì)胞及血小板絕對(duì)計(jì)數(shù)越高代表其與造血干細(xì)胞移植需求契合度越高。此外對(duì)比采集前后患者血小板、血紅蛋白、白細(xì)胞幾項(xiàng)參數(shù)，如采集后參數(shù)下降則代表設(shè)備分離效果較好。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2.結(jié)果

常規(guī)采集的外周血血細(xì)胞參數(shù)與血細(xì)胞分離機(jī)采集的外周血干細(xì)胞懸液血細(xì)胞參數(shù)對(duì)比情況如表1所示。

表1.患者兩組樣本血細(xì)胞參數(shù)對(duì)比(n=24,±s)

表1.患者兩組樣本血細(xì)胞參數(shù)對(duì)比(n=24,±s)

組別CD34+絕對(duì)計(jì)數(shù)(個(gè)/μL)CD34+占比(%)單核細(xì)胞占比(%)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(×1012/L) 血小板計(jì)數(shù)(×109/L)觀察組453.71±99.57 0.32±0.08 21.07±1.51 186.75±29.77 237.57±38.79對(duì)照組39.59±30.77 0.13±0.04 5.88±1.32 42.55±10.98 129.74±31.32 t 19.4669 10.4067 37.1035 22.2358 10.5956 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

患者使用費(fèi)森尤斯卡比COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)采集外周血干細(xì)胞懸液前后血細(xì)胞參數(shù)情況如表2所示。

表2.患者使用血細(xì)胞分離及采集外周血干細(xì)胞懸液前后血細(xì)胞參數(shù)對(duì)比情況(n=24,±s)

表2.患者使用血細(xì)胞分離及采集外周血干細(xì)胞懸液前后血細(xì)胞參數(shù)對(duì)比情況(n=24,±s)

組別血小板(×109/L) 血紅蛋白(g/L) 白細(xì)胞計(jì)數(shù)(×109/L)觀察組114.79±8.01 100.03±7.79 3.07±0.66對(duì)照組128.27±15.94 115.57±11.88 3.99±0.89 t 3.7018 5.3589 4.0676 P＜0.01＜0.01＜0.01

3.討論

我國(guó)血液病患者基數(shù)大、患者分布和患者病情都相對(duì)復(fù)雜，從當(dāng)前實(shí)際情況看，我國(guó)血液病患者中相當(dāng)一部分有造血干細(xì)胞移植需求，已經(jīng)實(shí)施造血干細(xì)胞移植術(shù)和等待實(shí)施手術(shù)的患者數(shù)量相對(duì)較多。造血干細(xì)胞是造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞的始祖細(xì)胞，其分化程度相對(duì)較低，可以根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)一步發(fā)展為各種不同類(lèi)型的造血細(xì)胞或免疫細(xì)胞，由于其具有強(qiáng)大的自我復(fù)制和再生能力，因此相當(dāng)一部分因血液疾病導(dǎo)致自身造血功能和免疫功能受損的患者可通過(guò)自體或異體造血干細(xì)胞移植的形式進(jìn)行治療[4]。

所有患者在接受造血干細(xì)胞移植前均需根據(jù)病情接受較高劑量的放化療處理，在確保全面清除患者體內(nèi)異常細(xì)胞的基礎(chǔ)上移植正常的造血干細(xì)胞并使其在患者體內(nèi)不斷復(fù)制再生進(jìn)而達(dá)到恢復(fù)患者造血功能和免疫功能的效果[5]。造血干細(xì)胞主要存在于骨髓之中，因此骨髓移植是既往較長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)造血干細(xì)胞移植的主要形式[6]。人體外周血內(nèi)造血干細(xì)胞數(shù)量很少，因此無(wú)法直接從外周血中提取干細(xì)胞進(jìn)行移植，但研究發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)藥物刺激的形式來(lái)提升外周血造血干細(xì)胞數(shù)量，這為外周血干細(xì)胞移植奠定了實(shí)施基礎(chǔ)。相較于骨髓移植，外周血干細(xì)胞移植具有多方面優(yōu)勢(shì)，即采集過(guò)程痛苦少而且整體治療費(fèi)用也相對(duì)較低，但外周血干細(xì)胞移植也面臨一些問(wèn)題，常規(guī)細(xì)胞動(dòng)員后獲取的外周血中CD34+參數(shù)相對(duì)較低，單核細(xì)胞占比、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白以及白細(xì)胞等基礎(chǔ)參數(shù)也相對(duì)一般，而這些都在一定程度上限制了移植治療效果，因此當(dāng)前臨床工作中常采用血細(xì)胞分離機(jī)來(lái)對(duì)外周血進(jìn)行分離，處理優(yōu)化外周血干細(xì)胞成分[7]。

費(fèi)森尤斯卡比COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)屬該公司第3代血液技術(shù)產(chǎn)品，從技術(shù)參數(shù)上看，其具有細(xì)胞采集效率高、體外循環(huán)血量低、體外循環(huán)全血流速慢以及安全系統(tǒng)完備等優(yōu)勢(shì)。CD34+是重要的干細(xì)胞評(píng)價(jià)指標(biāo)，單從這一指標(biāo)上看COM.TEC的采集率達(dá)92%，而同類(lèi)產(chǎn)品此方向細(xì)胞采集效率僅為60%左右，這說(shuō)明該設(shè)備在外周血干細(xì)胞采集方面具有顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì)[8]。而且從整個(gè)操作流程上看該設(shè)備具有自動(dòng)化程度高、人工參數(shù)設(shè)置需求相對(duì)較低的特點(diǎn)，在細(xì)胞分裂過(guò)程中，其采取連續(xù)式處理技術(shù)和全封閉式一次性管路，不僅自動(dòng)化水平高，而且在需要人為干預(yù)的步驟上，還有全面的信息提示[9]。體外循環(huán)血量是評(píng)價(jià)血細(xì)胞分離機(jī)安全性的重要參數(shù)，COM.TEC能夠?qū)Ⅲw外循環(huán)血量控制在180mL以?xún)?nèi)，而同類(lèi)型產(chǎn)品普遍在190～300mL，這也凸顯了該設(shè)備的安全優(yōu)勢(shì)。從本文研究結(jié)果上看，應(yīng)用血細(xì)胞分離機(jī)采集外周血干細(xì)胞效果顯著，各項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)均優(yōu)于直接采集外周血，其采外周血干細(xì)胞懸液CD34+兩項(xiàng)參數(shù)明顯高于外周血，單核細(xì)胞占比、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)等也優(yōu)于外周血，且采集前后患者多項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)有明顯變化，這說(shuō)明該設(shè)備能夠顯著優(yōu)化外周血干細(xì)胞成分，其在外周血干細(xì)胞移植方面的應(yīng)用價(jià)值值得肯定。