鄧曙鵬

湖南省郴州市第三人民醫(yī)院腎臟風濕免疫科,郴州市 423000

肉眼血尿或伴蛋白尿是免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A腎病的一種常見臨床表現(xiàn)。IgA腎病進展為終末期腎病的風險高,確診后5年內(nèi)有5%～15%的患者進展為終末期腎病,20年內(nèi)有10%～50%的患者進展為終末期腎病[1-2],嚴重影響患者的生活質(zhì)量和生命健康。當前,IgA腎病的發(fā)病機制尚不完全明確[3]。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)在免疫反應(yīng)和炎癥性疾病中有重要作用,而且參與IgA腎病的發(fā)生發(fā)展[4]。B淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)是腫瘤壞死因子超家族的成員,與B淋巴細胞表面受體結(jié)合后,可誘導(dǎo)其增殖分化并分泌Ig,后者在體液免疫中起重要作用[5-6]。BLyS的異常表達可致自身免疫性疾病[7]。本研究探究IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達與臨床指標的相關(guān)性,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年5月至2022年5月我院收治的122例IgA腎病患者作為研究對象。納入標準:(1)符合IgA腎病的診斷標準[8];(2)經(jīng)腎穿刺活檢確診;(3)腎穿刺活檢前均未使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)伴有其他繼發(fā)性腎病;(2)存在各種原因引發(fā)的急性腎損傷。本研究符合《赫爾辛基宣言》,獲研究對象簽署的研究知情同意書,經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會審查批準。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集所有患者的年齡、性別、病程(從出現(xiàn)腎病癥狀或確診至腎穿刺活檢時)、收縮壓、舒張壓、高血壓史、肉眼血尿史、尿紅細胞計數(shù)、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、血尿酸、血肌酐、尿素氮和紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR),以及外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達水平。高血壓定義為既往存在2次或以上收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg,目前正服用降壓藥。肉眼血尿定義為肉眼可直接觀察的血樣、濃茶樣或洗肉水樣尿,同時排除急性泌尿系統(tǒng)感染、泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤或結(jié)石等引發(fā)的血尿。外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達水平經(jīng)2位病理科醫(yī)師獨立診斷,最終診斷經(jīng)所有研究人員參與討論后確定。

1.2.2 經(jīng)皮腎活檢 患者保持俯臥位,在B超引導(dǎo)下于右腎下極經(jīng)皮腎穿刺獲取腎組織。石蠟包埋,切片厚度2～3 μm,常規(guī)染色;冰凍切片厚度4～5 μm,對1 mm3以下的腎組織進行預(yù)處理后制作超薄切片,并進行光學顯微鏡、免疫熒光和電鏡檢查。腎臟病理的診斷是經(jīng)2位病理科醫(yī)師獨立診斷,如果出現(xiàn)意見分歧,由第三位病理科醫(yī)生參與診斷,最終診斷經(jīng)所有研究人員參與討論后確定。

1.2.3 外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達水平的檢測 抽取靜脈血液前告知所有研究對象禁食禁水,次日清晨由專人抽取 8 mL靜脈血液,注入血肝素抗凝,采用離心機(北京海富達科技有限公司,型號PPT10-SS)離心5 min,混入適量氯化鈉,應(yīng)用Ficoll分離液獲得單個核細胞。應(yīng)用實時熒光定量PCR儀(安捷倫科技有限公司,型號SureCycler 8800)檢測TLR4表達水平,應(yīng)用酶標儀[美谷分子儀器(上海)有限公司,型號SpectraMax iD3]檢測BLyS表達水平。TLR4試劑盒(貨號:fs-E3898)購自上海撫生實業(yè)有限公司,BLyS試劑盒(貨號:mlsw_E1135)購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2.4 分組標準 根據(jù)患者外周血單個核細胞TLR4表達水平將其分為低TLR4水平組(TLR4<12.06)和高TLR4水平組(TLR4≥12.06)。比較兩組患者臨床指標,并分析外周血單個核細胞TLR4表達水平與IgA腎病患者臨床指標的關(guān)系。根據(jù)患者外周血單個核細胞BLyS表達水平將其分為低BLyS水平組(BLyS<122.09 ng/L)和高BLyS水平組(BLyS≥122.09 ng/L)。比較兩組患者臨床指標,并分析外周血單個核細胞BLyS表達水平與IgA腎病患者臨床指標的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以(x±s)表示,兩組間均數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)和百分數(shù)表示,比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同外周血單個核細胞TLR4表達水平的IgA腎病患者臨床指標的比較 低TLR4水平組和高TLR4水平組的性別、收縮壓、高血壓史、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05),見表1。

2.2 IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4表達水平與臨床指標的相關(guān)性 IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4表達水平與收縮壓、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相關(guān)(均P<0.05),見表2。

表2 IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4表達水平與臨床指標的相關(guān)性

2.3 不同外周血單個核細胞BLyS表達水平的IgA腎病患者臨床指標的比較 低BLyS水平組和高BLyS水平組的性別、收縮壓、高血壓史、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05),見表3。

表3 不同外周血單個核細胞BLyS表達水平的IgA腎病患者臨床指標的比較

2.4 IgA腎病患者外周血單個核細胞BLyS表達水平與臨床指標的相關(guān)性 IgA腎病患者外周血單個核細胞BLyS表達水平與收縮壓、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相關(guān)(均P<0.05),見表4。

表4 IgA腎病患者外周血單個核細胞BLyS表達水平與臨床指標的相關(guān)性

3 討 論

TLR如同天然免疫的眼睛,監(jiān)視與識別各種不同的疾病相關(guān)分子模式,是機體抵抗感染性疾病的第一道屏障,參與機體天然免疫的調(diào)控,也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁。天然黏膜免疫異常與IgA腎病的發(fā)生和發(fā)展相關(guān):黏膜免疫異?？赡軐?dǎo)致黏膜抗原清除障礙,使得炎癥慢性化并持續(xù)分泌IgA[9]。在IgA腎病患者的外周血單個核細胞中,TLR4相對表達水平上調(diào)[10]。TLR4被激活后可導(dǎo)致IgA1異常糖基化,可能通過激活核因子-κB和獨立的MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與IgA腎病的發(fā)生[11-12]。IgA腎病的病理涉及B細胞活化和腎臟異常糖基化IgA1沉積:BLyS是B細胞活化的關(guān)鍵因子,可誘導(dǎo)B細胞增殖分化,分泌Ig,參與體液免疫[13],血清BLyS水平和IgA腎病患者腎小球組織病理學特征顯著相關(guān),BLyS可影響IgA1鉸鏈區(qū)O-糖基化的過程,導(dǎo)致異常糖基化IgA1大量生成、堆積[14]。本研究探究IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達與臨床指標的相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示,低TLR4水平組、低BLyS水平組的男性患者占比、合并高血壓史患者占比、收縮壓、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮水平均低于高TLR4組、高BLyS水平組。進一步行Pearson相關(guān)性分析后,結(jié)果顯示,IgA腎病患者外周血單個核細胞TLR4、BLyS表達水平與收縮壓、LDL、血尿酸、血肌酐水平均呈正相關(guān)。TLR4是一種I型跨膜蛋白,廣泛分布于心肌細胞、單核細胞、血管內(nèi)皮細胞,可與其配體結(jié)合,促進核因子-κB的核轉(zhuǎn)位,進而參與免疫炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮損傷,最終影響血壓[15-16]。有研究結(jié)果顯示,高度氧化糖化LDL可通過髓樣分化蛋白2的介導(dǎo),誘導(dǎo)TLR4-MyD88和TLR4-NOX4信號通路的激活[17]。TLR4是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵上游調(diào)控因子,可增強腎臟中的炎癥信號傳導(dǎo),促進病情的進展,進而影響患者腎功能[18];而血尿酸和血肌酐水平是評估腎功能的重要指標。BLyS屬于腫瘤壞死因子家族,BLyS的生成失調(diào)可能有助于誘導(dǎo)異常的單核/巨噬細胞活化,導(dǎo)致某些炎癥性自身免疫性疾病[19],進而影響血壓水平[20]、脂質(zhì)代謝[21]和腎臟功能。

綜上所述,外周血單個核細胞TLR4和BLyS表達與IgA腎病患者收縮壓、LDL、血尿酸、血肌酐水平存在相關(guān)性。