王艷麗,李欽,秦娜娜,孫雨浩,魏健

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部 臨床醫(yī)學(xué)系,山東 青島 266071;2.臨沂市人民醫(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科,山東 臨沂 276600;3.濰坊醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)系,山東 濰坊 262500)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是發(fā)生在鼻咽部黏膜上皮的惡性腫瘤,其發(fā)病位置隱蔽、惡性程度高、常呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移,被發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)處于中晚期。其中15～45歲年齡組5年生存率為72%,而65～74歲年齡組僅為36%[1],因此,早期發(fā)現(xiàn)是提高NPC患者生存率的關(guān)鍵。已有大量研究報(bào)道證實(shí)EB病毒與NPC的發(fā)生密切相關(guān)[2], EB病毒血清學(xué)抗體檢測(cè)結(jié)果可為NPC臨床診斷、預(yù)后及隨訪(fǎng)提供理論依據(jù)[3-5]。本研究通過(guò)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)臨沂地區(qū)不同人群EB病毒相關(guān)血清標(biāo)志物Rta蛋白IgG抗體(Rta protein IgG antibody,Rta/lgG)、衣殼抗原IgA抗體(capsid antigen IgA antibody,VCA/lgA)、早期抗原IgA抗體(early antigen IgA antibody,EA/IgA)水平,旨在探討3種抗體聯(lián)合檢測(cè)在NPC篩查中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 資料

選取2019年10月—2022年10月在臨沂市人民醫(yī)院健康管理中心的體檢人群15 873例研究對(duì)象為體檢組,其中男10 256例,女5 617例,年齡9～96歲,平均年齡50.36歲;同期因鼻塞、涕中帶血、耳悶、頸部腫物等鼻咽部相關(guān)癥狀而就診于本院耳鼻咽喉科的1 800例患者為篩查組,其中男962例,女838例,年齡2～92歲,平均年齡46.35歲;同期就診于本院并經(jīng)病理確診為NPC的48例患者為確診組,其中男35例,女14例,年齡8～83歲,平均年齡50.13歲。3組年齡整體呈正態(tài)分布。

1.2 方法

采集每位受試對(duì)象靜脈血3～5 mL,用ELISA法檢測(cè)Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項(xiàng)抗體,均采用同昕生物技術(shù)(北京)有限公司的試劑盒并嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。3項(xiàng)抗體Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA的診斷界值(cut-off值)分別為0.54、0.22、0.40,標(biāo)本吸光度大于診斷界值時(shí)為陽(yáng)性。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果繪制受試者工作曲線(xiàn)(receiver operating curve,ROC)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體陽(yáng)性率的比較行χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果繪制ROC,根據(jù)靈敏度、特異度、Youden指數(shù)、曲線(xiàn)下面積等評(píng)估3種抗體的NPC診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 3組間EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體陽(yáng)性率比較

體檢組、篩查組、確診組3組Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA陽(yáng)性率結(jié)果顯示,確診組的Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA 3項(xiàng)抗體陽(yáng)性率明顯高于篩查組和體檢組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為259.796、185.569、373.484,P均<0.01);對(duì)以上3組抗體陽(yáng)性率進(jìn)行兩組間比較:確診組高于篩查組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為95.918、78.029、136.589,P均<0.01);確診組高于體檢組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為198.823、132.894、297.787,P均<0.01);篩查組要高于體檢組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為76.61、59.850、101.511,P均<0.01)。在總體研究中,VCA/IgA抗體陽(yáng)性率在篩查組和體檢組高于Rta/IgG、EA/IgA(χ2分別為67.823、780.030,P均<0.01),在確診組中VCA/IgA抗體陽(yáng)性率與EA/IgA持平。見(jiàn)表1。

表1 3組患者EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體陽(yáng)性率 [例(%)]

2.2 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果分析

研究發(fā)現(xiàn),確診組48例患者中EB病毒抗體多為2項(xiàng)或3項(xiàng)陽(yáng)性,只有2例患者表現(xiàn)為3項(xiàng)抗體全陰性,其中1例為8歲兒童,另1例為經(jīng)放射治療后37歲女性患者。在確診組中,VCA/IgA、EA/IgA檢測(cè)為陽(yáng)性例數(shù)均為41例,高于Rta/IgG(35例)陽(yáng)性例數(shù)。在篩查組及體檢組中VCA/IgA抗體陽(yáng)性例數(shù),高于EA/IgA、Rta/IgG。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 3組患者Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì) (例)

2.3 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析

將Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA 3項(xiàng)抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)。串聯(lián)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):EA和VCA和Rta均為陽(yáng)性才判斷受試者為陽(yáng)性患者;并聯(lián)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA只要有1項(xiàng)為陽(yáng)性時(shí)就判斷受試者為陽(yáng)性患者。在進(jìn)行串聯(lián)檢測(cè)時(shí)篩查組陰性例數(shù)(1 734例)多于3項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)例數(shù)(1 491、1 313、1 481例),體檢組陰性例數(shù)(15 784例)亦多于3項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)例數(shù)(14 231、12 803、14 292例);并聯(lián)檢測(cè)時(shí)確診組陽(yáng)性例數(shù)(46例)多于3項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)時(shí)陽(yáng)性例數(shù)(35、41、41例),篩查組陽(yáng)性例數(shù)(783例)稍多于3項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)時(shí)陽(yáng)性例數(shù)(309、487、319例),體檢組陽(yáng)性例數(shù)(5 196例)遠(yuǎn)多于3項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)時(shí)陽(yáng)性例數(shù)(1 642、3 070、1 581例)。見(jiàn)表2、3。

表3 3組患者Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析 (例)

2.4 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體診斷價(jià)值評(píng)估

Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體診斷價(jià)值評(píng)估結(jié)果顯示,VCA/IgA、EA/IgA靈敏度相當(dāng),為85.41%;EA/IgA特異度要高于VCA/IgA,為89.24%;Rta/IgG特異度界于兩者之間。當(dāng)VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG此3項(xiàng)抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)時(shí)靈敏度及特異度均得到提高,并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)靈敏度可達(dá)95.83%,串聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)特異度達(dá)99.12%,正確度達(dá)99.01%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于3項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè),而陰性預(yù)測(cè)值無(wú)明顯差異。見(jiàn)表4。

表4 EB病毒3種抗體診斷價(jià)值評(píng)估 [%(例)]

2.5 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體ROC分析

將總體Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果繪制ROC。結(jié)果顯示,由ROC獲得的曲線(xiàn)下面積分別是0.846、0.901、0.916、0.949;Youden指數(shù)分別為0.619、0.653、0.746、0.807;Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項(xiàng)抗體分別對(duì)應(yīng)的診斷界值(cut-off值)分別為0.54、0.22、0.40。由此可見(jiàn),VCA/IgA、EA/IgA診斷效果相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.632,P=0.527),3項(xiàng)抗體聯(lián)合檢測(cè)診斷效能明顯高于Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA任何一項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z值分別為3.277、2.237、2.676,P均<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體聯(lián)合檢測(cè)的ROC比較

3 討論

EB病毒是皰疹病毒科γ亞科成員,其編碼約80個(gè)蛋白質(zhì),擁有眾多抗原表位,主要通過(guò)潛伏感染和裂解感染兩種形式將細(xì)胞感染。當(dāng)EB病毒從潛伏感染變?yōu)榱呀飧腥緯r(shí),就開(kāi)始進(jìn)入立即早期,其可以促使立即早期基因BRLF1、BZLFl產(chǎn)物Rta的表達(dá),然后引發(fā)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng),進(jìn)入裂解周期。而當(dāng)病毒處于裂解性感染時(shí),感染周期中早期抗原EA、衣殼抗原 VCA得到表達(dá)[6]。近年研究發(fā)現(xiàn),EB病毒相關(guān)血清學(xué)標(biāo)志物Rta/IgG、EA/IgA、VCA/IgA抗體可作為NPC篩查、診斷及預(yù)測(cè)的新指標(biāo)[7-11]。目前對(duì)EB病毒相關(guān)抗體的研究主要集中于福建、廣東、廣西等NPC高發(fā)地區(qū),尚無(wú)臨沂地區(qū)此類(lèi)大樣本研究數(shù)據(jù)。本研究樣本量大,使研究數(shù)據(jù)更具代表性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具說(shuō)服力,可以更好地反映臨沂地區(qū)不同人群EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項(xiàng)抗體水平。

本研究結(jié)果顯示在體檢組中VCA/IgA抗體陽(yáng)性率為19.30%,高于Rta/IgG(10.34%)、EA/IgA(9.96%),說(shuō)明VCA/IgA抗體在體檢人群中陽(yáng)性檢出率高于Rta/IgG、EA/IgA,這與王俊霞等[11]研究的鄭州市體檢人群的檢測(cè)結(jié)果一致,張晗等[12]對(duì)北京地區(qū)體檢人群的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。但是臨沂地區(qū)抗體陽(yáng)性率總體高于北京和鄭州,分析其原因可能與地域間的差異有關(guān)。因此,在統(tǒng)一檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)需要根據(jù)當(dāng)?shù)厝巳嚎贵w情況建立適合當(dāng)?shù)厝巳旱暮Y查方法,周勇等[13]研究證實(shí)了這一點(diǎn)。本研究中增加了篩查組的對(duì)照,在篩查組中VCA/IgA抗體陽(yáng)性率為27.06%,高于Rta/IgG(17.17%)、EA/IgA(17.72%),確診組VCA/IgA抗體陽(yáng)性率為85.41%,與EA/IgA(85.41%)持平,均高于Rta/IgG(72.90%),這與張曉琍等[3]研究結(jié)果稍顯不同,可能與確診組樣本量相對(duì)較少有關(guān)。3種抗體聯(lián)合檢測(cè),串聯(lián)時(shí)(Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA均為陽(yáng)性才判斷為受試者為陽(yáng)性)具有較高的特異性(99.12%),并聯(lián)時(shí)(Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA只要有1項(xiàng)為陽(yáng)性時(shí)就判斷受試者為陽(yáng)性)具有較高的靈敏度(95.83%),均高于3項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)。因此,聯(lián)合檢測(cè)也提高了陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及準(zhǔn)確度,這與唐浩能等[7,9,14]研究結(jié)果一致。在分析ROC時(shí)發(fā)現(xiàn)EA/IgA、VCA/IgA曲線(xiàn)下面積分別為0.916、0.901,根據(jù)ROC分析,EA/IgA、VCA/IgA對(duì)NPC的診斷價(jià)值非常高,而3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)AUC為0.949,高于單項(xiàng)檢測(cè),具有更高的診斷價(jià)值。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn),雖然EA/IgA的特異性最高(89.24%),但仍低于蟻雪涵等[15]研究結(jié)果,分析其原因可能與地域間差異及NPC組樣本量有關(guān)。而Rta/IgG的陽(yáng)性率為72.91%,稍低于唐浩能等[7]的研究結(jié)果,這可能與所采用的診斷臨界值差異有關(guān)。在NPC確診組中,有2例患者表現(xiàn)為3項(xiàng)抗體全陰性,其中1例為8歲兒童,另1例為經(jīng)放射治療后37歲女性患者。本研究中兒童NPC患者較少,尚無(wú)法推斷年齡是否為影響EB病毒抗體水平的因素。黃小顏等[16]已研究證實(shí)NPC患者體內(nèi)VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG抗體水平會(huì)隨放射治療時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低,這可以用來(lái)解釋上述1例經(jīng)放射治療后的患者3項(xiàng)抗體均呈陰性的原因。在已確診的48例患者中,有1例是在健康體檢時(shí)檢測(cè)出EB 病毒3項(xiàng)抗體均呈陽(yáng)性,進(jìn)一步行鼻咽鏡及影像學(xué)檢查,并隨訪(fǎng)觀察后經(jīng)病理確診為NPC。因此對(duì)于EB病毒血清學(xué)檢測(cè)呈現(xiàn)抗體陽(yáng)性,尤其3項(xiàng)抗體皆陽(yáng)性者,應(yīng)高度警惕NPC的可能,并定期隨訪(fǎng)。

綜上所述,臨沂地區(qū)NPC發(fā)病與EB病毒密切相關(guān),通過(guò)酶聯(lián)免疫法進(jìn)行EB病VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG抗體聯(lián)合檢測(cè)可提高NPC診斷的靈敏度及特異度,提高NPC檢出率。然而,臨沂地區(qū)屬于NPC低發(fā)區(qū),確診組樣本量相對(duì)較少,所以確診組數(shù)據(jù)還需進(jìn)一步豐富。通過(guò)數(shù)據(jù)比對(duì),進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其規(guī)律,更有利于臨沂地區(qū)NPC的早防早治。