翟少華 劉偉偉 李建龍 張毅 王菊梅

摘?要：隨著21世紀(jì)寵物養(yǎng)殖行業(yè)的高速發(fā)展，以犬和貓為主的寵物臨床腫瘤的患病率亦顯著增加。與經(jīng)濟(jì)動物相比，寵物臨床腫瘤的發(fā)生具有多系統(tǒng)性、多因素性、多形性的表現(xiàn)特征，臨床診斷較為復(fù)雜。因此，對動物醫(yī)學(xué)專業(yè)人才的培養(yǎng)、寵物臨床腫瘤的病理診斷和腫瘤性質(zhì)判定技能的掌握，需要對寵物腫瘤的病因、臨床表現(xiàn)、診斷方法和治療既作為當(dāng)前動物醫(yī)學(xué)專業(yè)人才培養(yǎng)體系的重要組成部分，也是寵物臨床醫(yī)生培養(yǎng)的重要教學(xué)內(nèi)容，動物醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生和寵物臨床醫(yī)師應(yīng)當(dāng)熟練掌握。本文闡述了寵物腫瘤疾病的發(fā)展趨勢和特點(diǎn)、腫瘤診斷方法以及腫瘤樣本在動物病理學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用，為動物醫(yī)學(xué)專業(yè)教學(xué)和寵物臨床醫(yī)生的培養(yǎng)提供參考。

關(guān)鍵詞：寵物；腫瘤病例；動物腫瘤病理學(xué)；教學(xué)；應(yīng)用

隨著現(xiàn)代人們生活水平的逐步改善，寵物作為伴侶動物已經(jīng)成為人類生活不可分割的重要組成部分。人類對動物關(guān)愛重視程度的增加，也促進(jìn)了寵物行業(yè)的迅猛發(fā)展。臨床獸醫(yī)作為一個為動物提供健康和診斷服務(wù)的行業(yè)，其臨床診療條件和技術(shù)手段也得到了迅速發(fā)展。伴隨著人類對寵物關(guān)愛程度的提高，寵物的生存年齡也顯著延長，致使寵物的腫瘤、心血管疾病、糖尿病、腎衰竭等寵物衰老性疾病的發(fā)病率在臨床上也顯著增加。其中，寵物腫瘤的發(fā)病率最早引起了醫(yī)生的關(guān)注［1］。然而，由于機(jī)體各系統(tǒng)器官腫瘤發(fā)生的復(fù)雜性、多發(fā)性和惡型性，給臨床醫(yī)師在確定腫瘤類型和制訂治療方案方面帶來極大困難。因此，在小動物病理學(xué)教學(xué)過程中將臨床收集的寵物腫瘤案例、標(biāo)本、病理組織切片與動物病理學(xué)課程、臨床醫(yī)生培訓(xùn)相結(jié)合，不僅可以豐富動物病理學(xué)的教學(xué)素材，也可以使學(xué)生更為直接、更為全面地了解和掌握當(dāng)前小動物腫瘤臨床發(fā)病模式，將在動物醫(yī)學(xué)教學(xué)體系中發(fā)揮著重要作用［2］。

1?動物腫瘤病理學(xué)在獸醫(yī)學(xué)中的顯著作用和地位

動物腫瘤病理學(xué)是動物醫(yī)學(xué)教學(xué)體系中的一門新興學(xué)科，是研究寵物腫瘤生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)診斷、病理學(xué)診斷、腫瘤外科治療、腫瘤化療和腫瘤放療技術(shù)在腫瘤診斷的臨床應(yīng)用，對寵物臨床腫瘤特征、癥狀、病理和組織學(xué)特征進(jìn)行系統(tǒng)闡明，為小動物臨床腫瘤的診斷和治療提供依據(jù)［3］。動物病理學(xué)主要是從形態(tài)學(xué)角度對疾病進(jìn)行研究，闡述疾病發(fā)生的病因、發(fā)病機(jī)制、發(fā)病過程，以及機(jī)體在疾病過程中所表現(xiàn)的功能變化、代謝變化、形態(tài)學(xué)變化三者之間的關(guān)系。因此，動物病理學(xué)不僅是學(xué)習(xí)臨床醫(yī)學(xué)的重要基礎(chǔ)，也在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)之間發(fā)揮著重要橋梁作用。臨床醫(yī)學(xué)利用各種臨床診斷、檢測和治療方法來診斷和治療疾病，經(jīng)常需要依靠活體組織檢查、尸體剖檢和動物試驗(yàn)等病理學(xué)研究方法來觀察和研究疾病，提高臨床治療水平［4］。

2?寵物臨床腫瘤疾病的病理診斷方法

近年來，在寵物的臨床病例中，腫瘤的發(fā)病率已成為寵物各種老齡化疾病的首位。研究表明，寵物腫瘤的發(fā)生與遺傳、品種、年齡、性別、內(nèi)分泌系與免疫系統(tǒng)等因素密切相關(guān)［11］。掌握腫瘤的組織病理學(xué)診斷、細(xì)胞化學(xué)染色、免疫組織化學(xué)診斷、電子顯微鏡診斷等重要診斷技術(shù)，對寵物腫瘤能夠進(jìn)行更為精確的診斷和治療。此外，隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展，抗體和血清檢測技術(shù)也可以顯著提高臨床腫瘤診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。

腫瘤的病理組織學(xué)診斷是區(qū)分腫瘤的組織學(xué)類型和腫瘤的性質(zhì)（良性和惡性）重要的判定依據(jù)。并根據(jù)腫瘤的組織學(xué)特征對腫瘤的分化程度進(jìn)行分級判定，如劃分為低分化和高分化（如乳腺腫瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的臨床分級），以判定腫瘤的低分化或者高分化程度及其對機(jī)體所產(chǎn)生影響。此外，病理組織學(xué)診斷還可以確定腫瘤侵害的程度，如消化道腫瘤。腫瘤侵襲消化道的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)決定了腫瘤的分期和大小，以及是否有血管和淋巴管的侵襲或轉(zhuǎn)移。此外，病理組織學(xué)診斷還可以確定腫瘤手術(shù)切口邊緣是否被完全切除，以及手術(shù)復(fù)發(fā)的程度［5］。

細(xì)胞化學(xué)是組織學(xué)的一個分支，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查細(xì)胞的生化成分、定位、定量和代謝功能狀態(tài)。細(xì)胞化學(xué)染色主要用于臨床實(shí)踐，幫助確定腫瘤結(jié)構(gòu)、組織成分、腫瘤細(xì)胞和炎癥細(xì)胞類型。在病理?xiàng)l件下，血細(xì)胞中的化學(xué)物質(zhì)組成和含量發(fā)生的變化，有助于對疾病的鑒別與診斷；病理狀況得到糾正后，血細(xì)胞中化學(xué)物質(zhì)的組成和含量會發(fā)生變化。細(xì)胞化學(xué)染色方法有多種，包括過氧化物酶染色、蘇丹黑B染色、酯酶染色和骨髓鐵染色。目前，上述著色方法也已被開發(fā)用于對同一樣本進(jìn)行雙重著色，這可以提高診斷的準(zhǔn)確性［6］。

免疫組織化學(xué)診斷是指抗原和抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)，將熒光或可染色化學(xué)物質(zhì)與抗體結(jié)合，并利用免疫學(xué)原理檢測細(xì)胞或組織中靶抗原的存在。免疫組織化學(xué)診斷可利用抗原和抗體的特異性結(jié)合來判定腫瘤的來源、特性、分化程度的較為準(zhǔn)確可靠的技術(shù)手段，也是臨床病理學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)［7］。通常，我們只有通過病理檢查才能確定患病動物是否患有惡性腫瘤，在確定惡性腫瘤后，對于腫瘤的類型和分化程度，需要免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行診斷。而提高使用特定的腫瘤標(biāo)志物來篩選腫瘤，這在臨床實(shí)踐中被廣泛使用。免疫組織化學(xué)染色診斷可用于惡性腫瘤的診斷和鑒別診斷，也可用于特定腫瘤類型的進(jìn)一步病理分類，還可確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)位置判定。

透射電子顯微鏡腫瘤診斷技術(shù)，打破了低分辨普通光學(xué)顯微鏡的局限性，提高細(xì)胞生物學(xué)結(jié)構(gòu)改變診斷疑難腫瘤的重要技術(shù)工具。在光學(xué)顯微鏡下難以明確診斷的非色素瘤、嗜酸性腫瘤、肌源性腫瘤、軟組織腺泡肉瘤和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，主要通過超微結(jié)構(gòu)的精細(xì)觀察來尋找組織細(xì)胞的分化標(biāo)志物，可以在電子顯微鏡下明確診斷，并對相應(yīng)腫瘤類型進(jìn)行診斷和鑒別［8］。不同組織類型的細(xì)胞都有其獨(dú)特的超微結(jié)構(gòu)，即便是低分化的腫瘤細(xì)胞在很大程度上，也能夠保留同源細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)狀態(tài)。基于這些狀態(tài)，電子顯微鏡可以用于診斷和鑒別腫瘤細(xì)胞的組織類型和分化程度。如常見的鱗狀細(xì)胞的原纖維和橋粒；腺上皮細(xì)胞的復(fù)合物和微絨毛；條紋肌細(xì)胞中的肌原纖維；平滑肌細(xì)胞的肌絲。

隨著腫瘤抗體檢測技術(shù)的快速發(fā)展，越來越多的研究表明，腫瘤患者血清中存在不同類型的細(xì)胞自身抗原抗體。這些與腫瘤發(fā)展相關(guān)的抗原被稱為腫瘤相關(guān)抗原［9］。血清中腫瘤相關(guān)抗原抗體的檢測可用于腫瘤的早期診斷和預(yù)后評估。例如，癌癥患者中抑癌基因p53的突變率高達(dá)37%，蛋白質(zhì)的構(gòu)象的改變可以引起機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生抗p53的自身抗體。研究表明，在肝癌病例中，p53抗體的檢測率明顯高于甲胎蛋白，大多數(shù)甲胎蛋白陽性患者（83.3%）都能檢測到p53抗體，因此p53抗體不但可以作為額外的腫瘤標(biāo)志物，還能提高甲胎蛋白的診斷價(jià)值［10］。

3?腫瘤病理標(biāo)本在“動物腫瘤病理學(xué)”教學(xué)中的應(yīng)用

在動物腫瘤的教學(xué)過程中，應(yīng)針對腫瘤在機(jī)體各系統(tǒng)臟器中的腫瘤特有的形態(tài)、生長方式、侵害部位和轉(zhuǎn)移特點(diǎn)進(jìn)行闡述。因此，在腫瘤教學(xué)中，我們將采集的寵物腫瘤標(biāo)本、病理組織學(xué)切片、典型臨床腫瘤案例與“動物腫瘤病理學(xué)”理論和實(shí)驗(yàn)教學(xué)有機(jī)結(jié)合，使學(xué)生能夠更直觀、更全面地了解腫瘤的生物學(xué)狀態(tài)，為臨床腫瘤診斷打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

動物腫瘤大體標(biāo)本的觀察識別是“動物腫瘤病理學(xué)”實(shí)驗(yàn)教學(xué)中最重要的方法之一。動物標(biāo)本是最生動、最直觀的教學(xué)工具，可以直觀、形象地展示動物機(jī)體腫瘤的形態(tài)結(jié)構(gòu)；也可以幫助學(xué)生學(xué)習(xí)辨別寵物形態(tài)特征，使學(xué)生更直接地理解形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能之間的內(nèi)在關(guān)系，加深學(xué)生對寵物與環(huán)境引發(fā)腫瘤關(guān)系的理解。這也是傳統(tǒng)教學(xué)方法無法實(shí)現(xiàn)的［12］。寵物臨床案例與動物病理學(xué)的結(jié)合，與以往的教學(xué)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：改變了動物病理學(xué)傳統(tǒng)的教學(xué)模式，讓學(xué)生由被動學(xué)習(xí)變?yōu)橹鲃訁⑴c，激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和學(xué)習(xí)熱情，活躍了課堂氣氛，增強(qiáng)了師生之間的互動交流。

作為臨床腫瘤病理診斷的一部分，我們不斷收集典型的腫瘤材料，并根據(jù)系統(tǒng)器官典型的腫瘤制備教學(xué)樣本。學(xué)生通過腫瘤標(biāo)本的觀察，加深學(xué)生對課堂知識的理解，充分調(diào)動學(xué)生的主觀能動性，這對“動物腫瘤病理學(xué)”課程的實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革具有十分重要的意義。動物病理學(xué)標(biāo)本的開放式教學(xué)提高了實(shí)驗(yàn)教學(xué)的有效性，提高了學(xué)生知識的綜合應(yīng)用，有效地培養(yǎng)了學(xué)生的專業(yè)興趣和創(chuàng)新思維［13］。

在“動物腫瘤病理學(xué)”課程實(shí)驗(yàn)部分，增加以寵物腫瘤為主的病理組織切片應(yīng)用于教學(xué)中，既可以豐富病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容，又符合當(dāng)前動物醫(yī)學(xué)臨床以寵物腫瘤病理最為多見的實(shí)際情況［14］。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中，我們根據(jù)系統(tǒng)器官選擇了寵物腫瘤的典型病理組織，并制作了教學(xué)切片，包括皮膚的10個腫瘤組織（毛母細(xì)胞瘤、纖維瘤）、消化系統(tǒng)（平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤）、生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)（復(fù)合性乳腺癌癥、卵巢癌癥）、呼吸系統(tǒng)（鱗狀細(xì)胞癌），通過病理組織切片判讀，可以確定腫瘤的組織來源、腫瘤組織結(jié)構(gòu)、腫瘤實(shí)質(zhì)和間質(zhì)組成特征、腫瘤細(xì)胞分化程度、腫瘤惡性程度、腫瘤轉(zhuǎn)移以及手術(shù)切口邊緣判定腫瘤切除的完整性，腫瘤診斷與定性為臨床治療指明方向。為了使學(xué)生掌握腫瘤病理切片的判讀和診斷能力，我們將切片解讀作為“動物病理學(xué)”實(shí)驗(yàn)考核部分，并將其引入學(xué)生知識競賽，以實(shí)現(xiàn)“以賽促學(xué)、以考促學(xué)”的學(xué)習(xí)目的。這不僅訓(xùn)練了對病理學(xué)知識的掌握，而且提高了其臨床適用性，是寵物臨床醫(yī)師必須具備的診斷技能［15］。

臨床案例與理論教學(xué)相結(jié)合，臨床實(shí)踐與課堂教學(xué)相結(jié)合，是當(dāng)前高校本科生課程改革的重點(diǎn)。本著學(xué)以致用，理論聯(lián)系實(shí)際的教學(xué)目的，我們將收集到的典型動物腫瘤案例與“動物腫瘤病理學(xué)”的理論知識點(diǎn)相結(jié)合。一方面，學(xué)生可以通過生動的案例演示使學(xué)生更好理解和掌握重要知識點(diǎn)；另一方面，能夠使學(xué)生將他們所學(xué)的知識與臨床實(shí)踐相結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)學(xué)以致用、活學(xué)活用，多方式、多角度增強(qiáng)學(xué)生的實(shí)踐能力。例如，有一只11歲的松獅犬，出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退、不愿運(yùn)動，腹部異常腫大，右側(cè)第四乳頭皮下結(jié)節(jié)性乳房腫塊。經(jīng)臨床X射線影像顯示犬腹腔出現(xiàn)的高密度與低密度交織的異常影像。經(jīng)手術(shù)腹部切開，發(fā)現(xiàn)犬體內(nèi)雙側(cè)卵巢腫大（左側(cè)20×10×8cm、右側(cè)8×5×4cm），小腸外壁出現(xiàn)囊腫（12×8×6cm），左側(cè)乳房有腫塊（5×3×3cm）。該松獅犬同時(shí)在不同的組織器官相繼出現(xiàn)4個病理性腫塊是典型的“多瘤癥”的病理表現(xiàn)。通過手術(shù)分離的4個腫瘤組織經(jīng)病理診斷，結(jié)果為左卵巢梭形細(xì)胞肉瘤、右卵巢囊腫、小腸梭形細(xì)胞瘤和乳腺管癌。因此，結(jié)合上述臨床案例，當(dāng)講述“多瘤癥”的知識點(diǎn)時(shí)，可以更生動地將理論知識與臨床實(shí)踐相結(jié)合，將案例法與課堂教學(xué)相結(jié)合，學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣濃厚，改變了以往教學(xué)中缺少實(shí)物或案例，部分知識點(diǎn)學(xué)生不理解或印象不深刻的弊端，也激發(fā)了學(xué)生對臨床醫(yī)學(xué)學(xué)習(xí)興趣，以及對專業(yè)的熱愛程度也顯著提高。

通過臨床案例與理論教學(xué)相結(jié)合的教學(xué)方法，有利于培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性，鍛煉學(xué)生分析問題和解決問題的能力，以及邏輯思維能力，能較顯著提高學(xué)生的臨床診斷能力和綜合素質(zhì)能力。實(shí)現(xiàn)了培養(yǎng)高素質(zhì)動物醫(yī)學(xué)專門人才的需要，但還應(yīng)在今后的教學(xué)實(shí)踐中，不斷積極探索更加符合現(xiàn)代動物醫(yī)學(xué)發(fā)展的教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法和教學(xué)手段，確保教學(xué)質(zhì)量不斷提高。

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項(xiàng)目基金：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)教研教改項(xiàng)目——教學(xué)質(zhì)量提升項(xiàng)目

作者簡介：翟少華（1981—?），男，漢族，黑龍江雞西人，碩士研究生，副教授，研究方向：分子與免疫病理學(xué)；劉偉偉（1991—?），女，漢族，河南淮陽人，本科，助理講師，研究方向：教學(xué)與實(shí)驗(yàn)室管理。