劉永建，劉 浩，李華爽，楊宇萍，劉永剛

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 100029

駱駝蓬PaganumharmalaL.是蒺藜科駱駝蓬屬多年生草本植物，在我國廣泛分布于新疆、內(nèi)蒙古西部、陜西、甘肅、寧夏等地區(qū)，在美國、印度、非洲和伊朗的干旱和半干旱地區(qū)亦有分布。該植物的種子和全草均可入藥，是我國維吾爾族、哈薩克族和蒙古族等民族沿用已久的民族藥物，其種子的藥用成分較高，經(jīng)常被用于治療消化道癌癥、感冒、風(fēng)濕病、瘧疾、健忘癥和一些皮膚病等。現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗腫瘤、消炎鎮(zhèn)痛、驅(qū)蟲殺菌等作用[1]。種子中富含生物堿，主要為β-卡波林（βcarboline）和喹唑啉（quinazoline）類，例如去氫駱駝蓬堿（harmine）、駱駝蓬堿（harmaline）、鴨嘴花堿（vasicine）、脫氧鴨嘴花堿（deoxyvasicine）等[2]。駱駝蓬種子中，總生物堿量為3.2%～7.7%，主要含去氫駱駝蓬堿與駱駝蓬堿（圖1），也有文獻(xiàn)報(bào)道二者在干燥種子中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4.3%和5.6%，另外包含駱駝蓬酚（harmalol）0.6%，四氫駱駝蓬堿（tetrahydroharmine）0.1%[3-4]。駱駝蓬子生物堿有著廣泛的藥理作用，例如抗腫瘤[5]、抗菌[6]、抗病毒[7]、抗抑郁[8]、抗阿爾茨海默[9]、鎮(zhèn)痛[10]等。

圖1 去氫駱駝蓬堿 (左) 與駱駝蓬堿 (右) 的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of harmine (left) and harmaline (right)

為了進(jìn)一步探究駱駝蓬子生物堿的活性成分，本研究從駱駝蓬子醇提-酸溶堿沉后的總生物堿中分離得到了12 個(gè)化合物，分別為1-甲基-2-甲氧甲基-7-甲氧基-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鹽酸鹽（7-methoxy-2-(methoxymethyl)-1-methyl-9H-pyrido[3,4-b]indol-2-ium chloride，1），對苯二甲酸二(2-乙基)己酯 [bis(2-ethylhexyl) terephthalate，2]，鴨嘴花酮堿（vasicione，3）、鴨嘴花堿（vasicine，4）、harmalanine（5）、去氫駱駝蓬堿（harmine，6）、哈爾滿（harmane，7）、哈爾酚（harmol，8）、norharmane（9）、駱駝蓬堿（ harmaline ， 10 ）、 四氫駱駝蓬堿（tetrahydroharmine，11）、駱駝蓬酚（harmalol，12）。其中化合物1 為新發(fā)現(xiàn)的化合物，命名為氮雜縮醛去氫駱駝蓬堿A（圖2）?；衔? 為非生物堿，從駱駝蓬植物中首次分離得到（圖2）?；衔?、2 及5 對HCT116 細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）分別為（88.49±4.65）、（113.91±12.19）、（36.41±1.91）μmol/L。

圖2 化合物1、2 和5 的結(jié)構(gòu)Fig.2 Structures of compounds 1, 2 and 5

1 儀器與材料

BT224S 型十萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）；AVANCE NEO 400/600 型核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；UPLC-MS（美國賽默飛世爾科技公司）；SpectraMax i3x 型酶標(biāo)儀（美國BioTek 公司）；SW-CJ-2FD（標(biāo)準(zhǔn)型）雙人單面凈化工作臺（蘇州博萊爾凈化設(shè)備有限公司）；Series Ⅱ型二氧化碳培養(yǎng)箱、Revco PLUS 型-80 ℃低溫冰箱（美國Thermo 公司）；FC5515R 型高速低溫離心機(jī)（美國Ohaus 公司）；磁力攪拌器（冠森生物科技有限公司）；96 孔板（美國Corning Incorporated 公司）。

分析純醋酸乙酯、石油醚、二氯甲烷、甲醇（北京化工廠）；95%溴甲基甲基醚、65%順鉑（上海麥克林生化科技股份有限公司）；柱色譜硅膠（200～300 目）、GF254硅膠薄層色譜板（青島海洋化工廠）；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（美國GE 公司）；CCK-8 試劑盒、磷酸緩沖鹽溶液、胎牛血清（FBS）、鏈霉素-青霉素雙抗（PS）、高糖DMEM 培養(yǎng)基（美國Corning Incorporated 公司）；胰蛋白酶（美國Sigma公司）；HCT116 細(xì)胞來自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。

駱駝蓬子購自新疆，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉永剛教授鑒定為蒺藜科植物駱駝蓬P.harmalaL.的種子。

2 方法

2.1 提取與分離

取駱駝蓬種子4.8 kg，經(jīng)過粉碎機(jī)高速粉碎，用80%乙醇溫浸，濾過后減壓濃縮得到浸膏1.5 kg。于浸膏中加入5%鹽酸調(diào)pH 值為2～3，過夜，濾過。濾液用氨水調(diào)pH 值至11～12，靜置后抽濾，得到總堿333.4 g。總堿經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（1∶0→0∶1）梯度洗脫。收集二氯甲烷-甲醇（1∶0）的洗脫液，得到流分Fr. 1（1.4 g）。收集二氯甲烷-甲醇（100∶1）的洗脫液，得到流分Fr. 8（3.8 g）。收集80∶1～30∶1 的藍(lán)色熒光部分，得到流分Fr. 17（98.0 g）。繼續(xù)收集20∶1～8∶1 的洗脫液，在紫外燈下為綠色熒光，得到流分Fr. 20（103.0 g）。

Fr. 1 經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-二氯甲烷（1∶1）為洗脫劑，得到化合物2（20.0 mg）。Fr. 8經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（80∶1）為洗脫劑，收集254 nm 有熒光斑點(diǎn)但365 nm 下無熒光斑點(diǎn)的流分Fr. 8.1，經(jīng)甲醇重結(jié)晶，得到化合物3（210.0 mg）。繼續(xù)收集洗脫液，得到365 nm 下強(qiáng)藍(lán)色熒光流分Fr. 8.2，經(jīng)Sephadex LH-20 進(jìn)一步分離，以甲醇為洗脫劑，得到化合物5（7.1 mg）。Fr.17 經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（60∶1→30∶1）梯度洗脫，得到3 個(gè)流分Fr. 17-1～17-3。Fr. 17-1 經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物6（25.0 g）。Fr. 17-2 繼續(xù)用硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-二乙胺（150∶1）洗脫，得到化合物6（39.0 g）與流分Fr. 17-2-2。Fr. 17-2-2 經(jīng)硅膠制備薄層分離，以二氯甲烷-甲醇（9∶1）為展開劑得到化合物7（2.1 mg）和1（8.0 mg）。Fr. 17-3 經(jīng)Sephadex LH-20 分離，用甲醇-水（4∶1）洗脫，得到化合物9（1.1 mg）和4（0.9 mg）。Fr. 20 經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（15∶1→10∶1）為洗脫劑，得到流分Fr.20-1～20-3。Fr. 20-1 經(jīng)硅膠制備薄層分離，以二氯甲烷-甲醇（8∶1）展開得到化合物8（10.6 mg）。Fr. 20-2 經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇-二乙胺（100∶1∶1）為洗脫劑，得到流分Fr. 20-2-1 和Fr. 20-2-2。Fr. 20-2-1 再次經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（10∶1）為洗脫劑，洗脫液減壓濃縮后以甲醇重結(jié)晶得化合物10（72.0 g）。Fr. 20-3 經(jīng)ODS 柱色譜分離，以甲醇-水（1∶1）洗脫得化合物11（30.0 mg）。Fr. 20-2-2 經(jīng)硅膠制備薄層分離，展開缸氨水飽和后，以二氯甲烷-甲醇（15∶1）展開得化合物12（3.0 mg）。

2.2 化合物1（氫溴酸鹽）的合成

參考去氫駱駝蓬堿常用的2 位成鹽修飾[11]。將1 mmol（212.2 mg）去氫駱駝蓬堿溶解于50 mL 醋酸乙酯中，再加入20 mmol（2.63 g）溴甲基甲基醚，90 ℃回流12 h，TLC 跟蹤。反應(yīng)完成后，停止回流，反應(yīng)液冷卻，過濾，適量醋酸乙酯洗滌。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（5∶1）洗脫，減壓濃縮后得到白色晶體為化合物1 的氫溴酸鹽（219.18 mg），收率為65%。

2.3 HCT116 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，加入胰蛋白酶消化，待完全消化后，加入DMEM 完全培養(yǎng)基終止消化，移入無菌離心管，離心5 min（轉(zhuǎn)速為3 000 r/min）后棄上清，加入2 mL 完全培養(yǎng)基，制備細(xì)胞混懸液。將細(xì)胞懸液充分吹打均勻后，取20 μL 細(xì)胞懸液加入到細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)，并用DMEM 完全培養(yǎng)基將細(xì)胞懸液的濃度稀釋到1×105/mL，種入96 孔板中，每孔加入細(xì)胞混懸液100 μL。置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24 h 細(xì)胞貼壁后，加入相應(yīng)劑量的藥物刺激，設(shè)定7～8 個(gè)濃度梯度。在藥物刺激24 h 后，吸出藥物與培養(yǎng)基，將CCK-8 與DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基按照1∶9 混合，96 孔板每孔加入100 μL CCK-8 稀釋液，孵育0.5～1.5 h 后，用全波長酶標(biāo)儀檢測各孔在450 nm波長下的吸光度（A）值，以不加藥A值在1 左右時(shí)終止孵化，每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3 次。按照公式計(jì)算不同濃度梯度下的細(xì)胞存活率，以Graphpad Prism 9 軟件計(jì)算IC50。

細(xì)胞存活率＝(As-Ab)/(Ac-Ab)As為實(shí)驗(yàn)孔吸光度（含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液）；Ac為對照孔吸光度（含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含藥物）；Ab為空白孔吸光度（含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含細(xì)胞、藥物）

3 結(jié)果

3.1 提取化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：淡黃色粉末，HR-ESI-MSm/z:257.128 27 [M-Cl]+（計(jì)算值為257.128 45），分子式為C15H17N+2O2Cl-。質(zhì)譜二級碎片m/z213.102 16提示結(jié)構(gòu)可能為去氫駱駝蓬堿母核。氘代甲醇?xì)渥V中δH8.25、7.17 及7.08 為去氫駱駝蓬堿苯環(huán)ABX偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號，δH8.54 及8.36 的偶合常數(shù)J=6.5 Hz 為吡啶環(huán)H-3 與H-4 特征偶合，1H-1H COSY驗(yàn)證了上述鄰位偶合關(guān)系（圖3），同時(shí)結(jié)合碳譜數(shù)據(jù)可確定此母核。與去氫駱駝蓬堿（化合物6）氫碳信號相比，多了2 個(gè)氫信號δH3.46 (3H)及5.86(2H)，2 個(gè)碳信號δC57.7 與87.2，推測存在-OCH3及-N-CH2-O-。氘代氯仿氫譜δH13.91 提示存在1 個(gè)活潑氫，為N-9 位活潑氫。綜上推測-N-CH2-O-的N為N-2 位。HMBC (CDCl3) 中質(zhì)子δH5.86 (H-16) 與δC130.9 (C-3) 和139.1 (C-1) 以及甲氧基δC57.7 (C-17) 相關(guān)，可確定甲氧基甲基側(cè)鏈連在N-2 位上（圖3）。因譜圖中未見其它含碳陰離子，而提取方法為鹽酸提取，所以陰離子推斷為氯離子。故該化合物鑒定為1-甲基-2-甲氧甲基-7-甲氧基-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鹽酸鹽，經(jīng)SciFinder 檢索，為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，命名為氮雜縮醛去氫駱駝蓬堿A（azaacetal harmine A）。其NMR 數(shù)據(jù)歸屬見表1。另外，“2.2”項(xiàng)進(jìn)行了合成驗(yàn)證，數(shù)據(jù)見“3.2”項(xiàng)。

表1 化合物1 的1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù) (400/600/100 MHz)Table 1 1H-and 13C-NMR data of compound 1 (400/600/100 MHz)

圖3 化合物1 的的關(guān)鍵1H-1H COSY、HMBC 相關(guān)信號Fig.3 Key 1H-1H COSY and HMBC correlations of compound 1

化合物 2：黃色油狀物，HR-ESI-MSm/z:391.283 91 [M＋H]+，分子式為C24H38O4。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 8.08 (4H, s, H-2, 3, 5, 6), 4.30～4.19 (4H, m, H-1', 1″), 1.71 (2H, m, H-2', 2″), 1.49～1.41 (4H, m, H-3', 3″), 1.41～1.30 (12H, m, H-4', 4″,5', 5″, 7', 7″), 0.93～0.86 (12H, m, H-6', 6″, 8', 8″)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 166.0 (C=O), 134.3(C-1, 4), 129.6 (C-2, 3, 5, 6), 67.8 (C-1', 1″), 39.0 (C-2', 2″), 30.7 (C-3', 3″), 29.1 (C-4', 4″), 24.1 (C-7', 7″),23.1 (C-5', 5″), 14.1 (C-7', 7″), 11.2 (C-8', 8″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比基本一致[12]，鑒定化合物2 為對苯二甲酸二(2-乙基)己酯。

化合物3：白色晶體（甲醇），ESI-MSm/z:203.081 3 [M＋H]+，分子式為C11H10N2O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 8.42～8.15 (1H, m, H-8), 7.87-7.67 (2H, m, H-5, 6), 7.49 (1H, m, H-7), 5.26 (1H, td,J= 7.0, 2.2 Hz, H-3), 4.37 (1H, m, H-1a), 4.04 (1H, m,H-1b), 2.88～2.54 (1H, m, H-2a), 2.44～2.14 (1H, m,H-2b)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3)δ: 160.7 (C-3a),160.6 (C-9), 148.6 (C-4a), 134.6 (C-6), 127.1 (C-7),126.8 (C-8), 126.7 (C-5), 121.1 (C-8a), 71.9 (C-3), 43.6(C-1), 29.5 (C-2)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)比對基本一致[13]，鑒定化合物3 為鴨嘴花酮堿。

化合物4：白色晶體（甲醇），ESI-MSm/z:189.198 1 [M＋H]+，分子式為C11H12N2O。1H-NMR(600 MHz, CD3OD)δ: 7.39～7.32 (1H, m, H-5), 7.28(1H, td,J= 7.5, 1.3 Hz, H-6), 7.21 (1H, d,J= 7.7 Hz,H-7), 7.19～7.10 (1H, m, H-8), 5.12 (1H, t,J= 8.1 Hz,H-3), 4.87 (2H, m, H-9), 3.76 (1H, m, H-1α), 3.67 (1H,dt,J= 10.8, 7.8 Hz, H-1β), 2.66 (1H, dtd,J= 13.0, 7.6,2.5 Hz, H-2α), 2.12 (1H, dq,J= 12.9, 8.5 Hz, H-2β)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 164.8 (C-3a), 132.2(C-4a), 130.5 (C-6), 128.5 (C-8), 128.3 (C-7), 118.3 (C-8a), 118.2 (C-5), 72.6 (C-3), 52.0 (C-9), 47.5 (C-1),30.9 (C-2)。以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對基本一致[13]，鑒定化合物4 為鴨嘴花堿。

化合物5：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 267.112 6[M＋H]+，分子式為C16H14N2O2。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 8.24 (1H, s, H-1), 7.46 (1H, d,J= 8.5 Hz,H-9), 7.33 (1H, dd,J= 8.9, 7.0 Hz, H-15), 6.87 (1H, s,H-12), 6.83 (1H, dd,J= 8.7, 2.3 Hz, H-10), 6.48 (1H,d,J= 8.9 Hz, H-16), 6.24 (1H, d,J= 7.0 Hz, H-14),4.44 (2H, t,J= 6.9 Hz, H-5), 3.87 (3H, s, H-18), 3.07(2H, t,J= 7.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 163.8 (C-17), 157.9 (C-11), 138.6 (C-13), 135.6 (C-15), 120.5 (C-9), 118.0 (C-16), 115.6 (C-7), 111.2 (C-10), 98.9 (C-14), 94.8 (C-12), 55.8 (C-18), 40.4 (C-5)。以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[14]，鑒定化合物5 為harmalanine。

化合物6：淡黃色針狀晶體（甲醇），ESI-MSm/z:213.192 0 [M＋H]+，分子式為C13H12N2O。1H-NMR(400 MHz, CD3OD)δ: 8.10 (1H, d,J= 5.5 Hz, H-3),7.98 (1H, d,J= 8.7 Hz, H-5), 7.79 (1H, d,J= 5.5 Hz,H-4), 7.04 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-8), 6.87 (1H, dd,J=8.7, 2.3 Hz, H-6), 3.91 (3H, s, H-15), 2.77 (3H, s, H-14)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 162.6 (C-7),144.2 (C-1), 142.1 (C-13), 138.0 (C-3), 136.3 (C-10),130.2 (C-11), 123.5 (C-5), 116.4 (C-12), 113.3 (C-4),110.9 (C-6), 95.4 (C-8), 56.0 (C-15), 19.5 (C-14)。所得化合物的波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[15]，鑒定化合物6 為去氫駱駝蓬堿。

化合物7：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 183.028 5[M＋H]+，分子式C12H10N2。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 8.38 (1H, d,J= 6.1 Hz, H-3), 8.12 (1H, d,J= 8.9 Hz, H-5), 7.83 (1H, d,J= 6.1 Hz, H-4), 7.55(2H, m, H-7, 8), 7.30 (1H, m, H-6), 2.84 (3H, s, H-14)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3)δ: 141.8 (C-1), 140.1 (C-13), 138.8 (C-3), 134.6 (C-10), 128.3 (C-11), 128.2 (C-7), 122.1 (C-12), 121.9 (C-5), 120.1 (C-6), 112.9 (C-4),111.6 (C-8), 20.4 (C-14)。以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[16]，鑒定化合物7 為哈爾滿。

化合物8：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 199.101 8[M＋H]+，分子式為C12H10N2O。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 8.08 (1H, d,J= 5.5 Hz, H-3), 7.92 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-5), 7.77 (1H, d,J= 5.4 Hz, H-4), 6.92(1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.77 (1H, dd,J= 8.5, 2.1 Hz,H-6), 2.75 (3H, s, H-14)；13C-NMR (100 MHz, DMSOd6)δ: 158.7 (C-7), 142.7 (C-13), 141.4 (C-1), 138.1 (C-3), 134.9 (C-10), 128.0 (C-11), 123.0 (C-5), 114.3 (C-12), 112.1 (C-4), 110.1 (C-6), 97.1 (C-8), 20.7 (C-14)。以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對基本一致[17]，鑒定化合物8 為哈爾酚。

化合物9：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 169.165 6[M＋H]+，分子式為C11H8N2。1H-NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ: 12.50 (1H, s, N-H), 9.19 (1H, s, H-1),8.60 (1H, d,J= 5.8 Hz, H-3), 8.52 (1H, d,J= 5.9 Hz,H-4), 8.44 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5), 7.79～7.74 (1H, m,H-8), 7.74～7.70 (1H, m, H-7), 7.39 (1H, ddd,J= 8.0, 6.8,1.1 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 142.7(C-12), 135.0 (C-3), 131.7 (C-1), 131.5 (C-10), 130.6 (C-11), 128.8 (C-12), 123.0 (C-7), 120.7 (C-5), 119.7 (C-6),116.6 (C-4), 112.7 (C-8)。所得化合物的波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[18]，鑒定化合物9 為norharmane。

化合物10：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 215.117 7[M＋H]+，分子式為C13H14N2O。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 12.56 (1H, s, -NH), 7.44 (1H, dd,J= 9.1, 2.6 Hz, H-5), 7.07 (1H, s, H-8), 6.83 (1H, dd,J= 9.1, 2.4 Hz, H-6), 3.91 (2H, t,J= 8.8 Hz, H-3), 3.85 (3H, d,J=2.6 Hz, H-15), 3.17 (2H, td,J= 9.0, 8.6, 2.5 Hz, H-4),3.06～3.00 (3H, m, H-14)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 157.6 (C-1), 157.2 (C-7), 138.0 (C-13),129.0 (C-11), 120.3 (C-10), 119.9 (C-5), 115.0 (C-12),110.7 (C-6), 95.0 (C-8), 55.6 (C-15), 48.1 (C-3), 22.5(C-14), 19.6 (C-4)。以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[19]，鑒定化合物10 為駱駝蓬堿。

化合物11：灰白色粉末，ESI-MSm/z: 217.243 5[M＋H]+，分子式為C13H16N2O。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 10.48 (1H, s, -NH), 7.20 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5), 6.78 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-8), 6.59 (1H, dd,J= 8.6, 2.3 Hz, H-6), 3.96 (1H, q,J= 6.8 Hz, H-1), 3.73(3H, s, H-15), 3.12 (1H, dt,J= 12.5, 4.5 Hz, H-3), 2.80(1H, ddd,J= 12.9, 8.6, 4.9 Hz, H-4a), 2.63～2.52 (1H,m, H-4b), 1.32 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-14)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ: 155.0 (C-7), 137.0 (C-13),136.2 (C-10), 121.6 (C-12), 117.9 (C-5), 107.7 (C-6),106.5 (C-11), 94.6 (C-8), 55.2 (C-15), 47.8 (C-1), 42.2(C-3), 22.5 (C-4), 20.6 (C-14)。以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[19]，鑒定化合物11 為四氫駱駝蓬堿。

化合物12：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 201.127 6[M＋H]+，分子式為C12H12N2O。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 11.86 (1H, s, -NH), 9.96 (1H, s, -OH),7.50 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-5), 6.82 (1H, s, H-8), 6.70(1H, d,J= 8.8 Hz, H-6), 3.75 (2H, t,J= 8.7 Hz, H-4),2.99 (2H, t,J= 8.7 Hz, H-3), 2.53 (3H, s, H-14)；13CNMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 164.4 (C-1), 159.1 (C-7), 142.9 (C-13), 125.4 (C-10), 123.1 (C-11), 118.2 (C-12), 114.2 (C-6), 96.2 (C-8), 41.8 (C-3), 19.1 (C-14),18.5 (C-4)。以上譜數(shù)據(jù)經(jīng)文獻(xiàn)比對一致[20]，鑒定化合物12 為駱駝蓬酚。

3.2 合成化合物1（氫溴酸鹽）的鑒定

化合物1（氫溴酸鹽）：白色晶體（甲醇），HRESI-MSm/z: 257.128 30 [M-Br]+，分子式為C15H17N+2O2Br-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 8.54(1H, d,J= 6.6 Hz, H-3), 8.35 (1H, d,J= 6.7 Hz, H-4),8.25 (1H, m, H-5), 7.17 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-8), 7.06(1H, dd,J= 8.9, 2.6 Hz, H-6), 5.99 (2H, s, H-16), 3.99(3H, s, H-15), 3.48 (3H, s, H-17), 3.15 (3H, s, H-14)。其質(zhì)譜、氫譜數(shù)據(jù)與化合物1 的相同。去氫駱駝蓬堿的2 位成鹽修飾較為常見，所以通過比對分離的天然化合物1 及合成化合物的質(zhì)譜、氫譜亦可輔助驗(yàn)證化合物1 的結(jié)構(gòu)推測。

3.3 HCT116 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

HCT116 細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)抑制結(jié)果（表2）顯示，3 個(gè)化合物在一定濃度下均具有一定的抗癌活性。化合物1、2、5 的IC50（24 h）分別為（88.49±4.65）、（113.91±12.19）、（36.41±1.91）μmol/L。陽性藥順鉑的IC50為（6.63±0.22）μmol/L。

表2 化合物1、2、5 對HCT116 細(xì)胞的IC50Table 2 IC50 of compounds 1, 2 and 5 on HCT116 cells

4 討論

本研究通過對駱駝蓬子醇提-酸溶堿沉的總生物堿進(jìn)行分離，得到了12 個(gè)化合物。化合物1 為新化合物，而化合物2 為從駱駝蓬植物中首次分離得到。HCT116 細(xì)胞體外抗增殖實(shí)驗(yàn)表明，化合物1 和化合物2 對HCT116 細(xì)胞的抑制能力并不強(qiáng)，而具有較強(qiáng)共軛系統(tǒng)的化合物5 對其具有潛在的抑制能力，24 h 的IC50為（36.41±1.91）μmol/L。本實(shí)驗(yàn)不僅豐富了駱駝蓬子的化學(xué)成分信息，亦為其藥用價(jià)值提供了一定的依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突