賈云琪,韓景獻(xiàn),張雪竹(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院針灸科,天津 300380;國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心;通訊作者,E-mail:zhangxuezhu999@6.com)

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一種常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型,屬于不可逆的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病類(lèi)別,是老年人中常見(jiàn)的神經(jīng)變性疾病,該疾病以認(rèn)知障礙為主要臨床表現(xiàn)。目前全球超過(guò)5 500萬(wàn)人患有癡呆,預(yù)測(cè)到2030年這一數(shù)字將達(dá)到8 200萬(wàn)[1],其中AD患者人數(shù)約占所有癡呆病例的70%[2],在中國(guó)AD的年齡標(biāo)化發(fā)病率為(56.47～207.08)/10萬(wàn)[3]。此外,據(jù)世界阿爾茨海默病報(bào)告估計(jì)全球75%的癡呆癥患者沒(méi)有得到診斷,作為癡呆主要原因的AD,也因此在醫(yī)學(xué)界備受關(guān)注。

AD有較長(zhǎng)的臨床前疾病階段,隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展,越來(lái)越多的證據(jù)表明患者在發(fā)病前存在大腦微結(jié)構(gòu)變化與體液代謝變化。AD患者如果在早期階段得到及時(shí)診斷并接受治療,甚至在前驅(qū)期預(yù)測(cè)到AD風(fēng)險(xiǎn)并采取一些非藥物手段進(jìn)行預(yù)防,這將會(huì)大幅延緩疾病進(jìn)程,患者生存率將得到提高,并減輕社會(huì)及家庭的負(fù)擔(dān)。

目前,AD的主流診斷方法是腦脊液(cerebro-spinal fluid,CSF)檢測(cè)及正電子發(fā)射斷層掃描成像(positron emission computed tomography,PET)。CSF檢測(cè)需做腰椎穿刺手術(shù),因其屬于有創(chuàng)操作,導(dǎo)致患者在AD早期診斷階段對(duì)CSF檢測(cè)的接受程度并不理想。PET由于價(jià)格昂貴同樣不適用于AD的早期診斷篩查,因此這些方法都不能在早期診斷治療中進(jìn)行普及。而唾液中可能存在潛在的AD生物標(biāo)記物,有利于臨床早期診斷、病情監(jiān)測(cè)以及預(yù)后判斷[4]。本文通過(guò)總結(jié)AD發(fā)生過(guò)程中相關(guān)唾液生物標(biāo)志物的研究進(jìn)展及不足,對(duì)AD診斷的唾液生物標(biāo)志物今后的研究方向進(jìn)行進(jìn)一步討論及展望。

1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷相關(guān)標(biāo)志物

1.1 淀粉樣β蛋白(amyloid β protein,Aβ)

Aβ過(guò)度沉積是導(dǎo)致阿爾茨海默病發(fā)生的一個(gè)重要因素,而Aβ42則是人體內(nèi)Aβ中最常見(jiàn)的亞型,以Aβ42通過(guò)錯(cuò)誤折疊導(dǎo)致過(guò)度沉積形成的可溶性Aβ42低聚物,會(huì)在腦內(nèi)形成淀粉樣斑塊,期間加速Tau蛋白過(guò)度磷酸化、神經(jīng)元之間信號(hào)傳遞障礙,甚至誘導(dǎo)氧化損傷,并最終導(dǎo)致神經(jīng)元死亡,因此Aβ過(guò)度沉積被認(rèn)為是AD病理改變的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年Boschi等[5]首次運(yùn)用超靈敏ELISA技術(shù)檢測(cè)唾液中Aβ42,發(fā)現(xiàn)AD患者唾液Aβ濃度顯著高于對(duì)照組和非AD組,為對(duì)照組的兩倍,且Aβ唾液濃度診斷AD在ROC分析中敏感性為84%,特異性為68%。雖然唾液中的Aβ42與AD在病理機(jī)制上的聯(lián)系尚未明確,但多數(shù)研究結(jié)果顯示,AD患者唾液中的Aβ42濃度升高,這一指標(biāo)足以將AD與非AD區(qū)分開(kāi)[6-8],這些研究結(jié)果都有力地證明了唾液Aβ42可成為診斷AD的生物標(biāo)記物。

1.2 Tau蛋白

Tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白,主要表達(dá)于神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)與軸突中,其作用主要在于穩(wěn)定神經(jīng)元細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)和調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育。在AD病理進(jìn)程中,Tau蛋白的過(guò)度磷酸化使微管結(jié)構(gòu)遭到破壞,并與Aβ共同作用增加細(xì)胞毒性[9],最終加速神經(jīng)元死亡。在PET成像中,Tau病理聚集與AD患者的神經(jīng)變性和臨床表現(xiàn)密切相關(guān)[10]。Marksteiner等[11]研究運(yùn)用Lumipulse技術(shù)發(fā)現(xiàn),AD患者唾液總Tau(total-Tau,t-Tau)蛋白水平顯著低于對(duì)照組,而磷酸化Tau-181(phospho-Tau-181,p-Tau-181)水平顯著高于對(duì)照組,上述研究以輕度認(rèn)知障礙(mild cognitive impairment,MCI)患者唾液內(nèi)存在≥18 pg/mg的Tau蛋白,或AD患者唾液內(nèi)存在≤300 pg/mg的Tau蛋白為診斷界值,實(shí)驗(yàn)室診斷準(zhǔn)確率為71.4%。Cui等[12]研究表明,AD患者唾液的Aβ42水平明顯比對(duì)照組的更高,Aβ40、t-Tau和p-Tau無(wú)明顯變化,p-Tau/t-Tau和Aβ42/Aβ40與AD診斷有一定的相關(guān)性,并且這4種生物標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AD診斷的正確率在92.11%。到目前為止,唾液檢測(cè)生物標(biāo)志物研究中Aβ和Tau聯(lián)合診斷AD的準(zhǔn)確率最高,這類(lèi)AD主流唾液生物標(biāo)志物研究運(yùn)用了超靈敏ELISA技術(shù)和Lumipulse技術(shù)等檢測(cè)標(biāo)志物的數(shù)據(jù)變化,在數(shù)據(jù)上使被檢測(cè)標(biāo)志物展現(xiàn)出了一定的診斷優(yōu)勢(shì),但由于水的含量在唾液中比在血液中高,所以未來(lái)研究要想獲得更精準(zhǔn)的數(shù)據(jù),就需要探索更加精確的檢驗(yàn)技術(shù),類(lèi)似于血液Tau蛋白檢測(cè)的免疫磁還原(IMR)和Simoa技術(shù)等等。

1.3 乙酰膽堿與乙酰膽堿酯酶

在AD病理進(jìn)程中,乙酰膽堿缺乏會(huì)破壞腦內(nèi)前額葉皮質(zhì)神經(jīng)元[13],而乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)作為中樞神經(jīng)傳導(dǎo)中一種關(guān)鍵性酶,能夠降解乙酰膽堿,終止神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)突觸后膜的興奮作用,保證神經(jīng)信號(hào)在生物體內(nèi)的正常傳遞。Pea-Bautista等[14]提出,AD認(rèn)知障礙患者的唾液乙酰膽堿呈高水平狀態(tài),AD患者唾液中肌醇、肌酸、谷氨酰胺、乙酰膽堿4項(xiàng)聯(lián)合預(yù)測(cè)AD的敏感度為61%,特異性為92%。Ahmadi-Motamayel等[15]發(fā)現(xiàn),AD患者的唾液AChE活性明顯比健康受試者的高,并提出唾液AChE活性可用于老年AD患者的早期檢測(cè)及AD患者的病情監(jiān)測(cè)。但到目前為止,關(guān)于檢測(cè)唾液AChE診斷AD方面的研究樣本數(shù)量都較小,這種唾液生物標(biāo)志物的臨床有效性還需要進(jìn)一步在大樣本臨床研究中驗(yàn)證。

2 炎癥及氧化應(yīng)激損傷相關(guān)的標(biāo)志物

2.1 乳鐵蛋白

乳鐵蛋白(lactoferrin,LF)是一種具有抗炎特性的免疫蛋白,其存在于黏膜表面。已有研究發(fā)現(xiàn)LF與神經(jīng)退行性疾病AD之間存在一定聯(lián)系[16],可能與其能夠防止細(xì)胞損傷和組織損傷有關(guān)。LF通過(guò)舌下黏膜進(jìn)入腦內(nèi),并通過(guò)抗炎和抗氧化功能的結(jié)合來(lái)保護(hù)大腦完整性[17]。Reseco等[18]通過(guò)ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn),唾液LF水平與人體腦內(nèi)Aβ負(fù)荷的增加有關(guān),其中唾液LF水平減少可能反映了Aβ對(duì)老年脆弱皮質(zhì)區(qū)域的最早影響,腦內(nèi)Aβ沉積會(huì)增加人體發(fā)生AD的風(fēng)險(xiǎn),因此這項(xiàng)研究提示唾液LF水平檢測(cè)在未來(lái)或許能夠幫助預(yù)測(cè)AD進(jìn)展。近年來(lái),已有研究數(shù)據(jù)證明唾液LF有成為AD特異性診斷標(biāo)志物的希望[19]。然而也有研究人員未在AD患者中發(fā)現(xiàn)唾液LF有特異性表現(xiàn)[20]。Antequera等[21]的一項(xiàng)研究表明,雙轉(zhuǎn)基因APP/PS1小鼠AD初始階段存在唾液LF水平降低的現(xiàn)象,且這種情況在AD中度至重度階段仍然存在。目前來(lái)看,研究間存在不一致的數(shù)據(jù)結(jié)果可能是因?yàn)檠芯繉?duì)象存在疾病階段差異,因此唾液LF成為AD診斷生物標(biāo)記物還需要進(jìn)行規(guī)范化臨床調(diào)查研究進(jìn)行驗(yàn)證,而關(guān)于研究實(shí)驗(yàn)前的AD精神診斷標(biāo)準(zhǔn),未來(lái)研究應(yīng)注重探索完善全球通用與地區(qū)通用的標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白

神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星形膠質(zhì)細(xì)胞的中間絲蛋白,同時(shí)也是星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的特異性標(biāo)志物,對(duì)神經(jīng)起保護(hù)作用。在AD唾液檢測(cè)研究中,Katsipis等[22]分別運(yùn)用ELISA與Dot blot技術(shù)檢測(cè)唾液中GFAP濃度發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,MCI患者的GFAP濃度有所減少;與MCI患者和對(duì)照組相比,AD患者的GFAP濃度顯著降低;這兩種不同的免疫學(xué)方法確定的同組GFAP水平之間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著差異,其中唾液GFAP診斷AD在ROC分析中已經(jīng)通過(guò)ELISA推薦臨界值(GFAP<4.0 ng/mg,約登指數(shù)為0.75,靈敏度為75%,特異性為100%)和Dot blot推薦臨界值(GFAP<5.6 ng/mg,約登指數(shù)為0.6,靈敏度85%;特異性為75%),研究提示唾液GFAP有望成為AD診斷生物標(biāo)志物之一,也提示AD患者唾液GFAP濃度降低的原因是AD患者體外表達(dá)GFAP的星形膠質(zhì)細(xì)胞退化,從而影響唾液中GFAP水平。

2.3 氧化應(yīng)激損傷相關(guān)產(chǎn)物

氧化應(yīng)激中的糖基化與AD高度相關(guān),晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)通過(guò)活性氧調(diào)節(jié)淀粉樣前體蛋白表達(dá),增強(qiáng)Aβ集聚,導(dǎo)致AD患者腦內(nèi)的神經(jīng)元死亡[23-25]。Choromańska等[26]研究發(fā)現(xiàn)區(qū)分癡呆患者組與對(duì)照組的非刺激產(chǎn)生唾液中最佳的熒光性AGEs值(AUC 0.85,P<0.001)為<1.451 RFU/mg蛋白,靈敏度為75.68%,特異性為75.86%。由于這項(xiàng)研究中呈現(xiàn)的結(jié)果強(qiáng)調(diào)了唾液AGEs可能是診斷癡呆的生物標(biāo)志物之一,且AD屬于癡呆的主要病因,所以未來(lái)唾液中氧化損傷物的檢測(cè)可能會(huì)成為診斷AD的輔助手段。

3 口腔微生物群相關(guān)標(biāo)記物

牙齦卟啉單胞菌是一種革蘭氏陰性細(xì)菌,是口腔微生物群落的重要組成部分。牙齦卟啉單胞菌能夠隨著循環(huán)系統(tǒng)到達(dá)血腦屏障,并增加血腦屏障通透性[27]。已經(jīng)有研究提出,部分口腔致病菌數(shù)量的增加以及隨之而來(lái)的全身炎癥的增加可能是與AD相關(guān)的因素之一,這可能有助于將來(lái)更好地完善AD臨床診斷[28]。有研究表明,牙齦卟啉單胞菌在感染小鼠口腔后會(huì)進(jìn)入腦內(nèi),最終導(dǎo)致小鼠腦內(nèi)淀粉樣斑塊成分Aβ1-42的生成量增加[29]。Wu等[30]通過(guò)PacBio-SMRT測(cè)序平臺(tái)確定了口腔微生物群可以輔助診斷AD,而且還發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,AD組微生物多樣性較低,乳酸桿菌、鏈球菌和類(lèi)桿菌的數(shù)量顯著增加,梭桿菌和變形桿菌的數(shù)量顯著減少。實(shí)際上相比于在唾液中檢測(cè),診斷AD的微生物在腦脊液中檢測(cè)優(yōu)勢(shì)更大,微生物標(biāo)記物在唾液中檢測(cè)首要考慮因素就是牙周病等口腔疾病這類(lèi)混在因素的干擾,因此微生物唾液診斷更偏向?yàn)锳D輔助診斷手段。

4 代謝組學(xué)相關(guān)的標(biāo)志物

研究人員可通過(guò)代謝組學(xué)技術(shù)觀察到人體內(nèi)所有小分子代謝物的數(shù)據(jù)表達(dá)變化[31],由于代謝紊亂在AD患者神經(jīng)病理進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用,所以許多AD研究開(kāi)始重視AD患者的代謝產(chǎn)物變化,目前,關(guān)于檢測(cè)血液代謝物診斷AD方面的研究已經(jīng)取得了一些進(jìn)展[32,33]。一項(xiàng)調(diào)查AD患者血清代謝組學(xué)分析的研究顯示AD患者血清代謝組學(xué)數(shù)據(jù)有助于進(jìn)一步了解AD的發(fā)病機(jī)制[34],并且已有研究[35]通過(guò)觀察AD患者唾液代謝組學(xué)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),唾液代謝有著與血液代謝類(lèi)似的動(dòng)態(tài)變化,而且已初步證明唾液代謝物在AD生物標(biāo)志物研究進(jìn)展中存在重要開(kāi)發(fā)價(jià)值,研究顯示與MCI組相比,AD組唾液中的β-丙氨酸通路、檸檬酸循環(huán)、半胱氨酸和蛋氨酸代謝、苯丙氨酸代謝等通路的顯著上調(diào)。因此,相比于血液代謝組學(xué)檢測(cè),唾液代謝組學(xué)檢測(cè)為AD唾液診斷提供了一種更簡(jiǎn)單的非侵入性方法。Marksteiner等[36]在AD研究中通過(guò)靶向代謝組學(xué)方法檢測(cè)唾液,發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)紊亂在AD組和MCI組中十分突出,其中AD組患者唾液中的?；?烷基-磷脂酰膽堿減少,表明AD患者唾液中存在特定的脂質(zhì)周轉(zhuǎn)率變化,且研究中的唾液脂質(zhì)代謝產(chǎn)物可以成為識(shí)別AD患者的潛在生物標(biāo)志物。也有研究開(kāi)發(fā)出了快速超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用(FUPLC/MS)非靶向代謝組學(xué)方法作為識(shí)別AD患者唾液特征的平臺(tái),并根據(jù)預(yù)測(cè)模型,選擇了胞苷和二氫鞘氨醇-1-磷酸代謝物作為主要候選生物標(biāo)志物,用于預(yù)測(cè)MCI向AD的轉(zhuǎn)化[37]。上述研究均證明了唾液代謝組學(xué)的相關(guān)生物標(biāo)志物具有幫助AD患者獲得正確診斷的潛力,但由于人體內(nèi)唾液代謝產(chǎn)物是動(dòng)態(tài)變化的,所以今后研究不僅僅只考慮規(guī)范收集樣本的時(shí)間,還應(yīng)考慮到許多老年患者的身體狀況,研究是否會(huì)有合并疾病及服用過(guò)藥物對(duì)樣本數(shù)據(jù)的干擾。

5 遺傳學(xué)及基因組學(xué)相關(guān)的標(biāo)志物

5.1 載脂蛋白Eε4

載脂蛋白Eε4(apolipoprotein E epsilon 4,ApoE4)等位基因是AD的主要遺傳危險(xiǎn)因素[38,39]。ApoE4等位基因在AD的淀粉樣斑塊沉積、神經(jīng)原纖維纏結(jié)形成和神經(jīng)炎癥中都有重要作用[40-43]。González等[44]優(yōu)化了Sanger測(cè)序,并從唾液中提取出DNA序列,分析了AD患者的ApoE基因型,研究發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,遲發(fā)性AD患者(34%)的ApoE4等位基因頻率增加了8.5倍。提示盡管ApoE4等位基因不能作為明確的AD診斷物,但有作為AD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子的潛力。

5.2 DNA甲基化

DNA甲基化是參與AD發(fā)生的關(guān)鍵因素之一,在AD病理進(jìn)展中,PP2A低甲基化誘導(dǎo)tau磷酸化發(fā)生,最終導(dǎo)致神經(jīng)原纖維纏結(jié)[45],胚胎大腦中由DNA甲基化控制表達(dá)的海馬突觸肽基因能夠調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng),該基因與神經(jīng)發(fā)育和精神疾病相關(guān),DNA甲基化又與腦內(nèi)海馬區(qū)的突觸可塑性有關(guān),當(dāng)海馬區(qū)內(nèi)出現(xiàn)全局DNA甲基化不平衡時(shí),海馬體的完整性會(huì)遭到損壞,導(dǎo)致神經(jīng)炎癥和細(xì)胞應(yīng)激等病理表現(xiàn)的增加[46,47]。此外,腦部前額葉皮層(prefrontal cortex,PFC)突觸功能相關(guān)基因表達(dá)下的DNA甲基化,與衰老和年齡相關(guān)的認(rèn)知障礙有關(guān)[48],而在2型糖尿病引起的認(rèn)知障礙小鼠PFC中,參與突觸穩(wěn)態(tài)性的蛋白質(zhì)降低,基因啟動(dòng)子位點(diǎn)CpG島甲基化百分比會(huì)增加[49]。

有研究發(fā)現(xiàn)在AD病理早期階段,人體額葉皮層的基因組中有71個(gè)離散CpG位點(diǎn)二核苷酸表現(xiàn)出與AD相關(guān)的DNA甲基化水平變化[50],這種變化一般發(fā)生在AD出現(xiàn)癥狀的初始階段。腦部PFC基因組中的DNA甲基化差異在AD的Braak病理分期中發(fā)揮著重要作用,在PFC和血液中的多數(shù)CpG位點(diǎn)提示,大腦和血液中DNA甲基化水平之間的相關(guān)性適中[51],然而與血液相比,唾液中的DNA甲基化水平更類(lèi)似于腦組織中的水平[52],這可能是由于外胚層主要形成表皮和神經(jīng)系統(tǒng),唾液中的大量細(xì)胞來(lái)自于表皮組織頰黏膜上皮,它與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織細(xì)胞起源相同[53]。而關(guān)于唾液中頰黏膜上皮細(xì)胞在AD方向的研究很少,主要集中在細(xì)胞核內(nèi)的端粒結(jié)構(gòu)、DNA結(jié)構(gòu)等[54,55],目前尚無(wú)關(guān)于唾液內(nèi)頰黏膜細(xì)胞DNA甲基化與AD診斷的相關(guān)研究。

Sommerer等[56]在對(duì)神經(jīng)退行性疾病患者和對(duì)照組的尸檢中,通過(guò)Illumina甲基化陣列檢驗(yàn)口腔中頰黏膜上皮細(xì)胞和人腦PFC中的DNA甲基化,結(jié)果顯示在約25 000個(gè)CpG位點(diǎn)(約為總位點(diǎn)數(shù)量的3%)中,兩種組織存在顯著的Spearman等級(jí)相關(guān)性,其中99%的CpG位點(diǎn)在兩種組織中呈正相關(guān),提示該條件下兩種組織中DNA甲基化模式一致。因?yàn)榭谇恢袡z測(cè)的DNA甲基化可能會(huì)被口腔內(nèi)細(xì)菌DNA干擾,所以有研究使用Illumina甲基化陣列與焦磷酸測(cè)序檢測(cè)唾液中DNA甲基化,從中提取了高質(zhì)量的甲基化譜,排除了口腔內(nèi)的細(xì)菌對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響[57],這與之前的多類(lèi)生物標(biāo)志物相比,唾液DNA甲基化在AD診斷中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)很明顯。先前研究人員在一項(xiàng)唐氏綜合征與DNA甲基化的研究中,選取了頰細(xì)胞的全基因組包括APP基因,檢驗(yàn)DNA甲基化模式,發(fā)現(xiàn)3 300個(gè)CpG位點(diǎn)在組之間的差異甲基化,并在其中發(fā)現(xiàn)了與AD病理學(xué)相關(guān)的TSC2基因探針[58]。這或許提示,未來(lái)在唾液生物標(biāo)志物和AD診斷的研究中,還可以考慮從唾液DNA甲基化位點(diǎn)作為切入點(diǎn),探索AD的診斷甚至靶向治療。

6 總結(jié)與展望

唾液檢測(cè)在AD診斷中的主要優(yōu)勢(shì)是簡(jiǎn)便、安全,可在短時(shí)間內(nèi)重復(fù)收集,并屬于非侵入性的標(biāo)本采集。與血液、腦脊液采集等侵入性方法相比,唾液檢測(cè)能夠避免傷口感染,心理上也更容易接受。而在疾病后期,唾液診斷實(shí)際上對(duì)于AD這類(lèi)有著認(rèn)知障礙和運(yùn)動(dòng)障礙的高齡患者來(lái)說(shuō),更容易操作。不過(guò),目前還沒(méi)有文獻(xiàn)明確提出基于唾液生物標(biāo)志物可以進(jìn)行AD診斷及疾病進(jìn)展甚至預(yù)后的監(jiān)測(cè)。且迄今為止并沒(méi)有文獻(xiàn)確定,僅單一的唾液生物標(biāo)記物即可對(duì)AD進(jìn)行診斷。展望未來(lái),AD診斷唾液生物標(biāo)記物可能是一組生物標(biāo)志物,且最有可能是組合型的,即能與其他非唾液標(biāo)記物聯(lián)合診斷AD或判斷AD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)。在疾病診斷過(guò)程中,唾液樣本采集的明顯缺點(diǎn)包括牙周組織疾病、口腔內(nèi)食物殘?jiān)?甚至吸煙等干擾,因此以后的AD唾液生物標(biāo)記物研究應(yīng)在標(biāo)本采集方法、采集時(shí)口腔狀態(tài)、檢測(cè)技術(shù)等方面更加注意嚴(yán)謹(jǐn)操作。現(xiàn)在關(guān)于生物標(biāo)志物在疾病診斷與監(jiān)測(cè)方面所需的技術(shù)研究越來(lái)越受到重視,但這項(xiàng)工作未來(lái)還需要收集更精確的臨床樣本數(shù)據(jù)。到目前為止,關(guān)于AD研究使用的診斷標(biāo)準(zhǔn)多種多樣,這提示研究人員在今后臨床方向的研究中,不僅要考慮規(guī)范樣本采集,還要考慮盡量規(guī)范臨床診斷標(biāo)準(zhǔn),這樣才能最大程度地保證研究中呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)結(jié)果能夠準(zhǔn)確反映要解決的臨床問(wèn)題。如今,AD診斷在唾液生物標(biāo)記物方面的研究并不只在于發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)記物,還在于驗(yàn)證那些有診斷潛力的生物標(biāo)記物,開(kāi)發(fā)足夠靈敏的檢測(cè)方法,并闡述它們的使用方法。