王鵬江 曹劍 劉強(qiáng)德 王鋼 候鳳 李新萍 袁科 丁占強(qiáng) 武天增 連凡平 張志鵬 賀筍

摘要：本研究旨在評價不同廠家豬肺炎支原體滅活疫苗的免疫攻毒保護(hù)效果。選擇4周齡仔豬25頭，隨機(jī)分為5組，每組5頭豬，分別免疫四種豬肺炎支原體滅活疫苗（即疫苗A組、疫苗B組、疫苗C組、疫苗D組），E組為攻毒對照組，不做任何處理，在同等條件下隔離飼養(yǎng)。各疫苗按照對應(yīng)的說明書進(jìn)行免疫，免疫后第14、28天進(jìn)行采血，檢測支原體抗體水平，一免后28 d時，所有免疫組連同攻毒對照組，各氣管注射豬肺炎支原體CJ株5 mL/頭（含0.01 g肺組織毒）。攻毒后飼養(yǎng)觀察28 d，對所有實(shí)驗(yàn)組動物進(jìn)行觀察臨床癥狀。A組實(shí)驗(yàn)動物攻毒后未出現(xiàn)咳嗽、腹式呼吸等支原體臨床癥狀，B-D組實(shí)驗(yàn)豬攻毒后偶爾出現(xiàn)輕微間隔性咳嗽，E組實(shí)驗(yàn)動物攻毒后出現(xiàn)連續(xù)性咳嗽，個別豬出現(xiàn)腹式呼吸等臨床癥狀。攻毒后第28天進(jìn)行病理剖檢。結(jié)果表明，攻毒對照組豬4/5頭出現(xiàn)典型豬肺炎支原體病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現(xiàn)“肉樣”或“胰樣”實(shí)質(zhì)樣病變，界限明顯。B～D組解剖后個別豬出現(xiàn)典型豬肺炎支原體病變，A組實(shí)驗(yàn)動物解剖后個別豬肺臟出現(xiàn)零星病變，剩余實(shí)驗(yàn)動物肺臟均未出現(xiàn)豬肺炎支原體病變。根據(jù)肺部病變較少率計算，A～D組病變率分別為71.4%、42.8%、60.7%、44.6%。實(shí)驗(yàn)表明，4種豬肺炎支原體滅活疫苗均具有保護(hù)效果，但A組滅活疫苗與其他免疫組相比較，免疫效果明顯優(yōu)于其他免疫組，在豬群免疫中能夠起到更好的免疫效果。

關(guān)鍵詞：豬肺炎支原體毒；滅活疫苗；免疫效力；對比

豬支原體肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）是由豬肺炎支原體（mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一種慢性、接觸性呼吸道傳染病，臨床上有獨(dú)特的咳嗽和氣喘癥狀，又稱豬氣喘病[1]，該病分布十分廣泛，世界各地均有發(fā)生，也被認(rèn)為是危害各國養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一[2]。該病發(fā)病率高，發(fā)病慢且長，以冬春寒冷季節(jié)多發(fā)。發(fā)病豬表現(xiàn)為流涕、咳嗽、氣喘[3]。死亡率雖不高但豬肺炎支原體也能夠?qū)е掠商囟ú《拘圆≡ㄘi繁殖與呼吸綜合征和豬圓環(huán)2型病毒感染所引發(fā)的疾病[4]。本實(shí)驗(yàn)將市售豬支原體疫苗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室效力對比，了解現(xiàn)有疫苗對豬肺炎支原體免疫效果提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 毒株與疫苗

檢驗(yàn)用菌液：CJ株組織毒，含0.01 g肺組織。疫苗A，菌株為豬肺炎支原體（CJ株），由天康生物制藥有限公司制備、保存；疫苗B、C、D為市售豬肺炎支原體滅活疫苗。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

3～4周齡健康仔豬25頭，豬肺炎支原體病原和抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒病原和抗體均為陰性。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組

試驗(yàn)分為五組，每組5頭，A～D組為免疫組，另設(shè)一組為對照組，25頭3～4周齡實(shí)驗(yàn)豬按隨機(jī)分組，并對其進(jìn)行編號，分配在不同的房間進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，每個實(shí)驗(yàn)組動物的編號應(yīng)如實(shí)進(jìn)行記錄。實(shí)驗(yàn)分組信息見表1。

2.2 免疫前程序

將實(shí)驗(yàn)動物在潔凈環(huán)境下隔離飼養(yǎng)3～5 d，觀察實(shí)驗(yàn)豬是否健康以及有無豬支原體肺炎臨床癥狀，包括連續(xù)咳嗽和腹式呼吸。

2.3 疫苗免疫

免疫前疫苗回溫，分別對A組D組所有仔豬分別按右側(cè)耳后頸部肌肉途徑注射疫苗2mL/頭，E組為對照組，實(shí)驗(yàn)豬注射生理鹽水。

2.4 攻毒程序

免疫后28 d，所有實(shí)驗(yàn)組連同攻毒對照組，分別通過氣管注射豬肺炎支原體CJ株組織毒5 mL（含0.01 g肺組織毒）。

2.5 攻毒后程序

攻毒后28 d，將所有實(shí)驗(yàn)動物處死并剖檢，患病豬應(yīng)出現(xiàn)典型的豬支原體肺炎肺部病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現(xiàn)“肉樣”或“胰樣”實(shí)質(zhì)樣病變，界限明顯。

3 結(jié)果

3.1 抗體檢測

實(shí)驗(yàn)動物免疫當(dāng)天、免疫后第14和28天對所有實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行血液采集，分離血清，檢測豬肺炎支原體血液抗體水平如圖1所示。各組實(shí)驗(yàn)動物免疫前豬肺炎支原體血清中抗體S/P值均在0.03～0.09，檢測結(jié)果均為陰性，免疫后第14、28天豬肺炎支原體抗體水平除了E組攻毒對照組之外其余實(shí)驗(yàn)組抗體水平均在持續(xù)上升，A組抗體水平在整個免疫組中處于最高，B～D組血清中抗體S/P值均在1.1～1.4之間，E組實(shí)驗(yàn)動物血清中抗體水平S/P值均≤0.4。

3.2 臨床癥狀

實(shí)驗(yàn)動物攻毒后進(jìn)行觀察臨床癥狀，A組實(shí)驗(yàn)動物攻毒未出現(xiàn)豬肺炎支原體臨床癥狀，B組實(shí)驗(yàn)豬攻毒后第12天時3/5頭出現(xiàn)間隔性咳嗽，C組實(shí)驗(yàn)豬攻毒后第14天2/5頭出現(xiàn)輕微咳嗽，D組實(shí)驗(yàn)豬攻毒后第12天時2/5頭出現(xiàn)間隔性咳嗽，E組實(shí)驗(yàn)豬攻毒后第10天時4/5頭實(shí)驗(yàn)豬出現(xiàn)連續(xù)性咳嗽，病情嚴(yán)重實(shí)驗(yàn)動物出現(xiàn)腹式呼吸臨床癥狀。

3.3 病理變化

攻毒后28 d對所有實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行剖檢，剖檢后A組實(shí)驗(yàn)豬剖檢后個別出現(xiàn)零星病變，剩余實(shí)驗(yàn)豬未出現(xiàn)豬肺炎支原體病變。B、C、D組部分實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)典型豬肺炎支原體病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現(xiàn)“肉樣”或“胰樣”實(shí)質(zhì)樣病變，界限明顯。攻毒對照組剖檢后4/5頭出現(xiàn)典型豬肺炎支原體病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現(xiàn)“肉樣”或“胰樣”實(shí)質(zhì)樣病變，界限明顯[5]。

3.4 肺部評分統(tǒng)計

剖檢后對所有肺部病變進(jìn)行評分，評分方法根據(jù)28分評分進(jìn)行評判。如圖2所示，A組剖檢后肺部評分平均分為3.2，B～D組肺部評分均在4～6分之間，E組攻毒對照組剖檢后實(shí)驗(yàn)動物肺部出現(xiàn)典型支原體病變，肺部評分平均分為11.2，四組免疫組與攻毒對照組相比，分值明顯較低。

3.5 肺部病變較少率統(tǒng)計

通過肺部病變減少率計算[6]，免疫組與攻毒對照組相比，如圖3所示，4個免疫組肺部病變減少率分別為：A組71.4%、B組42.8%、C組為60.7%、D組為44.6%，從肺部病變減少率可以看出4個免疫組A組與C組具有明顯免疫原性。但A組與C組相比，A組肺部病變較少率明顯高于C組。

4 討論

豬肺炎支原體對各種豬均易感，在新引進(jìn)豬群多呈急性暴發(fā)，其發(fā)病率達(dá)到30%～50%，感染率達(dá)到80%以上[7]。本病發(fā)病率高，流行快，除死亡率快還導(dǎo)致病豬長時間帶菌，大量消耗機(jī)體組織，嚴(yán)重影響豬的生產(chǎn)性能和商品性能，大大增加養(yǎng)殖成本。而且，支原體可以通過空氣傳播，很難隔離阻斷傳播途徑，極易引起全群發(fā)病，是公認(rèn)的最難凈化的豬病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的損失。本病在我國流行十分廣泛，呈上升趨勢，已成為危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

本實(shí)驗(yàn)主要通過市售豬肺炎支原體疫苗，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)，評價市售疫苗免疫效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明疫苗A、C均具有良好免疫效果，肺部病變減少率均能達(dá)到60%以上，但疫苗A組免疫效果明顯高于疫苗C組。疫苗作為疾病一項(xiàng)主要防控舉措，合理選擇使用疫苗才能有效防控疾病發(fā)生，通過本次實(shí)驗(yàn)，為養(yǎng)殖業(yè)選擇該疫苗奠定了基礎(chǔ)，提高動物健康，減少疾病發(fā)生。

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