任 靜,黎圣洪,鐘華平

(廈門(mén)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院感染疾病科,福建 廈門(mén) 361000)

慢性乙型肝炎(HBV)是臨床常見(jiàn)的傳染病之一[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[2],全球約有2.5億HBV感染者,這對(duì)公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了巨大威脅,因此,準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)乙肝相關(guān)肝病的進(jìn)展在臨床上尤為重要。有研究報(bào)道顯示[3],HBV相關(guān)肝病患者外周血中的多種細(xì)胞因子均有明顯的異常,這與疾病的發(fā)展有一定關(guān)系。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、可溶性胸苷激酶-1(TK-1)不僅對(duì)HBV的診斷具有積極意義,而且在一定程度上對(duì)判斷HBV耐藥性具有一定價(jià)值[4]。本文主要研究VEGF和TK-1的表達(dá)水平,以預(yù)測(cè)和分析HBV患者的治療效果,為疾病診斷和治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2021年2月～2022年2月廈門(mén)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院收治的HBV患者130例為治療組,選取同期到本院進(jìn)行體檢的健康者130例為對(duì)照組。治療組中男71例,女59例;年齡34～65歲,平均(43.63±6.17)歲;平均體重指數(shù)(BMI)為(23.25±2.52)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)(2015年版)》[5]中關(guān)于HBV的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);②近期未使用抗病毒或免疫抑制劑;③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①哺乳期或妊娠期婦女;②患嚴(yán)重精神疾病者;③惡性腫瘤患者;④自愿參與本研究并簽署知情同意書(shū)者。對(duì)照組中,男68例,女62例;年齡38～64歲,平均(43.36±6.17)歲;平均BMI(23.63±2.37)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn):①HBV陰性者;②無(wú)自身免疫性疾病;③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①嚴(yán)重的心、腦、腎功能障礙患者;②精神障礙,無(wú)法配合檢查者;③血液系統(tǒng)疾病者。兩組臨床資料,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本次研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2方法

1.2.1療效判定:治療后患者的肝功能指標(biāo)明顯恢復(fù),HBV DNA含量降低值>2 000 copy/mL則為有效;治療后患者肝功能指標(biāo)無(wú)明顯變化,HBV DNA含量降低值<2 000 copy/ml則為無(wú)效。本研究中130例顯著有效或有效的HBV患者被選為有效治療組(97例),以無(wú)效作為治療無(wú)效組(33例)。

1.2.2血清VEGF、TK-1值檢測(cè):于清晨空腹抽取靜脈血2 ml,于3 h內(nèi)以4 000 r/min離心10 min,分離血清,保存于-20 ℃冰箱中。收集樣本后,使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA,試劑盒購(gòu)自英國(guó)Abcam抗體公司)測(cè)定血清TK-1和VEGF值。所有操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.3免疫功能檢測(cè):使用流式細(xì)胞儀(美國(guó)Sigma公司)對(duì)兩組患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、水平進(jìn)行檢測(cè),抗體購(gòu)于美國(guó)BD公司;使用全自動(dòng)免疫分析儀(美國(guó)Sigma公司)檢測(cè)兩組患者的IgA、IgG和IgM(試劑盒購(gòu)自美國(guó)BD公司)。所有操作均按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。

1.2.4HBV DNA載量水平檢測(cè):于清晨空腹抽取靜脈血5 ml,以12 000 r/min離心5 min,用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR,試劑盒購(gòu)自南京博世生物科技有限公司)定量檢測(cè)HBV DNA載量水平。所有操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.5肝功能指標(biāo)檢測(cè):抽取患者晨起空腹外周靜脈血5 ml,3 000 r/min離心10 min,收集上清液,-40 ℃保存檢測(cè),用羅氏P-800全自動(dòng)生化分析儀(試劑盒購(gòu)自有限公司)測(cè)定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和總膽紅素(TBIL)水平。所有操作都嚴(yán)格按照說(shuō)明進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn);采用Spearman相關(guān)性分析VEGF、TK-1與各指標(biāo)關(guān)系;繪制受試者工作特征(ROC)曲線分析VEGF、TK-1評(píng)價(jià)HBV的治療效果。

2 結(jié)果

2.1兩組VEGF、TK-1水平比較:治療組VEGF[(256.36±17.47)pg/ml]、TK-1[(2.16±1.75)pmol/L]水平明顯高于對(duì)照組[(92.47±13.26)pg/ml,(0.57±0.28)pmol/L],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=85.199、10.229,P<0.05)。

2.2兩組免疫功能比較:對(duì)照組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM均顯著高于治療組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組免疫功能比較

2.3不同治療效果患者的VEGF、TK-1、HBV DNA水平比較:經(jīng)治療后,兩組VEGF、TK-1、HBV DNA均有顯著改善,且有效組改善程度較無(wú)效組更為顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同治療效果患者的VEGF、TK-1、HBV DNA水平比較

2.4不同治療效果患者的肝功能比較:經(jīng)治療后,有效組ALT、AST、TBIL水平均明顯低于無(wú)效組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同治療效果的肝功能比較

2.5不同療效患者免疫功能比較:經(jīng)治療后,無(wú)效組免疫功能顯著低于有效組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 不同療效患者免疫功能比較

2.6VEGF、TK-1與各指標(biāo)相關(guān)性分析:經(jīng)Spearman相關(guān)性分析顯示,VEGF、TK-1與CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM呈負(fù)相關(guān),與AST、TBIL、ALT、HBV DNA呈正相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 VEGF、TK-1與各指標(biāo)相關(guān)性分析

2.7ROC曲線分析:對(duì)于HBV患者治療效果的預(yù)測(cè),VEGF檢測(cè)與TK-1檢測(cè)聯(lián)合的ROC曲線下面積明顯高于單項(xiàng)VEGF檢測(cè)與單項(xiàng)TK-1檢測(cè)結(jié)果,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表6、圖1。

圖1 ROC曲線分析

表6 VEGF、TK-1聯(lián)合檢測(cè)對(duì)治療效果的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

3 討論

HBV感染在世界范圍內(nèi)流行,隨著疾病的進(jìn)一步進(jìn)展,HBV對(duì)機(jī)體肝臟細(xì)胞造成反復(fù)損傷,從而增加疾病惡化風(fēng)險(xiǎn),因此,及時(shí)辨別HBV患者病情轉(zhuǎn)變進(jìn)程,對(duì)改善患者生存和預(yù)后具有重要的臨床意義[6]。關(guān)于血清VEGF和TK-1在乙型肝炎相關(guān)肝病中的系統(tǒng)研究較少。VEGF通過(guò)促進(jìn)膠原酶、纖維蛋白原和其他相關(guān)蛋白的生物合成,在誘導(dǎo)新血管中具有強(qiáng)大作用,并通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移實(shí)現(xiàn)血管通透性的改變[7]。作為腫瘤細(xì)胞的血清學(xué)增殖標(biāo)志物,TK-1已被證明與多種惡性腫瘤的發(fā)生和臨床預(yù)后密切相關(guān)[8]。

本研究顯示,HBV患者VEGF、TK-1水平明顯高于健康人群,免疫功能顯著低于正常水平。由于慢性肝病導(dǎo)致大量肝細(xì)胞受損,肝細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞釋放的VEGF、TK-1和其他細(xì)胞因子水平會(huì)增加,且HBV缺乏自身的VEGF,依賴于在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中宿主細(xì)胞基因的募集,以促進(jìn)血管生成。有學(xué)者表明[9],VEGF和TK-1的水平取決于細(xì)胞的增殖,正常情況下,成人體內(nèi)VEGF和TK-1的含量極低。侯寶洲等[10]研究表明,HBV X蛋白(HBx)可能通過(guò)上調(diào)TK-1和VEGF促進(jìn)HBV相關(guān)肝癌的發(fā)生和發(fā)展,TK-1、VEGF在TK-1相關(guān)性肝癌中廣泛表達(dá)。上述觀點(diǎn)在本研究中亦得到了證實(shí)。研究表明[11],血清TK-1被用作癌癥診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物,廣泛參與細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程,如DNA復(fù)制和細(xì)胞增殖,高基線TK-1與不良預(yù)后相關(guān)。作為一種強(qiáng)大的血管生成因子,VEGF在血管生長(zhǎng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮著重要作用[12]。研究表明,VEGF的激活是肝病發(fā)生和發(fā)展的重要組成部分,VEGF的高表達(dá)是肝癌形成的重要前提和基礎(chǔ)[13]。VEGF-A結(jié)合VEGF受體1(VEGFR1)和VEGFR2,并通過(guò)受體的TK結(jié)構(gòu)域誘導(dǎo)傷口愈合[14]。VEGF可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的微環(huán)境,在肝損傷的修復(fù)和纖維化的形成中發(fā)揮重要作用。謝雯凈等[15]研究后發(fā)現(xiàn),隨著HBV患者病情的改善,患者血清中TK1、AFP和CHI3L1的水平降低,這與治療效果有關(guān),這與本研究結(jié)果相似。本研究顯示,在預(yù)測(cè)HBV患者治療效果方面,VEGF檢測(cè)和TK-1檢測(cè)組合的ROC曲線下面積顯著高于單獨(dú)VEGF檢測(cè)和單獨(dú)TK-1檢測(cè)。VEGF和TK-1檢測(cè)可以有效預(yù)測(cè)HBV患者的治療效果,但兩種方式聯(lián)合檢測(cè)敏感性更高。

綜上,VEGF和TK-1的表達(dá)水平與HBV患者的肝功能和免疫功能顯著相關(guān),VEGF和TK-1對(duì)HBV的治療效果有顯著的預(yù)測(cè)價(jià)值。但目前樣本量小,后續(xù)有必要進(jìn)一步增加樣本量,以進(jìn)一步證實(shí)VEGF、TK-1對(duì)于HBV的治療效果具有顯著的預(yù)測(cè)價(jià)值。