劉靜?屈倩如?張曼

摘 要：培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制直接關(guān)系到微生物試驗(yàn)的結(jié)果。本文配制了常見(jiàn)的致病菌分離平板，并分別于第1天、第8天、第15天用相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株接種劃線培養(yǎng)觀察。研究發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室自制平板在妥善保存的條件下使用期限至少為15 d。

關(guān)鍵詞：微生物；培養(yǎng)基；致病菌；驗(yàn)證

Research on Verification of Storage Cycle of Laboratory Homemade Plates

Abstract： The culture medium is the basis of microbial testing， and the quality control of the culture medium is directly related to the results of microbial testing. This article prepared common pathogenic bacteria isolation plates， and used corresponding standard strains to inoculate and streak cultures on the 1st， 8th， and 15th days respectively. It was found that if the laboratory-made plates are properly stored， they have a service life of at least for 15 days.

Keywords： microorganism; culture medium; pathogenic bacteria; validation

影響微生物試驗(yàn)結(jié)果與質(zhì)量的因素有原材料、水質(zhì)、滅菌效果、pH值等，其中有效的培養(yǎng)基是關(guān)鍵。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制直接影響微生物檢驗(yàn)工作的準(zhǔn)確性、可靠性，因此培養(yǎng)基的配制、保存的質(zhì)量控制尤為重要[1]。應(yīng)按照《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測(cè)》（GB/T 27405—2008）[2]和《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28—2013）[3]對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室對(duì)自制平板的有效期進(jìn)行驗(yàn)證，是對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)，可確保試驗(yàn)方法的有效性，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文制備了實(shí)驗(yàn)室常用的致病菌分離平板，并通過(guò)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)保存期進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株

鼠傷寒沙門氏菌：ATCC 14028；金黃色葡萄球菌：ATCC 6538；單核細(xì)胞增生李斯特氏菌：ATCC 19114；福氏志賀氏菌：ATCC 12022。

1.1.2 培養(yǎng)基

Baird Parker瓊脂平板（B-P）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、沙門顯色培養(yǎng)基、PALCAM瓊脂、李斯特氏菌顯色瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MAC），以上培養(yǎng)基均購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平，深圳博途電子科技有限公司；高壓蒸汽滅菌器，松下健康醫(yī)療器械（上海）有限公司；生物安全柜，美國(guó)/賽默飛世爾科技公司；生化培養(yǎng)箱，上海博訊實(shí)業(yè)有公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)方案

將B-P平板、XLD平板、BS平板、沙門氏菌顯色平板、PALCAM平板、李斯特氏菌顯色平板及MAC平板配制好后于冰箱冷藏密封保存，分別于第1天、第8天、第15天用金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌及福氏志賀氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株接種劃線相應(yīng)的分離平板，觀察各平板的狀態(tài)及各標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)情況。

1.3.2 試驗(yàn)方法

B-P平板參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB 4789.10—2016）[4]進(jìn)行試驗(yàn)；BS平板及沙門氏菌顯色平板參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）[5]進(jìn)行試驗(yàn)；PALCAM平板及李斯特氏菌顯色平板參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.30—2016）[6]進(jìn)行試驗(yàn)；MAC平板參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.5—2012）[7]進(jìn)行試驗(yàn)；XLD平板同時(shí)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）[5]和《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.5—2012）[7]進(jìn)行試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 平板保存1 d時(shí)的變化及各標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)情況

所有平板配制好后，于4 ℃冰箱中密封保存1 d，取出恢復(fù)至室溫后進(jìn)行試驗(yàn)：取金黃色葡萄球菌接種劃線B-P平板；取沙門氏菌接種劃線XLD平板、BS平板和沙門氏菌顯色平板；取單核細(xì)胞增生李斯特氏菌接種劃線李斯特氏菌顯色平板和PALCAM平板；取福氏志賀氏菌接種劃線XLD平板和MAC平板。由圖1可以看出，所有平板均光滑、濕潤(rùn)、表面無(wú)水珠，未出現(xiàn)染菌現(xiàn)象，可用于分離劃線；由圖2可以看出，各標(biāo)準(zhǔn)菌株在相應(yīng)的平板上生長(zhǎng)良好，形態(tài)典型，有效分離出單菌落，各平板上的菌落形態(tài)見(jiàn)表1。

2.2 平板保存8 d時(shí)的變化及各標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)情況

平板配制好后，于4 ℃冰箱中密封保存8 d，取出恢復(fù)至室溫后進(jìn)行試驗(yàn)：取金黃色葡萄球菌接種劃線B-P平板；取沙門氏菌接種劃線XLD平板、BS平板和沙門氏菌顯色平板；取單核細(xì)胞增生李斯特氏菌接種劃線李斯特氏菌顯色平板和PALCAM平板；取志賀氏菌接種劃線XLD平板和MAC平板。由圖3可以看出，所有平板均光滑、濕潤(rùn)、表面無(wú)水珠、較第1天的狀態(tài)干燥，無(wú)染菌現(xiàn)象，可用于分離劃線；由圖4可以看出，各標(biāo)準(zhǔn)菌株在相應(yīng)的平板上依舊生長(zhǎng)良好，形態(tài)典型，具體形態(tài)依舊如表1所示，能夠有效分離出單菌落。

2.3 平板保存15 d時(shí)的變化及各標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)情況

平板配制好后，于4 ℃冰箱中密封保存15 d，取出恢復(fù)至室溫后進(jìn)行試驗(yàn)：取金黃色葡萄球菌接種劃線B-P平板；取沙門氏菌接種劃線XLD平板、BS平板和沙門氏菌顯色平板；取單核細(xì)胞增生李斯特氏菌接種劃線李斯特氏菌顯色平板和PALCAM平板；取志賀氏菌接種劃線XLD平板和MAC平板。由圖5可以看出，所有平板干燥，但無(wú)開(kāi)裂現(xiàn)象及染菌現(xiàn)象，依舊可以用于分離劃線使用；由圖6可以看出，各標(biāo)準(zhǔn)菌株在相應(yīng)的平板上仍然生長(zhǎng)良好，形態(tài)典型如表1所示，能夠有效分離出單菌落。

3 結(jié)論

隨著時(shí)間的推移，未接種的平板的濕潤(rùn)度逐漸降低，但放置15 d的平板依舊保持完好狀態(tài)，未出現(xiàn)干裂、脫水等現(xiàn)象，處于可使用水平，接種后各種菌落生長(zhǎng)情況未出現(xiàn)明顯差異，菌落生長(zhǎng)情況良好。本次試驗(yàn)證明，實(shí)驗(yàn)室自制平板在妥善保存的條件下，使用期限至少為15 d，考慮到實(shí)驗(yàn)室實(shí)際使用平板情況，本次測(cè)試終止于15 d。研究結(jié)果為實(shí)驗(yàn)室自制平板的保存提供了一定的數(shù)據(jù)支撐，為實(shí)驗(yàn)室節(jié)約試劑耗材成本，更好地完成檢驗(yàn)檢測(cè)工作提供了參考。

參考文獻(xiàn)

[1]王開(kāi)校.培養(yǎng)基保存方法的改善[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2014，12（19）：110-111.

[2]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測(cè)：GB/T 27405—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[3]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求：GB 4789.28—2013[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

[4]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)：GB 4789.10—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[5]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌：GB 4789.4—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[6]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)：GB 4789.30—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[7]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)：GB 4789.5—2012[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.