薛曉偉

摘 要：目的：通過(guò)參加實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可CNAS現(xiàn)場(chǎng)評(píng)審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測(cè)定，證實(shí)并提高實(shí)驗(yàn)室的著色劑測(cè)定能力。方法：參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB 5009.35—2023），優(yōu)化了提取方法和色譜條件，采用外標(biāo)法定量。結(jié)果：肉制品中酸性紅和誘惑紅的測(cè)定結(jié)果分別為1.92 mg·kg-1 、5.37 mg·kg-1，盲樣真值分別為2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1。結(jié)論：盲樣考核結(jié)果滿意，本實(shí)驗(yàn)室具備一定的著色劑檢測(cè)能力。

關(guān)鍵詞：酸性紅；誘惑紅；高效液相色譜法

Validation of the Determination Ability of Acid Red and Alluring Red in Meat Products

Abstract： Objective： To confirm and improve the ability of the laboratory to determine the acid red and alluring red in meat products by participating in CNAS field assessment. Method： According to the GB 5009.35—2023， the extraction method and chromatographic conditions were optimized， and external standard method was used for quantification. Result： The determination results of acid red and alluring red in meat products were1.92 mg·kg-1 and?5.37 mg·kg-1，the true values of blind samples were 2.07 mg·kg-1 and 5.35 mg·kg-1，respectively. Conclusion： The result of blind sample examination is satisfactory， and the laboratory has certain capabilities in detecting colorants.

Keywords： acid red; alluring red; high-performance liquid chromatography

肉制品含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，對(duì)人體健康有益。隨著生活水平的逐步提升，人們的要求也越來(lái)越高。除了最基本的衛(wèi)生要求外，也會(huì)對(duì)色、香、味有所要求[1]。而合成色素因具有改善色澤的特點(diǎn)，在現(xiàn)代食品加工業(yè)中有非常廣泛的應(yīng)用[2]。但合成色素大多數(shù)是由苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品經(jīng)化學(xué)合成而來(lái)，具有潛在的致瀉性、臟器功能損害與致癌性，因此對(duì)化學(xué)色素的檢測(cè)監(jiān)管相當(dāng)重要[3]。針對(duì)合成著色劑含量檢測(cè)，部分文獻(xiàn)、專(zhuān)利中已經(jīng)有過(guò)相關(guān)的報(bào)道，且我國(guó)也有相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。但GB 5009.35—2023中樣品前處理過(guò)程過(guò)于復(fù)雜，試驗(yàn)所用時(shí)間較長(zhǎng)，在日常面對(duì)大批量的檢驗(yàn)任務(wù)時(shí)效率太低。本文通過(guò)優(yōu)化提取方法和色譜條件，使得方法的實(shí)用性更強(qiáng)，能有效排除基質(zhì)干擾，同時(shí)顯著提高回收率。

盲樣考核是對(duì)未知樣品進(jìn)行測(cè)定，是為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，確保日常檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠而必須進(jìn)行的一項(xiàng)質(zhì)量控制活動(dòng)。它是中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）和中國(guó)計(jì)量認(rèn)證（China Metrology Accreditation，CMA）認(rèn)證評(píng)審的考核內(nèi)容，能直接反映實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備和人員檢測(cè)技術(shù)的實(shí)際水平和出具報(bào)告的能力[4-7]。本次盲樣評(píng)估是通過(guò)參加實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可CNAS現(xiàn)場(chǎng)評(píng)審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測(cè)定，檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的著色劑檢測(cè)能力，提高實(shí)驗(yàn)室在著色劑檢測(cè)技術(shù)上的競(jìng)爭(zhēng)力。本實(shí)驗(yàn)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB 5009.35—2023），優(yōu)化了提取方法和色譜條件，采用外標(biāo)法定量。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

酸性紅（1 000 ?g·mL-1）、誘惑紅（1 000 ?g·mL-1），北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司；甲醇（色譜純）；乙酸銨（色譜純）；無(wú)水乙醇（分析純）；氨水（分析純）；超純水；XS204梅特勒-托利多電子天平；IKA? MS3漩渦混合器；HC-3018高速離心機(jī)；KQ-500DE 超聲波清洗器；戴安U3000 高效液相色譜儀（DAD 檢測(cè)器）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），序列號(hào)：USCL134794；流動(dòng)相A為20 mmol·L-1乙酸銨溶液，B為甲醇；梯度洗脫；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍400～800 nm，檢測(cè)波長(zhǎng)：520 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取0.5 mL酸性紅、誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，加超純水定容至10 mL，得到酸性紅、誘惑紅質(zhì)量濃度均為50 ?g·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別吸取一定量的上述混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于容量瓶中，用超純水定容至10 mL，得到質(zhì)量濃度分別為0.2 ?g·mL-1、0.5 ?g·mL-1、1.0 ?g·mL-1、2.0 ?g·mL-1、5.0 ?g·mL-1和10.0 ?g·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.3 樣品制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣2 g（精確至0.00l g），置于50 mL具塞離心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，渦旋1 min，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，渦旋混勻，于80 ℃水浴超聲30 min，8 000 r·min-1離心5 min，取10 mL上清液于50 ℃氮?dú)鉂饪s至近干，準(zhǔn)確加入2 mL pH值為9.0的乙酸銨緩沖溶液溶解，溶液用針筒過(guò)濾器，孔徑0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去5滴濾液，取續(xù)濾液作為待測(cè)液。空白試驗(yàn)同上。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的選擇

選取已知酸性紅和誘惑紅含量的鹵肉陽(yáng)性樣品，以乙醇氨水溶液為提取劑，在相同提取時(shí)間下，比較不同溫度超聲水浴的提取效率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。當(dāng)溫度≥80 ℃后，提取效果趨于穩(wěn)定，回收率≥92%，符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）要求。綜合考慮節(jié)約能效以及實(shí)驗(yàn)安全問(wèn)題，決定選擇80 ℃水浴超聲提取方式。

2.2 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)以甲醇和20 mmol·L-1乙酸銨溶液為流動(dòng)相，以色譜圖為依據(jù)，考察了不同洗脫梯度對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，在保證分離效果的情況下，綜合考慮酸性紅和誘惑紅保留時(shí)間、峰形、峰面積以及靈敏度等因素，選擇流動(dòng)相梯度比例如表2所示。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按1.2.2項(xiàng)方法配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程及相關(guān)系數(shù)。酸性紅：y=0.463 1x-0.063 7（r=0.999 6）；誘惑紅：y=0.429 9x-0.010 7（r=0.999 9）。在質(zhì)量濃度為0.2～10.0 μg·mL-1 時(shí)，酸性紅、誘惑紅的峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 方法驗(yàn)證

2.4.1 回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取鹵肉陰性樣品9份，添加3個(gè)不同水平的酸性紅和誘惑紅混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（50 ?g·mL-1）進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)：第1、2、3份加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.04 mL，第 4、5、6份加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.08 mL，第7、8、9份加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.40 mL?；厥章蕼y(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由3表可知，回收率符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢驗(yàn)》（GB/T 27404—2008）附錄F要求[5]。

2.4.2 精密度試驗(yàn)

取回收試驗(yàn)鹵肉加標(biāo)樣品3份（每個(gè)水平各1份），連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算精密度。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4.3 檢出限確定

稱(chēng)取鹵肉陰性樣品1份，取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（50 ?g·mL-1）0.01 mL，按試樣分析步驟處理測(cè)定，目標(biāo)物各組分色譜峰信噪比：酸性紅為S/N=8.2（＞3），誘惑紅為S/N=12.3（＞3）。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)稱(chēng)樣量為2 g，各目標(biāo)組分的方法檢出限為酸性紅：0.3? mg·kg-1，誘惑紅：0.3? mg·kg-1。

2.5 盲樣考核試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)室盲樣考核能力驗(yàn)證一般以《ISO13528實(shí)驗(yàn)室間能力比對(duì)試驗(yàn)》經(jīng)典Z值法評(píng)估實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)檢測(cè)水平，Z值的大小代表實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果與中位值的偏離程度，而符號(hào)“+”和“-”代表與中位值的偏離方向，一般|Z|≤1為結(jié)果滿意[6]。

本次對(duì)盲樣進(jìn)行檢測(cè)，稱(chēng)取兩份盲樣考核鹵肉制品進(jìn)行試驗(yàn)，采用已建立的方法進(jìn)行測(cè)試，做2次平行試驗(yàn)。酸性紅和誘惑紅測(cè)定結(jié)果分別為1.92 mg·kg-1、5.37 mg·kg-1，盲樣真值分別為2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1，Z值分別為-0.65和0.17，|Z|均小于1，結(jié)果均為滿意。

2.6 方法應(yīng)用

隨機(jī)抽取市內(nèi)各大市場(chǎng)及商超的鹵肉樣品共30批次，應(yīng)用本方法進(jìn)行合成著色劑的測(cè)定。其中1份樣品檢出酸性紅，檢出濃度為0.92 mg·kg-1，其余29批均未檢出。該方法更適用于實(shí)驗(yàn)室日常大批量的監(jiān)督抽檢任務(wù)。

3 結(jié)論

盲樣考核能夠在一定程度上評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的管理水平和檢測(cè)者的綜合檢測(cè)能力。本次參加實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可CNAS現(xiàn)場(chǎng)評(píng)審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測(cè)定，準(zhǔn)確性較高，考核結(jié)果為滿意。本研究總結(jié)了該盲樣評(píng)估試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，優(yōu)化后的方法簡(jiǎn)便高效、精密度好，回收率高，能準(zhǔn)確且快速地測(cè)定鹵肉制品中著色劑的含量。

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