李一蘭?王丹?付曉麗?劉旭春?張玲變?周曉溪

摘要： 目的 評(píng)價(jià)目前國(guó)產(chǎn)氨芐西林膠囊的質(zhì)量現(xiàn)狀及存在問題。方法 按國(guó)家藥品抽檢計(jì)劃總體要求，采用法定檢驗(yàn)方法結(jié)合探索性研究對(duì)氨芐西林膠囊樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，通過對(duì)雜質(zhì)譜、溶出度、溶出曲線、原料藥對(duì)制劑質(zhì)量的影響和包裝材料對(duì)制劑質(zhì)量的影響等項(xiàng)目的考察，分析本品的質(zhì)量狀況。結(jié)果 按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)103批次樣品，合格率100%，與2016年氨芐西林膠囊國(guó)抽結(jié)果比較，產(chǎn)品質(zhì)量總體持續(xù)穩(wěn)定。探索性研究對(duì)各雜質(zhì)的來源與結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確證；溶出度測(cè)定方法采用HPLC法檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)排除膠囊殼干擾后結(jié)果無明顯差異；不同企業(yè)樣品的溶出曲線存在較大差異；原料藥的質(zhì)量影響制劑質(zhì)量；不同包裝氨芐西林膠囊在相同的放置條件下雜質(zhì)變化差異較大。結(jié)論 氨芐西林膠囊質(zhì)量總體較好，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需進(jìn)一步完善，建議修訂溶出度測(cè)定方法為HPLC法以消除膠囊殼的干擾；建議企業(yè)開展仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)，選用質(zhì)量更好的原料藥，選用防潮效果更好的鋁塑鋁包裝，或者在鋁塑泡罩外加防潮袋。

關(guān)鍵詞：氨芐西林；質(zhì)量分析；溶出曲線；膠囊

中圖分類號(hào)：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Quality assessment of ampicillin capsules

Abstract Objective This study evaluated the current quality status and existing problems with domestic ampicillin capsules. Methods According to the overall requirements of the national drug sampling plan， the sample of ampicillin capsules was tested using statutory methods combined with exploratory research. The quality status of this product was analyzed by examining impurity profiles， dissolution， dissolution curve， the impact of raw materials on the quality of the products and the impact of packaging materials on the quality of the preparation. Results A total of 103 batches of samples were tested according to the specifications， and all of them complied with regulations. Compared with the results obtained in 2016， the product quality of ampicillin capsules was generally stable. Exploratory research had confirmed the sources and structures of various impurities in the products. There was no significant difference between the results of the HPLC test and those of the standard test after excluding the interference of the capsule shell. The dissolution curves of samples from different manufacturers were significantly different. The quality of the raw materials affected the quality of the products. The impurity changes of ampicillin capsules with different packages varied significantly under the same storage conditions. Conclusion The quality of ampicillin capsules was generally good， and the current specifications needed to be further improved. It was recommended to revise the dissolution determination method to the HPLC method to eliminate the interference from the capsule shell. It was also recommended that enterprises carry out a consistent evaluation of the quality and efficacy of generic drugs， choose better-quality raw materials， choose aluminum foil-plastic-aluminum foil packaging with a better moisture-proof effect， or add a moisture-proof bag to the aluminum-plastic blister.

Key words Ampicillin; Quality evaluation; Dissolution curve; Capsules

氨芐西林，曾用名氨芐青霉素，為廣譜半合成青霉素類抗生素[1-2]，由英國(guó)Beecham研究所于1961年合成。氨芐西林膠囊為口服制劑，活性成分為氨芐西林三水合物，主要用于治療敏感細(xì)菌所致的呼吸道、泌尿道、消化道和耳鼻喉等各種感染性疾病[3-5]，不良反應(yīng)主要為過敏反應(yīng)。國(guó)內(nèi)1965年由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院研制成功。

氨芐西林膠囊執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-（HD-0981）-2002-2012[6]，其在英國(guó)藥典2023年版及美國(guó)藥典45版中均被收載，但日本藥局方第17改正版未收載該制劑。2016年曾對(duì)氨芐西林膠囊進(jìn)行過國(guó)家藥品抽檢，研究表明國(guó)產(chǎn)氨芐西林膠囊的總體質(zhì)量情況良好。本文結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)和探索性研究檢驗(yàn)結(jié)果，對(duì)國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上氨芐西林膠囊的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行比較分析，并對(duì)2016和2022年的抽檢結(jié)果進(jìn)行縱向比較，對(duì)產(chǎn)品存在的主要質(zhì)量問題進(jìn)行探討，從而對(duì)完善現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提出合理建議，為進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量提供方向。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜儀（美國(guó)賽默飛公司）； AL-240電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）； CPA225D電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；V30水分滴定儀（瑞士Mettler Toledo公司）；SOTAX AT自動(dòng)溶出儀（瑞士Sotax公司）；U3000/QE液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo Scientific公司）。

1.2 試藥

氨芐西林對(duì)照品（批號(hào)130410-201908，含量：85.6%）；頭孢拉定對(duì)照品（批號(hào)130427-201708，含量：頭孢拉定88.4%；頭孢氨芐0.81%）；氨芐西林系統(tǒng)適用性對(duì)照品（批號(hào)130618-201202）均購自中國(guó)食品藥品檢定研究院。水為超純水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.3 樣品

氨芐西林膠囊為2022年國(guó)家藥品抽檢樣品，共103批，其中抽自生產(chǎn)企業(yè)26批，經(jīng)營(yíng)單位86批，使用單位1批，涉及國(guó)內(nèi)25家生產(chǎn)企業(yè)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)

102批次按國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-（HD-0981）-2002-2012檢驗(yàn)，1批次按進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)JX20140306檢驗(yàn)[7]。主要項(xiàng)目包括溶出度、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定等。

2.2 探索性研究

根據(jù)法定檢驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[8-9]以及品種特點(diǎn)、企業(yè)調(diào)研等情況，對(duì)本品的雜質(zhì)譜、溶出度、溶出曲線、原料藥對(duì)制劑質(zhì)量的影響、不同包裝材料對(duì)樣品質(zhì)量的影響等項(xiàng)目進(jìn)行研究。

2.2.1 雜質(zhì)譜研究

（1）按WS-10001-（HD-0981）-2002-2012標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)方法測(cè)定樣品。

（2）雜質(zhì)的確證：將單個(gè)雜質(zhì)分離后通過LC-MS測(cè)定，色譜條件：色譜柱MGⅡ（5 μm ，3.0 mm ×150? mm）；以冰醋酸溶液-乙腈-1 mmol/L乙酸銨溶液（0.3：50：950， V/V/V）為流動(dòng)相A，冰醋酸溶液-乙腈-1 mmol/L乙酸銨溶液（0.3：400：600， V/V/V）為流動(dòng)相B；按表1進(jìn)行梯度洗脫；流速： 0.3 mL/min；柱溫： 30 ℃；波長(zhǎng)254 nm。利用質(zhì)譜對(duì)雜質(zhì)峰進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)掃描分析。

2.2.2 溶出度測(cè)定

氨芐西林膠囊溶出度按WS-10001-（HD-0981）-2002-2012標(biāo)準(zhǔn)，溶出方法不變，檢測(cè)方法改為HPLC法，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定。選取標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)中存在膠囊殼干擾的12批樣品進(jìn)行測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較。

2.2.3 溶出曲線分析

因未能采購到參比制劑（DAVA Pharmaceuticals INC），且國(guó)內(nèi)目前沒有通過仿制藥一致性評(píng)價(jià)的氨芐西林膠囊，故選取市場(chǎng)份額較大的Z企業(yè)氨芐西林膠囊作為參比制劑。選取大于6批次的6家企業(yè)（含Z企業(yè)）0.25 g規(guī)格的樣品，參照日本橙皮書氨芐西林膠囊的溶出曲線測(cè)定方法，采用籃法，分別以水、pH3.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液、pH4.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液和pH6.8磷酸鹽緩沖液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，分別于5、10、15、30、45、60、90、120和180 min時(shí)取樣，HPLC法測(cè)定，繪制溶出曲線。

2.2.4 原料藥對(duì)制劑質(zhì)量的影響

選取同一家制劑企業(yè)使用不同原料生產(chǎn)的樣品各1批，置于溫度40 ℃、相對(duì)濕度75%的條件下，分別放置20、40和60 d，與0 d的樣品進(jìn)行比較，分析其雜質(zhì)的變化情況。

2.2.5 不同包裝材料對(duì)樣品質(zhì)量的影響

選取企業(yè)1和企業(yè)2各2批不同包裝的氨芐西林膠囊以及其他企業(yè)不同包裝的樣品共9批次，置于溫度

40 ℃、相對(duì)濕度75%的條件下，分別放置20、40和

60 d，與0 d的樣品進(jìn)行比較，分析其雜質(zhì)的變化情況。

3 結(jié)果與討論

3.1 法定檢驗(yàn)結(jié)果

按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，103批次樣品均符合規(guī)定，合格率為100%。溶出度、有關(guān)物質(zhì)，含量測(cè)定等主要檢查項(xiàng)目與產(chǎn)品質(zhì)量密切相關(guān)，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析。

（1）有關(guān)物質(zhì) 103批次樣品按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，合格率100%。其中單個(gè)雜質(zhì)為0.11%～0.64%，均未超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限度1.0%；總雜質(zhì)為0.56%～2.87%，均未超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限度3.0%。

（2）溶出度 103批次樣品的溶出度值在72%～109%之間，平均溶出度為96.9%。同一企業(yè)樣品的溶出度批內(nèi)（6粒）的RSD值在0.9%～13.2%之間，表明部分樣品溶出均一性較差。部分企業(yè)批次間差異較大，提示這些企業(yè)的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性和控制水平有待提高。標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)使用的膠囊殼對(duì)溶出度測(cè)定結(jié)果存在干擾，結(jié)果偏高。

（3）含量測(cè)定 103批次樣品的含量在93.0%～102.9%之間，平均含量為97.7%。呈正態(tài)分布，對(duì)不同企業(yè)樣品的含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，組間P＜0.05，表明各企業(yè)投料差異較大。

（4）質(zhì)量縱向比較 按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，氨芐西林膠囊2016及2022年的合格率均為100%，質(zhì)量狀況良好，比較穩(wěn)定。其中，2016年樣品溶出度多數(shù)集中在95%～112%之間，平均溶出度為106%，檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)部分廠家使用的膠囊殼對(duì)溶出度測(cè)定存在一定干擾，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高[3]；2022年檢驗(yàn)中仍發(fā)現(xiàn)膠囊殼干擾問題，扣除膠囊殼干擾后，樣品溶出度在72%～109%之間，平均溶出度為96.9%。2016年樣品含量在90.8%～105.7%范圍內(nèi)，平均值為96.5%[3]；2022年樣品含量在93.0%～102.9%范圍內(nèi)，平均值為97.7%。法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)說明該品種含量控制水平2022年較2016年略有提升，部分企業(yè)溶出度的控制水平還有待提高。

3.2 探索性研究結(jié)果

3.2.1 雜質(zhì)譜分析

氨芐西林系統(tǒng)適用性溶液圖譜見圖1。氨芐西林膠囊共檢出22個(gè)雜質(zhì)，各雜質(zhì)峰與主峰分離良好，典型色譜圖見圖2。利用氨芐西林系統(tǒng)適用性對(duì)照品確證了其中的5個(gè)雜質(zhì)；通過LC-MS，結(jié)合氨芐西林合成路線、β-內(nèi)酰胺類質(zhì)譜裂解規(guī)律[10-12]，推測(cè)了4個(gè)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，雜質(zhì)名稱見表2。103批次樣品中除1批樣品為氨芐西林輕粉與輔料混合制粒外，其余102批次樣品均為氨芐西林重粉與輔料直接混合填充，未經(jīng)過制?；蚋稍锏?，工藝過程對(duì)雜質(zhì)影響較小。與2016年氨芐西林膠囊國(guó)抽有關(guān)物質(zhì)探索研究相比，樣品檢出的雜質(zhì)總數(shù)相差不大，主要已知雜質(zhì)基本一致，為氨芐西林噻唑酸，2，5-二酮哌嗪-（2R）氨芐西林、氨芐西林閉環(huán)二聚體，大部分企業(yè)最大雜質(zhì)為氨芐西林閉環(huán)二聚體。2016年部分樣品氨芐西林噻唑酸含量超過0.5%，2022年103批次樣品氨芐西林噻唑酸及氨芐西林噻唑酸異構(gòu)體總量均低于0.4%，表明氨芐西林結(jié)晶工藝總體有所提高。

3.2.2 溶出度測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)采用UV法測(cè)定，部分企業(yè)膠囊殼干擾測(cè)定結(jié)果，使結(jié)果偏高。HPLC法測(cè)定結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)扣除膠囊殼影響后結(jié)果無明顯差異（表3）。表明采用HPLC法可以消除膠囊殼的干擾，而且檢驗(yàn)更加高效便捷。

3.2.3 溶出曲線研究

口服固體制劑的溶出特征是其重要的質(zhì)量屬性。6家企業(yè)樣品在水、pH3.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液、pH4.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液和pH6.8磷酸鹽緩沖液4種介質(zhì)中的溶出曲線見圖3。

采用f2因子評(píng)價(jià)法，比較6家企業(yè)的溶出曲線（表4）。5家企業(yè)樣品溶出曲線與企業(yè)6（參比制劑）相比，僅在部分介質(zhì)中相似，在pH6.8磷酸鹽緩沖液中均不相似，說明不同的處方和生產(chǎn)工藝對(duì)產(chǎn)品的溶出行為有較大影響，提示不同企業(yè)樣品存在體內(nèi)生物不等效的可能性。與2016年氨芐西林膠囊國(guó)抽溶出特性研究所得出的 “不同生產(chǎn)廠家的氨芐西林膠囊之間溶出行為有顯著差異，說明不同的處方和生產(chǎn)工藝對(duì)產(chǎn)品的溶出行為影響較大”結(jié)果一致。目前國(guó)內(nèi)尚未有氨芐西林膠囊通過仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)，建議企業(yè)參照原研藥品積極優(yōu)化處方工藝，嚴(yán)格工藝控制過程，盡早開展一致性評(píng)價(jià)工作。

3.2.4 原料藥對(duì)制劑質(zhì)量的影響

（1）對(duì)比原料藥與制劑雜質(zhì)檢測(cè)情況發(fā)現(xiàn)，原料藥中有16個(gè)雜質(zhì)，未檢出制劑樣品中的4、7、11、14、20和22號(hào)雜質(zhì)，但雜質(zhì)總體分布情況與制劑相似，原料藥質(zhì)量影響著制劑的質(zhì)量。該結(jié)果與2016年氨芐西林膠囊國(guó)抽有關(guān)物質(zhì)探索研究結(jié)果一致。

（2）在加速試驗(yàn)中，兩種原料來源的樣品，氨芐西林閉環(huán)二聚體均減小，18號(hào)雜質(zhì)（氨芐西林閉環(huán)二聚體異構(gòu)體）均增大，總雜質(zhì)均增大，推測(cè)是在加速試驗(yàn)過程中氨芐西林閉環(huán)二聚體轉(zhuǎn)變成18號(hào)雜質(zhì)；使用原料1的樣品，18號(hào)雜質(zhì)和總雜質(zhì)增幅較使用原料2的樣品大（圖4）。說明原料藥質(zhì)量影響制劑質(zhì)量。

3.2.5 不同包裝材料對(duì)樣品質(zhì)量的影響

在溫度40 ℃，相對(duì)濕度75%條件下，按有關(guān)物質(zhì)方法測(cè)定樣品中雜質(zhì)。企業(yè)1鋁塑泡罩加防潮袋包裝的樣品雜質(zhì)變化幅度比塑料瓶包裝的?。黄髽I(yè)2鋁塑鋁包裝的樣品雜質(zhì)變化幅度比鋁塑泡罩包裝的小。比較不同企業(yè)的樣品，鋁塑鋁包裝的樣品雜質(zhì)變化幅度比鋁塑泡罩?。▓D5～6）。因此，建議企業(yè)選用防潮效果更好的鋁塑鋁包裝，或者在鋁塑泡罩外再加防潮袋以阻隔環(huán)境中水分對(duì)樣品的影響。

4 小結(jié)

本次抽檢結(jié)果顯示，氨芐西林膠囊總體質(zhì)量較好，產(chǎn)品合格率100%。與2016年氨芐西林膠囊國(guó)抽結(jié)果比較，其各項(xiàng)指標(biāo)變化不大，提示產(chǎn)品質(zhì)量總體持續(xù)穩(wěn)定。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，氨芐西林膠囊標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-（HD-0981）-2002-2012溶出度測(cè)定采用UV法，存在膠囊殼干擾的情況，建議修訂為HPLC法測(cè)定；不同企業(yè)樣品的溶出曲線存在較大差異，建議企業(yè)參照原研藥物優(yōu)化處方工藝，盡早開展仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)工作；原料藥的質(zhì)量影響制劑質(zhì)量，建議企業(yè)選用高質(zhì)量的原料藥；不同包裝材料氨芐西林膠囊在相同的放置條件下雜質(zhì)變化差異較大，說明包裝材料的優(yōu)劣對(duì)本品質(zhì)量存在一定的影響，建議企業(yè)選用防潮效果更好的鋁塑鋁包裝，或者在鋁塑泡罩外再加防潮袋以阻隔環(huán)境中水分對(duì)樣品的影響。

參 考 文 獻(xiàn)

薛詠蘭， 滕鈺， 黃婕， 等. 水分對(duì)氨芐西林膠囊穩(wěn)定性的影響[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2018， 43（3）： 303-306.

李香荷， 王強(qiáng)， 張軼華， 等. 國(guó)產(chǎn)氨芐西林丙磺舒膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2021， 46（1）： 53-61.

黃婕， 滕鈺， 徐洪， 等. 國(guó)產(chǎn)氨芐西林膠囊質(zhì)量評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2018， 43（3）： 296-301.

國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典臨床用藥須知： 化學(xué)藥和生物制品卷[S]. （2010年版）. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2011： 632-633.

岑海燕， 吳建國(guó)， 陳燕， 等. 老年性尿路感染的流行病學(xué)及診治現(xiàn)狀[J]. 國(guó)外醫(yī)藥（抗生素分冊(cè)）， 2023， 44（6）： 379-382.

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[S]. 2012： WS-10001-（HD-0981）-2002-2012.

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局. 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)[S]. 2014： JX20140306.

胡昌勤. 對(duì)抗生素藥品評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)基本思路與方法的思考[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2013， 38（1）： 1-11.

胡昌勤. 國(guó)內(nèi)抗生素藥品的質(zhì)量現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2018， 43（3）： 255-261.

李桃. 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥物降解產(chǎn)物及雜質(zhì)分析中的應(yīng)用[D]. 石家莊： 河北醫(yī)科大學(xué)， 2014.

寧志強(qiáng)， 李猛， 張宏森， 等. 氨芐西林質(zhì)譜解析及離子化方式研究[J]. 化學(xué)與粘合， 2013， 35（5）： 34-35.

李瑋， 張偉清， 李翔， 等. 阿莫西林、氨芐西林混合降解雜質(zhì)對(duì)照品的研究與應(yīng)用[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2014， 49（9）： 1310-1314.