張鳳麗，李靜茹，彭培植，黃文琪，趙立娜

（福建農(nóng)林大學(xué)國家菌草工程技術(shù)研究中心，福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建福州 350002）

灰樹花（Grifola frondosa）是一種具有食用和藥用價(jià)值的真菌[1,2]，主要含碳水化合物、維生素、蛋白質(zhì)和有多種生物活性的甾醇等[3]?；覙浠ㄒ蚱渚哂歇?dú)特的藥用及營養(yǎng)價(jià)值而受到廣泛關(guān)注[4]，在全球菌類產(chǎn)量中位居第二[5]?；覙浠ǖ鞍踪|(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25.20%，人體所需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.68%，其中必需氨基酸占總氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的45.50%?；覙浠ǖ鞍踪|(zhì)因具有營養(yǎng)價(jià)值和平衡機(jī)體所需的氨基酸而備受關(guān)注[6]?；覙浠ㄟ€有多種生理活性，如抗腫瘤[7,8]、免疫調(diào)節(jié)，抑菌、抗病毒、抗糖尿病、降血糖[9]等。作為灰樹花的活性成分之一，灰樹花多肽也具有抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、降血脂和降血糖等活性[10]。

鋅是人體內(nèi)不可缺少的微量元素，大多分布在骨骼、肌肉、血漿和頭發(fā)[11]，對人體健康及生長發(fā)育有重要的生物學(xué)作用[12]。缺鋅會(huì)造成生長發(fā)育緩慢，食欲不振等現(xiàn)象；鋅參與眾多蛋白質(zhì)組成和酶的合成，缺鋅會(huì)影響人體維生素A 的代謝，影響還原酶活性，使維生素A 的利用率降低[13]；鋅對人體新陳代謝至關(guān)重要，有多種生物學(xué)作用，包括催化和調(diào)節(jié)功能，它還是多種酶合成的輔助因子[14]。鋅元素是免疫器官胸腺發(fā)育的營養(yǎng)素，只有鋅元素充足才能有效保證胸腺發(fā)育，正常分化T 淋巴細(xì)胞，促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞免疫功能。孕期胎兒生長發(fā)育需要攝入較多鋅元素，因此孕婦是易缺鋅人群，已經(jīng)有研究表明，大部分孕婦均有鋅缺乏的情況，特別是孕早期，孕婦必須通過生理調(diào)節(jié)來補(bǔ)充鋅元素，以此來維持自身鋅及胎兒的鋅需求[15]。郭洪輝等[16,17]的研究表明羅非魚鱗膠原肽螯合鋅有抗氧化及抑菌活性，河豚魚皮膠原寡肽螯合鋅在體內(nèi)外都有抗氧化活性，故選灰樹花多肽作為鋅螯合的原料。

近年來，關(guān)于灰樹花多糖活性的研究已有較大突破，而對于灰樹花多肽及其螯合物的研究相對較少，故本文對灰樹花多肽-鋅螯合物進(jìn)行研究，并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，進(jìn)一步研究灰樹花多肽-鋅螯合物對孕期缺鋅鼠后代的影響，為灰樹花多肽進(jìn)一步的研究利用提供理論根據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料

灰樹花，慶元縣宏億農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司提供。

1.1.2 試劑

復(fù)合蛋白酶（活力≥120 U/mg），北京索萊寶科技有限公司；無水乙醇（CH3CH2OH）、乙二胺四乙酸（EDTA）、氫氧化鈉（NaOH）、二硫腙、氯化鋅（ZnCl2）、碳酸氫銨（NH4HCO3）、乙腈、甲酸等試劑均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鋅離子檢測試劑盒、堿性磷酸酶（AKP）測定試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒等購于南京建成生物工程研究所。

1.1.3 儀器

低速離心機(jī)，湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司；pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；冷凍干燥機(jī)，河北國輝實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；水浴恒溫振蕩器，常州精達(dá)儀器制造有限公司；紅外光譜儀，美國Thermo Fisher 公司；紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；X-射線粉末衍射機(jī)，荷蘭飛利浦公司；SEM 場發(fā)射掃描電子顯微鏡，美國FEI公司；冷凍離心機(jī)，艾本德中國有限公司；離心濃縮儀，上海輔澤商貿(mào)有限公司。

1.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物

由福州吳氏動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號：SCXK(滬)2017-0005），選取8 周齡，體質(zhì)量為（30±2）g，SPF 級的ICR 成年雌鼠，（每組8 只，同批次雄鼠每組8 只（僅供雌鼠受孕），一周適應(yīng)期小鼠可以自由飲食飲水。生活環(huán)境溫度20～25 ℃，濕度45%～55%，晝夜12 h 節(jié)律均衡。仔鼠每組隨機(jī)選取雌雄仔鼠各8 只。

1.2 GPs-Zn 的制備

按照熊煜等[10]的方法提取得到GPs，配制GPs溶液（1 g/100 mL），ZnCl2溶液（0.02 mol/L），GPs溶液和ZnCl2溶液體積比為2.5:1，充分混合后調(diào)節(jié)pH 值為6.7，將GPs 與ZnCl2混合溶液置于47 ℃恒溫水浴搖床中充分反應(yīng)35 min。反應(yīng)結(jié)束冷卻至室溫，加入體積分?jǐn)?shù)95%乙醇洗滌靜置過夜后離心（4 000 r/min，20 min）棄上清，將沉淀冷凍干燥得到GPs-Zn。用火焰原子吸收光譜儀測得GPs-Zn 的鋅離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.41%。

1.3 GPs-Zn 的結(jié)構(gòu)表征

1.3.1 電鏡掃描（SEM）觀察

掃描電子顯微鏡觀察時(shí)，用導(dǎo)電膠將4 個(gè)GPs或GPs-Zn 樣品粘到樣品觀察臺，在高真空環(huán)境下用金噴濺鍍膜，并分別用5 000×和10 000×的掃描電鏡觀察拍照。

1.3.2 X-射線粉末衍射（XRD）

取適量GPs 和GPs-Zn 分別磨成粉，以4°/min的掃描速度從5°掃描到90°，發(fā)射狹縫0.3 mm，防散射狹縫1°，然后通過X 射線衍射進(jìn)行分析。

1.3.3 傅里葉變換紅外光譜（FT-IR）掃描

將1 mg 凍干的樣品與100 mg 干燥的溴化鉀（KBr）混合加載至紅外光譜儀上，通過FT-IR 光譜紅外分光光度計(jì)記錄波長4 000 cm-1至550 cm-1紅外光譜掃描圖。

1.3.4 紫外（UV）光譜掃描

通過紫外分光光度計(jì)記錄GPs 和GPs-Zn 在202～800 nm 波長范圍的紫外光譜。

1.4 GPs-Zn 對小鼠后代的影響

1.4.1 動(dòng)物分組及造模

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，正常飲食組飼料中鋅離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)30 mg/kg；缺鋅飲食組飼料中鋅離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 mg/kg。根據(jù)中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦的鋅離子攝入量及體表面積折算的等效劑量比值，結(jié)合實(shí)驗(yàn)前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故擬定如下分組和仔鼠的灌胃劑量：

組1（CO）：正常孕鼠分娩的仔鼠，正常飲食，灌胃超純水；

組2（ZD）：缺鋅孕鼠分娩的仔鼠，缺鋅喂養(yǎng)，灌胃超純水；

組3（ZD+）：缺鋅孕鼠分娩的仔鼠，正常飲食，灌胃超純水；

組4（ZS1）：缺鋅孕鼠分娩的仔鼠，缺鋅喂養(yǎng)，灌胃高質(zhì)量濃度GPs-Zn（150 mg/mL）；

組5（ZS2）：缺鋅孕鼠分娩的仔鼠，缺鋅喂養(yǎng)，灌胃低質(zhì)量濃度GPs-Zn（50 mg/mL）；

組6（PF1）：正常孕鼠分娩的仔鼠，正常飲食，灌胃高質(zhì)量濃度GPs-Zn（150 mg/mL）；

組7（PF2）：正常孕鼠分娩的仔鼠，正常飲食，灌胃低質(zhì)量濃度GPs-Zn（50 mg/mL）。

1.4.2 生長發(fā)育的變化

記錄實(shí)驗(yàn)小鼠的體重變化，飼喂7 周，從第3周小鼠單獨(dú)喂養(yǎng)，開始稱重。

1.4.3 血清指標(biāo)的測定

小鼠禁食12 h 后，對其進(jìn)行眼球取血，并將血液保存至含有抗凝劑的2 mL 離心管中，靜置2 h 后置于4 ℃條件下離心10 min（3 000 r/min)，取上清液于-20 ℃冰箱保藏，用于測定血清中鋅濃度，堿性磷酸酶活性和超氧化物歧化酶水平。

1.4.4 小鼠臟器指數(shù)的測定

小鼠麻醉處死后，取出胸腺和脾臟，去除其他組織，擦拭干凈，稱重并計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。計(jì)算公式如下：

式中：

T——胸腺指數(shù)，%；

S——脾臟指數(shù)，%；

M0——小鼠體質(zhì)量，g；

M1——胸腺質(zhì)量，g；

M2——脾臟質(zhì)量，g。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 11.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析（ANOVA），同時(shí)進(jìn)行LSD 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為有顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 掃描電子顯微鏡（SEM）觀察分析

掃描電子顯微鏡能夠?qū)崿F(xiàn)材料從納米到毫米的跨尺度顯微組織表征，因此，常用于元素組成的形態(tài)觀察和定量分析[18]。SEM 在5 000 ×和10 000 ×條件下觀察GPs 和GPs-Zn 的表面結(jié)構(gòu)結(jié)果如圖1 所示。在5 000 ×或10 000 ×兩種倍數(shù)下，圖中1a 和1b 所示，灰樹花多肽與鋅離子螯合前均呈片狀結(jié)構(gòu)，物質(zhì)結(jié)構(gòu)表面相對光滑，有孔狀結(jié)構(gòu)。而螯合后，如圖1c 和1d 所示，GPs-Zn 的表面呈塊狀結(jié)構(gòu)，物質(zhì)結(jié)構(gòu)呈大顆粒狀聚集，表面粗糙且有小顆粒，可能是鋅離子晶體，這與王晴晴等[19]蛋清多肽-鐵螯合后表面粗糙不平并形成了團(tuán)狀顆粒聚集體，組織結(jié)構(gòu)更加緊密結(jié)果相一致。加鋅螯合反應(yīng)后，物質(zhì)的微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。除了離子結(jié)合和配位結(jié)合外，螯合還被認(rèn)為具有一定的吸附作用[20]。

圖1 GPs和GPs-Zn的掃描電鏡圖Fig.1 SEM images of GPs and GPs-Zn

2.2 X-射線粉末衍射分析

圖2 為GPs 和GPs-Zn 的X-射線衍射圖譜。結(jié)果顯示，GPs 和GPs-Zn 均有明顯衍射峰，與GPs相比，GPs-Zn 圖譜在衍射峰的角度和相對強(qiáng)度都存在明顯差異，說明多肽與鋅螯合后結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。散射的X 射線的相位將在某些方向上增強(qiáng)，顯示出與晶體結(jié)構(gòu)相對應(yīng)的獨(dú)特衍射現(xiàn)象[21]。螯合后GPs 衍射峰相對強(qiáng)度與角度發(fā)生改變，可能是GPs的COO-、-NH2與Zn2+以離子鍵和配位鍵的形式結(jié)合導(dǎo)致晶體結(jié)構(gòu)改變[22]。

圖2 GPs和GPs-Zn的X-衍射圖譜Fig.2 XRD patterns of GPs and GPs-Zn

2.3 紅外光譜分析

由圖3 可知GPs-Zn 的紅外光譜圖不同于GPs，表明了GPs 與Zn2+結(jié)合后結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。與GPs紅外光譜相比，GPs-Zn 在3 388 cm-1處有明顯的波動(dòng)。在紅外光譜檢測中，通常會(huì)通過1 650 cm-1附近是否有吸收峰，來判斷吸收峰中是否存在C=O伸縮振動(dòng)，以1 235 cm-1附近是否有吸收峰來判斷羧酸的伸縮振動(dòng)，以此說明金屬螯合肽中是否含有-COOH 結(jié)構(gòu)[23]。由上圖可以看出在1 662 cm-1和1 244 cm-1處均有較強(qiáng)的吸收峰，表明多肽和鋅離子之間相互作用的位點(diǎn)是C=O 和-COOH，這與楊靜等[24]多肽螯合物的螯合反應(yīng)推測相似。GPs-Zn在1 088 cm-1處也有明顯的吸收峰，這種吸收峰位移和強(qiáng)度發(fā)生變化，可能是GPs 中的一些鍵與鋅離子結(jié)合成GPs-Zn 的結(jié)果。

圖3 GPs和GPs-Zn的紅外光譜Fig.3 Infrared spectra of GPs and GPs-Zn

2.4 紫外光譜分析

圖4 表明，GPs 和GPs-Zn 的紫外吸收光譜顯示出明顯的帶移位。用紫外分光光度法可以分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征，螯合后樣品的差異可以從位錯(cuò)和紫外吸收光譜強(qiáng)度的變化中進(jìn)行分析[25]。紫外吸收光譜是由于價(jià)電子的躍遷產(chǎn)生的，用以推斷物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)等，當(dāng)多肽與礦物質(zhì)離子形成配合物的過程中，改變了產(chǎn)物躍遷所需的能量，從而影響其波長和吸收程度。GPs 和GPs-Zn 的紫外吸收光譜在波長250 nm 附近處均有一個(gè)吸收峰；GPs 的最大吸收峰在波長410 nm 附近，而GPs-Zn 最大吸收峰發(fā)生了轉(zhuǎn)移，在波長250 nm 附近。這意味著GPs與Zn 離子結(jié)合可能是由于GPs 中的C=O，-COOH和-OH，-NH2與鋅離子結(jié)合，誘導(dǎo)強(qiáng)度變化和紫外光譜中的紅移，這與劉騰飛等[26]雞皮膠原蛋白多肽鋅發(fā)生螯合反應(yīng)后，螯合物的最大紫外吸收波長發(fā)生了紅移結(jié)果一致。波段紅移和強(qiáng)度變化表明GPs與鋅離子結(jié)合形成GPs-Zn[27,28]。

圖4 GPs和GPs-Zn的紫外光譜Fig.4 UV of GPs and GPs-Zn

2.5 仔鼠體質(zhì)量分析

由表1 和表2 看出在仔鼠出生3～7 周時(shí)雌雄仔鼠中ZD 組、ZD+組與空白組體質(zhì)量相比有顯著性差異。當(dāng)仔鼠出生第7 周時(shí)雌鼠中，相比于空白組，ZD 組、ZD+組、ZS1 組體質(zhì)量顯著降低，雄鼠中ZD 組、ZD+組和ZS2 組體質(zhì)量顯著降低。相比于ZD 組，GPs-Zn 可將缺鋅仔鼠體質(zhì)量提高89.98%（雌鼠）和88.30%（雄鼠）。由表1 和表2 可知，雌鼠與雄鼠ZD 組體質(zhì)量均低于CO 組、ZS 組和PF 組，ZS 組體質(zhì)量均高于ZD 組體重，雄鼠平均體質(zhì)量普遍高于雌鼠平均體質(zhì)量。雌雄仔鼠中，灌胃GPs-Zn 對雌鼠體質(zhì)量的增強(qiáng)效果更為顯著，推測可能是雌鼠更能通過GPs-Zn 來緩解因缺鋅而導(dǎo)致的體質(zhì)量下降。通過灌胃GPs-Zn 可以改善仔鼠體質(zhì)量，且相對于CO 組體質(zhì)量改善效果顯著。GPs-Zn 質(zhì)量濃度為150 mg/mL 時(shí)效果最好，對仔鼠的體質(zhì)量改善情況更加顯著，GPs-Zn 質(zhì)量濃度為50 mg/mL 時(shí)，仔鼠體質(zhì)量雖有改善，但與正常仔鼠體質(zhì)量仍存在顯著差異。當(dāng)正常飲食仔鼠灌胃GPs-Zn 體質(zhì)量會(huì)明顯異常于正常仔鼠。因此本實(shí)驗(yàn)說明，母鼠孕期缺鋅，仔鼠出生后灌胃GPs-Zn高劑量組可以改善仔鼠體質(zhì)量，幫助其恢復(fù)到正常水平，低劑量組體質(zhì)量與CO 組仍存在顯著差異。

表1 雌仔鼠體質(zhì)量變化表Table 1 Weight change of female offspring

表2 雄仔鼠體質(zhì)量變化表Table 2 Weight change of male offspring

2.6 仔鼠血清AKP 結(jié)果分析

如圖5 所示，對仔鼠進(jìn)行不同的灌胃處理，仔鼠血清AKP 會(huì)發(fā)生變化。鋅是合成AKP 必需的金屬離子，也是AKP 活性中心的組成成分和激活因子，其活性在一定范圍內(nèi)與鋅含量密切相關(guān)[29]，是鋅水平評價(jià)的敏感指標(biāo)[30]。在缺鋅狀態(tài)時(shí)，AKP 釋入血清，促使血清AKP 活性增加。用GPs-Zn 灌胃的ZS1 組和ZS2 組，缺鋅仔鼠血清中的AKP 恢復(fù)至接近正常水平，與ZD 組相比，GPs-Zn 可將堿性磷酸酶（AKP）水平降低52.28%（雌鼠）和62.48%（雄鼠）。雌雄仔鼠中，灌胃GPs-Zn 對雌性仔鼠血清AKP 水平的影響更為顯著，推測可能是雌鼠更能通過GPs-Zn 來緩解因缺鋅而導(dǎo)致的血清AKP水平的升高。母鼠缺鋅仔鼠正常飲食的ZD+組可以顯著改善血清中AKP，但雄鼠與正常飼養(yǎng)仔鼠仍有顯著性差異。結(jié)果表明，GPs-Zn 可以改善小鼠體內(nèi)AKP 水平；通過攝入不同質(zhì)量濃度的GPs-Zn 可以促使小鼠血清的AKP 恢復(fù)到正常水平，進(jìn)一步說明GPs-Zn 具有良好的恢復(fù)仔鼠血清AKP 水平的作用，楊杰等[30]研究發(fā)現(xiàn)，小肽螯合鋅可將缺鋅小鼠血清AKP 活力降低約29.91%。因鋅與AKP 合成密切相關(guān)，缺鋅仔鼠血清AKP 活力增加，灌胃GPs-Zn 后，血清AKP 活力降低，表明GPs-Zn 可改善缺鋅仔鼠血清AKP 水平。

圖5 各組血清AKP對比圖Fig.5 Comparison of serum AKP content in each group

2.7 仔鼠血清SOD 活力結(jié)果分析

如圖6 所示，與CO 組相比，ZD 組和ZD+組血清SOD 活力顯著降低，并且雄鼠與雌鼠間也有顯著差異，GPs-Zn 喂養(yǎng)的仔鼠血清中SOD 活力顯著提高，且與正常組相比，無顯著差異。與ZD 組相比，GPs-Zn 可將缺鋅仔鼠血清的超氧化物歧化酶（SOD）活力提高108.07%（雌鼠）和26.16%（雄鼠）。雌雄仔鼠中，灌胃GPs-Zn 對雌性仔鼠血清SOD 活力的影響更為顯著，推測可能是雌鼠更能通過GPs-Zn 來緩解因缺鋅而導(dǎo)致的血清SOD 活力的降低。超氧化物歧化酶存在于所有生物細(xì)胞中，能夠催化超氧化物轉(zhuǎn)化，通過攝入不同質(zhì)量濃度的GPs-Zn 可以增加機(jī)體的SOD 活力，從而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化效果，蔣麗等[31]研究發(fā)現(xiàn)，多肽可將小鼠血清SOD 活力提高約11.72%，進(jìn)一步說明GPs-Zn具有良好的提高機(jī)體抗氧化效果的作用。

圖6 各組血清SOD活力對比圖Fig.6 Comparison of serum SOD activity in each group

2.8 仔鼠血清鋅濃度結(jié)果分析

如圖7 所示，與CO 組相比，ZD 組小鼠血清鋅濃度顯著降低，并且雄性仔鼠鋅濃度降低更加顯著，表明母鼠孕期缺鋅對雄性仔鼠的血清鋅濃度影響更大。用GPs-Zn 喂養(yǎng)仔鼠可使仔鼠血清中鋅濃度顯著提高，且對孕期缺鋅導(dǎo)致的仔鼠缺鋅補(bǔ)鋅效果非常顯著，且無明顯性別差異。與ZD 組相比，GPs-Zn 可將缺鋅仔鼠鋅濃度提高14.74%（雌鼠）和29.33%（雄鼠）。雌雄仔鼠中，灌胃GPs-Zn 對雄性仔鼠血清鋅濃度的影響更為顯著，推測可能是雄鼠更能通過GPs-Zn 來補(bǔ)充鋅離子，緩解缺鋅飲食而導(dǎo)致的血清鋅濃度的降低。當(dāng)GPs-Zn 質(zhì)量濃度為50 mg/mL時(shí)，雄性仔鼠血清的鋅濃度顯著增強(qiáng)，且明顯高于其他各組，低質(zhì)量濃度GPs-Zn 對缺鋅仔鼠補(bǔ)鋅效果較好，這與陳銘[32]灌胃低質(zhì)量濃度蛋白肽螯合鈣的大鼠中血鈣濃度高于灌胃中質(zhì)量濃度的結(jié)果相一致，推測可能是低劑量螯合物更利于機(jī)體吸收；而高、低質(zhì)量濃度對雌性小鼠鋅濃度水平的改善作用無顯著性差異，可以看出，螯合鋅對于缺鋅仔鼠的補(bǔ)鋅效果優(yōu)于正常喂養(yǎng)的仔鼠。進(jìn)一步表明，GPs-Zn 具有很好的補(bǔ)鋅效果，這與王紫旭[33]的海參鋅螯合多肽可促鋅吸收作用的研究結(jié)果一致，表明肽螯合鋅對缺鋅幼鼠補(bǔ)鋅效果較為顯著。

圖7 各組小鼠血清鋅濃度對比圖Fig.7 Comparison of serum zinc content of mice in each group

2.9 仔鼠脾臟指數(shù)結(jié)果分析

由圖8 可以看出，相比CO 組，ZD 組雌雄仔鼠的脾臟指數(shù)均顯著降低，表明缺鋅會(huì)對仔鼠脾臟的正常發(fā)育造成影響，而脾臟是機(jī)體的免疫器官，對機(jī)體的免疫力有很大影響[34]。缺鋅影響脾臟的正常發(fā)育，從而進(jìn)一步影響機(jī)體免疫力。孕期缺鋅導(dǎo)致的仔鼠缺鋅，仔鼠的脾臟指數(shù)顯著降低，機(jī)體免疫力受到影響，灌胃GPs-Zn 可顯著提高仔鼠的脾臟指數(shù)。與ZD 組相比，GPs-Zn 可將缺鋅仔鼠脾臟指數(shù)提高40.28%（雌鼠）和43.22%（雄鼠），這優(yōu)于劉銀媛等[35]的大豆多肽可將小鼠脾臟指數(shù)提高約16.67%。雌雄仔鼠中，灌胃GPs-Zn 對雄性仔鼠脾臟指數(shù)的影響更為顯著，推測可能是雄鼠更能通過GPs-Zn 來促進(jìn)脾臟發(fā)育，緩解缺鋅飲食而導(dǎo)致的脾臟發(fā)育受損。質(zhì)量濃度為150 mg/mL 時(shí)，雄性仔鼠的脾臟指數(shù)顯著高于CO 組，相對于ZD 組，GPs-Zn可提高仔鼠脾臟指數(shù)，且與仔鼠正常飲食的脾臟指數(shù)無顯著差異。

圖8 仔鼠脾臟指數(shù)分析圖Fig.8 Analysis of spleen index of offspring

2.10 仔鼠胸腺指數(shù)結(jié)果分析

由圖9 可知，相對于CO 組，ZD 組雌雄仔鼠的胸腺指數(shù)顯著下降，胸腺也是機(jī)體較大的免疫器官，缺鋅喂養(yǎng)也會(huì)對機(jī)體的胸腺發(fā)育造成影響。而對仔鼠灌胃GPs-Zn 可以顯著增強(qiáng)仔鼠的胸腺指數(shù)，且高于正常仔鼠的胸腺指數(shù)水平，表明GPs-Zn 對仔鼠胸腺的正常發(fā)育有一定促進(jìn)作用。與ZD 組相比，GPs-Zn 可將缺鋅仔鼠胸腺指數(shù)提高78.69%（雌鼠）和87.55%（雄鼠），這優(yōu)于劉銀媛[35]的大豆多肽可將小鼠胸腺指數(shù)提高約42.86%。雌雄仔鼠中，灌胃GPs-Zn 對雄性仔鼠胸腺指數(shù)的影響更為顯著，推測可能是雄鼠更能通過GPs-Zn 來促進(jìn)胸腺發(fā)育，緩解缺鋅飲食而導(dǎo)致的胸腺發(fā)育受損。在不同分組的雌雄仔鼠中，相對于雌性仔鼠，雄性仔鼠的胸腺指數(shù)整體較低。對于雌雄仔鼠而言，GPs-Zn均能將其胸腺指數(shù)恢復(fù)至正常水平。相對于ZD 組，GPs-Zn 可提高仔鼠胸腺指數(shù)，且與仔鼠正常飲食的胸腺指數(shù)無顯著差異。

圖9 仔鼠胸腺指數(shù)分析圖Fig.9 Analysis of thymus index of offspring

3 結(jié)論

X-射線粉末衍射和掃描電鏡結(jié)果表明了多肽和鋅離子螯合成一種新的物質(zhì)；紅外譜圖的對比發(fā)現(xiàn)肽鏈上的氨基和羧基參與了鋅離子的配位；紫外光譜圖發(fā)現(xiàn)，GPs-Zn 中多肽的羰基原子和鋅離子結(jié)合，誘導(dǎo)紫外光譜的紅移，表明GPs 與鋅離子結(jié)合形成GPs-Zn。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在母鼠懷孕期間缺鋅會(huì)對出生后的仔鼠造成一定的影響，GPs-Zn 可顯著（P＜0.01）提高母鼠懷孕期間因缺鋅導(dǎo)致減少的仔鼠血清中鋅離子濃度和超氧化物歧化酶（SOD）活力，降低堿性磷酸酶（AKP）水平。此外，GPs-Zn還能顯著（P＜0.01）提高仔鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。