黃達 周斌

【摘要】 目的：探究冷凍聯(lián)合派特靈對尖銳濕疣患者皮損處堿性成纖維細胞生長因子（BFGF）、激活STAT蛋白抑制因子1（PIAS1）、翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3（Foxp3）水平的影響。方法：選取100例2018年

6月—2019年6月于常州市武進人民醫(yī)院治療的尖銳濕疣患者，隨機數(shù)字表法將其分為對照治療組及聯(lián)合治療組，各50例。對照治療組采用冷凍治療，聯(lián)合治療組采用冷凍聯(lián)合派特靈治療。對比兩組γ干擾素（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）水平、T淋巴細胞亞群、BFGF、PIAS1、Foxp3、性功能評價，治療效果、復(fù)發(fā)情況等。結(jié)果：治療后，與對照治療組比較，聯(lián)合治療組IL-10、CD8+、BFGF、PIAS1、Foxp3水平均低，IFN-γ、IL-2、CD4+、CD4+/CD8+水平、性功能均高（P<0.05）。聯(lián)合治療組治療總有效率高于對照治療組，復(fù)發(fā)率低于對照治療組（P<0.05）。聯(lián)合治療組總并發(fā)癥發(fā)生率略高于對照治療組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：冷凍聯(lián)合派特靈可顯著改善尖銳濕疣患者機體免疫功能、炎癥反應(yīng)，抑制BFGF、PIAS1、Foxp3表達，改善臨床癥狀。

【關(guān)鍵詞】 尖銳濕疣 冷凍 派特靈

The Effect of Cryotherapy Combined with Pettling on the Treatment of Condyloma Acuminatum and Its Impact on the Levels of BFGF， PIAS1 and Foxp3/HUANG Da， ZHOU Bin. //Medical Innovation of China， 2024， 21（11）： 0-066

[Abstract] Objective： To explore the effect of cryotherapy combined with Pettling on the levels of basic fibroblast growth factor （BFGF）， protein inhibitory of activated STAT factor 1 （PIAS1）， and forkhead or winged helix transcription factor P3 （Foxp3） in the skin lesions of patients with condyloma acuminatum. Method： A total of 100 patients with condyloma acuminatum who underwent treatment at Changzhou Wujin People's Hospital from June 2018 to June 2019 were selected， they were divided into control treatment group and combined treatment group by random number table method， with 50 cases in each group. The control treatment group received cryotherapy， and the combined treatment group received cryotherapy combination with Pettling. Interferon-γ （IFN-γ）， interleukin-2 （IL-2）， interleukin-10 （IL-10） levels， T lymphocyte subset， BFGF， PIAS1， Foxp3， sexual function， and the treatment effect and recurrence were compared between the two groups. Result： After treatment， compared with the control treatment group， the levels of IL-10， CD8+， BFGF， PIAS1 and Foxp3 in the combined treatment group were lower， and IFN-γ， IL-2， CD4+， CD4+/CD8+， and sexual function were higher （P<0.05）. The total response rate of the combined treatment group was higher than that of the control treatment group， and the recurrence rate was lower than that of the control treatment group （P<0.05）. The overall incidence of complication in the combined treatment group was slightly higher than that in the control treatment group， the difference was not statistically significant （P>0.05）. Conclusion： Cryotherapy combined with Pettling can significantly improve the immune function and inflammatory response of patients with condyloma acuminatum， inhibit the expression of BFGF， PIAS1 and Foxp3， and improve the clinical symptoms.

[Key words] Condyloma acuminatum Cryotherapy Pettling

First-author's address： Department of Dermatology， Changzhou Wujin People's Hospital， Changzhou 213000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.11.014

尖銳濕疣屬于一種復(fù)發(fā)率高、傳染性強的由乳頭瘤病毒感染所導(dǎo)致的性傳播疾病，發(fā)于肛門生殖器皮膚、皮膚黏膜處，嚴重時可侵襲患者尿道、肛管、直腸，女性患者則會侵襲子宮頸、尿道，甚至?xí)T發(fā)癌變，嚴重威脅著患者的生命健康[1]。當下，臨床對于尖銳濕疣的治療，其方法各不相同，其中涵蓋：冷凍療法、激光治療、手術(shù)治療等多種方式，且不同方法效果不同[2]。派特靈為純中藥制劑，由大青葉、金銀花、苦參等多味中藥組成，可殺滅人類乳頭瘤病毒，抑制皰疹病毒[3]。在本研究中，分析冷凍聯(lián)合派特靈治療尖銳濕疣的效果及對患者皮損處堿性成纖維細胞生長因子（BFGF）、激活STAT蛋白抑制因子1（PIAS1）、翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3（Foxp3）水平的影響，為臨床上此病的治療提供新方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月—2019年6月于常州市武進人民醫(yī)院治療的100例尖銳濕疣患者。納入標準：符合文獻[4]《尖銳濕疣診療指南（2014）》中尖銳濕疣的診斷標準。疣體主要呈現(xiàn)為菜花狀、乳頭狀，經(jīng)過醋酸白試驗所得出的結(jié)果為陽性。排除標準：存在嚴重的免疫性、血液性疾病及其他傳染性疾??；對本研究所使用的藥物存在過敏情況；合并嚴重的心、肝、肺、腎功能障礙行疾??；存在嚴重的精神障礙；合并惡性腫瘤疾??；臨床病例資料不齊全。隨機數(shù)字表法將患者分為對照治療組及聯(lián)合治療組，各50例。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批，并經(jīng)過患者或家屬簽字同意。

1.2 方法

對照治療組采用冷凍治療，使用利多卡因氣霧劑（生產(chǎn)廠家：上海上藥信誼藥廠有限公司，批準文號：國藥準字H10920107，規(guī)格：8 g）做局麻處理后，使用棉簽蘸取液氮在患者患處輕輕按壓5～10 s，直至患者患處及患處周圍1 mm處皮膚冷凍變白，復(fù)溫后間隔2 min再次冷凍，冷凍1或2次，1～2周后復(fù)診，若患者疣體未脫落再次做冷凍治療。聯(lián)合治療組采用冷凍聯(lián)合派特靈治療，在患者行冷凍治療后疣體完全脫落后，使用派特靈[生產(chǎn)廠家：北京派特博恩生物技術(shù)開發(fā)有限公司，衛(wèi)生許可證：（京）衛(wèi)消字（2011）第0220號，規(guī)格：10 mL]在患者疣體部位局部濕敷10～15 min，每日2次，7 d為1個療程，連續(xù)治療4個療程后，配備派特靈50倍稀釋溶液，濕噴至疣體部位及疣體周圍皮膚，前4個療程每日1次，后8個療程每日2次。

1.3 觀察指標與評價標準

（1）γ干擾素（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）水平檢測。于清晨7點，治療前后在患者空腹狀態(tài)下抽取靜脈血，抽取量為4 mL，采用離心機來將所抽取的靜脈血進行離心處理，離心機參數(shù)設(shè)置為：3 700 r/min速度，離心半徑9 cm，時間5 min，進行血清分離，離心分離處理后將其置于-75 ℃低溫中進行保存。試驗開始前取出血清樣本，與相關(guān)指標的酶聯(lián)免疫試劑盒進行結(jié)合檢測。隨后，使用碳酸鹽緩沖液，將待測液稀釋，后倒入孔中，3 ℃下過夜處理，后棄去，洗凈，孔中加入4.12% BSA，37 ℃孵育25 min，后棄去，洗凈，稀釋抗血清，每孔加入0.28 mL，37 ℃下進行輕微搖晃11 min，后棄去，沖洗干凈，使用TMB進行顯色處理后，在370 nm波長下檢測OD值，查出IFN-γ、IL-2、IL-10水平。（2）T淋巴細胞亞群檢測。采用BD FACS-Calibur流式細胞儀（美國）對兩組治療前后T淋巴細胞亞群指標分化簇4+（CD4+）、分化簇8+（CD8+）水平進行檢測，并計算CD4+、CD8+比值。（3）血清BFGF、PIAS1、Foxp3水平檢測。采用RT-PCR法測定BFGF、PIAS1、Foxp3相對表達量，采用BFGF、PIAS1、Foxp3試劑盒（上海白益生物科技有限公司）通過相關(guān)試劑盒來對血液內(nèi)的RNA進行提取，進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，通過進行cDNA，來擴增產(chǎn)物PCR。檢測條件：預(yù)火85 ℃，變性3 s，隨后進行降溫，降至50 ℃，隨即退火9 s，進行42個循環(huán)。內(nèi)參GAPDH上游引物：5-GTCAAGTTAGACCTTGCCGA-3，下游引物：5-AAATGATGGCGAGAATCATC-3；BFGF上游引物：5-TATGAAGGAAGATGGACGGC-3，下游引物：5-CGTTTCAGTGCCACATACCA-3。PIAS1上游引物：5-CTGGGACCTAAACATGAACTGGAAC-3，下游引物：5-GTGGTGTCAAGGCAAATGCAA-3。Foxp3上游引物：5-ATCGCTGCTAGCTACTTAGCTA-3，下游引物：5-CTGATCGTGAACTGCCGTGGCTA-3。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt方法計算三者相對表達量。（4）性功能評價。治療前后的性功能通過男性性功能量表（male sexual function inventory，MSFI）和女性性功能量表（female sexual function inventory，F(xiàn)SFI），MSFI滿分為44分，F(xiàn)SFI滿分為95分，分數(shù)越高說明患者性功能越好，計算得分與量表滿分的百分比。（5）治療效果、復(fù)發(fā)情況評估。治療效果：參照文獻[4]《尖銳濕疣診療指南（2014）》標準評價兩組患者治療效果。痊愈：患者臨床所有癥狀全部消失，并且未發(fā)生任何皮損情況；顯效：患者自身疣體基本全部消失，皮損程度改善至70%以上；有效：患者自身疣體基本消失，皮損面積減少20%～70%；無效：患者臨床癥狀未得到任何好轉(zhuǎn)、改善。總有效率=痊愈率+顯效率?；颊呓?jīng)過本研究治療結(jié)束后，進行后續(xù)隨訪，隨訪至2020年3月，來對復(fù)發(fā)率情況進行統(tǒng)計。復(fù)發(fā)標準：在其原皮損部位發(fā)現(xiàn)新生疣體，經(jīng)過試驗檢測呈現(xiàn)為陽性。（6）并發(fā)癥發(fā)生情況統(tǒng)計。對兩組患者治療過程中所出現(xiàn)的水腫、糜爛疼痛、灼熱等并發(fā)癥發(fā)生情況進行統(tǒng)計，并做組間比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

使用軟件SPSS 20.0對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以率（%）表示，兩組間比較采用字2檢驗；計量資料以（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較

對照治療組男26例，女24例；年齡25～

45歲，平均（35.0±8.0）歲；病程1～8個月，平均（4.5±2.8）個月；疣體直徑3～11 mm，平均（7.0±3.2）mm。聯(lián)合治療組男25例，女25例；年齡25～43歲，平均（34.0±7.2）歲；病程1～9個月，平均（5.0±3.2）個月；疣體直徑3～10 mm，平均（6.5±2.8）mm。兩組基線資料對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組IFN-γ、IL-2、IL-10水平比較

治療前，兩組IFN-γ、IL-2、IL-10水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后，兩組IL-10水平均低于治療前，IFN-γ、IL-2水平均高于治療前，且聯(lián)合治療組IL-10水平低于對照治療組，IFN-γ、IL-2水平均高于對照治療組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3 兩組T淋巴細胞亞群指標水平比較

治療前，兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后，兩組CD4+、CD4+/CD8+均高于治療前，CD8+均低于治療前，且聯(lián)合治療組CD4+、CD4+/CD8+均高于對照治療組，CD8+低于對照治療組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4 兩組血清BFGF、PIAS1、Foxp3水平比較

治療前，兩組血清BFGF、PIAS1、Foxp3水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后，兩組血清BFGF、PIAS1、Foxp3水平均低于治療前，且聯(lián)合治療組血清BFGF、PIAS1、Foxp3水平均低于對照治療組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.5 兩組治療效果、復(fù)發(fā)率比較

聯(lián)合治療組治療總有效率高于對照治療組，復(fù)發(fā)率低于對照治療組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表4。

2.6 兩組性功能比較

治療前，兩組性功能比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；治療后兩組性功能均高于治療前，且聯(lián)合治療組性功能高于對照治療組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

2.7 兩組并發(fā)癥發(fā)生情況比較

聯(lián)合治療組總并發(fā)癥發(fā)生率略高于對照治療組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（字2=0.148，P=0.700），見表6。

3 討論

尖銳濕疣的發(fā)生是由于人乳頭瘤病毒在機體內(nèi)出現(xiàn)感染而造成的一種疾病，多數(shù)患者在乳頭瘤病毒感染早期無特異性癥狀，不易被察覺，但在感染中后期患者多表現(xiàn)為疼痛、瘙癢、惡臭、性交不適、異物感、出血等癥狀，嚴重影響著患者的日常生活[5]。

冷凍療法屬于臨床上治療尖銳濕疣的物理療法，是通過液氮的方式產(chǎn)生低溫，通過低溫的作用，使其細胞內(nèi)在形成冰晶，隨后出現(xiàn)脫水，轉(zhuǎn)變?yōu)橹鞍讖?fù)合物，在一定程度上對患者機體內(nèi)的局部血液障礙情況進行改善，造成其病變組織加速壞死程度，此種治療方式無需對患者做麻醉處理和開放創(chuàng)面，具有出血少、術(shù)后感染率、患者耐受性高等優(yōu)點[6-7]。但單純的物理治療效果并不完全理想，患者預(yù)后復(fù)發(fā)率較高，派特靈屬于純中藥制劑，可改變?nèi)巳轭^瘤病毒的生長環(huán)境，在一定程度上對人體內(nèi)的表皮細胞代謝速度進行提高，誘導(dǎo)脫落疣體及其周圍潛伏的病毒區(qū)皮膚，徹底清除寄生于表皮細胞中的人乳頭瘤病毒，進而發(fā)揮其促進新表皮細胞再生的作用[8-9]。另外有研究顯示，派特靈在促進新表皮細胞再生的同時還具有保護免疫細胞的作用，改善機體免疫功能，進而預(yù)防預(yù)后復(fù)發(fā)[10]。因純中藥制劑派特靈在使用后不留瘢痕、治愈率較高、復(fù)發(fā)率較低等優(yōu)點，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于尖銳濕疣的治療中，且已取得良好的成效[11]?；谏鲜鲅芯浚诒疚闹袑⒗鋬?、派特靈聯(lián)合應(yīng)用于尖銳濕疣患者的治療中，結(jié)果顯示，與單純應(yīng)用冷凍治療的患者相比，聯(lián)合應(yīng)用派特靈的患者治療效果較為理想，且預(yù)后復(fù)發(fā)率較低，且性功能優(yōu)于治療前，此結(jié)果提示，冷凍、派特靈聯(lián)合應(yīng)用可在最大程度上促進患者疾病恢復(fù)，提高生活質(zhì)量。

目前臨床上認為，尖銳濕疣的發(fā)生與細胞免疫功能低下相關(guān)，IL-2屬于一種較為重要的免疫調(diào)節(jié)因子，由輔助性T淋巴細胞產(chǎn)生，可激活單核巨噬細胞、增強NK細胞毒性的作用，可與多種細胞因子共同作用提高免疫功能，具有較強的抗病毒、提高機體免疫力的作用[12]。而IFN-γ其存在是由Th1細胞進行分泌而來，主要是對患者機體內(nèi)的單核細胞、淋巴細胞等細胞進行激活，以此來達到對免疫應(yīng)答進行調(diào)節(jié)的作用。在對細胞內(nèi)病毒感染的拮抗中起到了關(guān)鍵性重要作用[13]。IL-10屬于炎癥因子的一種，對周圍相關(guān)細胞的分化、生長情況產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，對機體內(nèi)的炎癥情況發(fā)生過程進行參與[14]。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+屬于T淋巴細胞內(nèi)相關(guān)指標，是對機體內(nèi)的免疫功能情況進行體現(xiàn)的關(guān)鍵性指標[15-16]。尖銳濕疣患者相比正常人T淋巴細胞水平更低，故免疫功能也較差，病毒感染率較高[17]。本研究結(jié)果顯示，與單純應(yīng)用冷凍治療的患者相比，聯(lián)合應(yīng)用派特靈的IL-10、CD8+均顯著降低，且IFN-γ、IL-2、CD4+均升高，此結(jié)果提示著，冷凍、派特靈聯(lián)合應(yīng)用可能經(jīng)改善IFN-γ、IL-2、IL-10、CD8+、CD4+異常表達，來提高患者機體免疫能力，進而抵抗病毒感染。

BFGF屬于一種可促進血管新生、細胞增殖的多功能細胞因子，引起對肝素具有較強的親和力，又被稱為肝素生長因子，具有修復(fù)損傷、促進神經(jīng)再生、促進胚胎發(fā)育等多種生物學(xué)功能[18]。在腫瘤細胞中，BFGF表現(xiàn)為異常的高表達，參與腫瘤血管新生、細胞增殖，在尖銳濕疣組織中表達水平較高，可能與尖銳濕疣發(fā)生后刺激角質(zhì)形成細胞，進而促進BFGF表達相關(guān)[19]。PIAS1屬于一種可抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄激活子1的特異性抑制蛋白，位于染色體15q23位點上，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在尖銳濕疣組織中表現(xiàn)為異常高表達，可促進疣體血管再生，加速疾病進展[20]。Foxp3在機體內(nèi)以特異性分子標記物的形態(tài)存在，在尖銳濕疣組織中表現(xiàn)為異常高表達[21]。本研究結(jié)果顯示，與單純應(yīng)用冷凍治療的患者相比，聯(lián)合應(yīng)用派特靈的患者血清BFGF、PIAS1、Foxp3水平均顯著降低，此結(jié)果提示，冷凍、派特靈聯(lián)合應(yīng)用可能經(jīng)改善血清BFGF、PIAS1、Foxp3異常表達，最終促進疣體脫落。

綜上所述，冷凍聯(lián)合派特靈可顯著改善尖銳濕疣患者機體免疫功能、炎癥反應(yīng)，抑制BFGF、PIAS1、FOXP3表達，改善臨床癥狀，效果顯著。

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（收稿日期：2023-08-16） （本文編輯：白雅茹）