鄧仙梅 甘柯林 唐鐵鑫 曹娟娟

【摘 要】

目的：優(yōu)選清炒番石榴葉的炮制工藝，為該飲片的生產(chǎn)提供實驗指導。方法：以外觀性狀、金絲桃苷含量、槲皮素含量為評價指標，采用單因素試驗考察投藥量、炒制溫度和炒制時間對清炒番石榴葉質量的影響，設計正交試驗優(yōu)選清炒番石榴葉的最佳炮制工藝。結果：影響樣品中的金絲桃苷及槲皮素含量的因素大小排序為炒制時間>炒制溫度>投藥量，其中炒制溫度和炒制時間對結果具有顯著性影響， 而投藥量的影響則不顯著。優(yōu)選出清炒番石榴葉的最佳炮制工藝為180℃清炒2min，投藥量為30g。結論：本實驗建立的清炒番石榴葉炮制工藝穩(wěn)定可行，可為生產(chǎn)清炒番石榴葉飲片提供實驗依據(jù)。

【關鍵詞】

炒番石榴葉；炮制工藝；正交試驗法；含量；性狀

【中圖分類號】R283.3?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2024）07-0041-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.07.zgmzmjyyzz202407010

Study on Processing Technology of Stir-fried Guava Leaves

DENG Xianmei GAN Kelin TANG Tiexin CAO Juanjuan

Zhaoqing Medical College， Zhaoqing 526020，China

Abstract：

Objective To optimize the processing technology of stir-fried guava leaves，and to provide the experimental guidance for the production of the decoction pieces. Methods Using appearance traits， hyperin content and quercetin content as evaluation indexes，and takig single factor test to investigate the effects of dosage， roasting temperature and roasting time on the quality of stir-frying guava leaves.Results The order of factors affecting the contents of hyperoside and quercetin in the sample was as follows： roasting time > roasting temperature > dosage， among which roasting temperature and roasting time had significant effects on the results， but the dosage had no significant effects. The optimum processing technology of stir-frying guava leaves was stir-frying 180℃ for 2min， and the dosage was 30 grams. Conclusion The processing technology of stir-fried guava leaves established in this experiment is stable and feasible， which can provide experimental basis for the production of decoction pieces of stir-fried guava leaves.

Keywords：

Stir-frying Guava Leaves; Processing Technology;Orthogonal Test;Content; Appearance Traits

番石榴葉為桃金娘科植物番石榴Psidium guajava Linn.的干燥葉。春、夏季采收，曬干或鮮用。其性平，味甘、澀，歸大腸、肝經(jīng)。具有澀腸止瀉、收斂止血的功效。臨床上入湯劑用于治療泄瀉，下痢不止；外用治療皮膚濕疹瘙癢，跌打損傷，創(chuàng)傷出血［1］。番石榴葉是廣東地區(qū)常用中草藥，國醫(yī)大師鄧鐵濤教授就非常善于用單味番石榴葉治療泄瀉。此外，它還具有很好的降血糖保健作用，素有天然的“胰島素”之美稱，是眾多糖尿病患者選擇的保健茶療方。很早以來民間就流傳著一句話“血糖高不用愁，炒番石榴葉來解憂”。市面上也一直有炒番石榴葉茶包賣。李丹等［2］研究發(fā)現(xiàn)：炒番石榴葉安全劑量大;炒番石榴葉能降低 STZ 糖尿病大鼠血糖水平，作用機制可能與增強肝臟GK、GLUT2、IGF-1、IRS-1基因表達有關。

據(jù)現(xiàn)有文獻資料報道，有關番石榴葉的現(xiàn)代研究主要集中在其化學成分［3-12］、藥理作用［10-18］及臨床應用方面［19-21］，其中有幾篇是關于其炮制品藥理作用研究的文獻。但尚不見有關于番石榴葉的炮制工藝研究報道，故本實驗擬對番石榴葉的清炒炮制工藝進行研究，為炒番石榴葉的現(xiàn)代生產(chǎn)工藝提供實驗依據(jù)，保證炒番石榴葉的飲片質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；BP124S型、BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）；KQ250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 金絲桃苷（批號：C13469877，Macklin，CAS：482-36-0，質量分數(shù)≥98.8%HPLC）；槲皮素（批號：C12374611，Macklin，CAS：117-39-5，質量分數(shù)≥98.8%HPLC）。水為純化水（超純水機，廣州盟歐儀器有限公司）；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。實驗用番石榴葉藥材于2021年9月采自廣東茂名高州，經(jīng)廣東藥科大學中藥學院劉基柱副教授鑒定為桃金娘科植物番石榴Psidium guajava L.的干燥葉子。

2 方法與結果

2.1 HPLC法測定金絲桃苷、槲皮素的含量

2.1.1 對照品溶液的制備 分別取金絲桃苷、槲皮素對照品7.75 mg、5.75 mg，精密稱定，分別置于5 mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，配成濃度分別為1.55 mg/mL， 1.15 mg/mL的對照品母液，于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩７謩e精密吸取金絲桃苷、槲皮素對照品母液100 μL、150 μL置于5 mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，配制成濃度分別為31 μg/mL，34.5 μg/mL的混合對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末1.2 g，精密稱定，加入25 mL 60%乙醇溶液，稱定重量，液超聲提取30min。取出放冷至室溫，加入60%乙醇溶液補足減失的重量。用 0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.1.3 色譜條件及專屬性試驗 色譜柱： Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）; 流動相： 乙腈（A） -0.2% 磷酸水溶液（B）; 梯度洗脫（0～15min，11%～13.5% A; 15～30min，13.5%～18% A; 30～40min，18% A; 40～65min，18%～49% A; 65～70min，49%～11% A）; 檢測波長： 360 nm; 進樣量： 10 μL; 流速： 1.0 mL/min; 柱溫：35℃［7］。

按照以上方法條件進行專屬性試驗，結果如圖1。在該方法下測定清炒番石榴葉樣品的金絲桃苷、槲皮素含量，專屬性強，穩(wěn)定可行。

2.1.4 線性關系考察 分別吸取“2.1.1”項下的混合對照品溶液2 μL、3 μL、5 μL、10 μL、15 μL、30 μL、45 μL，按“2.1.3”項下的色譜條件進行測定。以各成分的進樣量X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標進行線性回歸分析，得回歸方程為：金絲桃苷 Y=1541.1X+68.198 （R2=0.9860），槲皮素Y=2395.9X+9.0884 （R2=0.9999）。

2.1.5 精密度試驗 吸取“2.1.1”項下的混合對照品溶液10 μL，按“2.1.3”項下的色譜條件進行測定，連續(xù)平行測定6次，記錄各對照品的峰面積。結果金絲桃苷、槲皮素的峰面積RSD值分別為0.32%、0.45%。該結果表明儀器精密性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取“2.1.2”項下的樣品試液10 μL，分別于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、18 h 進樣測定，記錄峰面積。結果金絲桃苷、槲皮素的峰面積RSD值分別為1.21%、1.34%。表明該樣品溶液在18 h內穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復性試驗 按照“2.1.2”項下的供試品溶液制備方法平行制備6份供樣品溶液，按“2.1.3”項下的色譜條件進行進樣測定，記錄峰面積。結果金絲桃苷、槲皮素的峰面積RSD值分別為0.65%、0.84%。表明該方法重復性良好。

2.1.8 加樣回收試驗 取已知含量的樣品粉末0.6 g，精密稱定，然后按1∶1的比例加入金絲桃苷、槲皮素對照品，再按照“2.1.2”項下的提取方法制備加樣供試品溶液，平行制備6份。然后吸取各份加樣樣品溶液10 μL進樣分析，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結果金絲桃苷、槲皮素的加樣回收率為98.2%、100.1%，RSD值分別為1.15%、2.01%。表明該方法準確性良好。

2.2 單因素試驗

2.2.1 炒制溫度 稱取30 g 番石榴葉生飲片，平行稱取5份，分別在80℃、120℃、150℃、180℃、200℃清炒2min，測定其金絲桃苷、槲皮素的含量。結果見表1。即選定炒制溫度的范圍是120～180℃。

2.2.2 炒制時間 稱取30 g 番石榴葉生飲片，平行稱取4份，在180℃下分別炒0.7min、2min、3min、4min，測定其金絲桃苷、槲皮素的含量。 結果見表2。即選定炒制時間的范圍是0.7～2min。

2.2.3 投藥量 稱取30 g 、50 g、80 g、100 g番石榴葉生飲片，分別在180℃下炒2min，測定其金絲桃苷、槲皮素的含量。結果見表3。即選定投藥量的范圍是30～80 g。

2.3 正交試驗 根據(jù)預試驗和單因素試驗結果可知，炒制溫度A、炒制時間B以及投藥量C對清炒番石榴葉飲片質量都有一定影響，故本試驗以金絲桃苷、槲皮素含量的加權評分OD值為主要評價指標（OD=金絲桃苷含量/金絲桃苷最大值×0.5×100+槲皮素含量/槲皮素最大值×0.5×100），成品的外觀性狀作為參考評價指標，選取L9（34）正交表對炒制溫度、炒制時間以及投藥量這3個因素進行考察。結果見表4、表5、表6。

根據(jù)表4結果可知，各因素影響大小次序為炒制時間（B）>炒制溫度（A）>投藥量（C），其最佳工藝為A3B2C3。表4方差分析結果表明炒制溫度（A）和炒制時間（B）對OD值有顯著性影響，但投藥量（C）對OD值無顯著性影響。結合清炒番石榴葉外觀性狀特點綜合分析確定清炒番石榴葉的最佳炮制工藝為A3B2C1，即180℃清炒2min，投藥量為30 g。

2.4 最佳工藝驗證 取同批番石榴葉按照“2.3”項下所確定的最佳炮制工藝進行制備清炒番石榴葉，平行做3份，測定其金絲桃苷、槲皮素含量。結果見表7。驗證試驗結果表明本次試驗優(yōu)選的清炒炮制工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

現(xiàn)代研究［22］表明，金絲桃苷在多種疾病中具有多種生物活性，具有抗氧化應激和細胞凋亡、抗急性肝損傷、抗腫瘤、抗炎、抗癌、抗抑郁、抗高血糖等作用。槲皮素具有止瀉、抗氧化、抗病毒、抗炎作用，在細胞和動物實驗中可以用來治療肝、心、脾、肺、腎、骨科疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等［23-24］。由此可見，金絲桃苷、槲皮素均為番石榴葉中的重要活性成分，故本試驗選擇這2種成分含量的加權評分作為工藝評價指標，可以很好地標示其飲片質量。

從“2.2”項下的單因素試驗結果可知，在番石榴葉中金絲桃苷含量隨著炒制的溫度升高而降低，而槲皮素含量則是隨著炒制的溫度升高而升高。在一定溫度下，番石榴葉中金絲桃苷含量隨著炒制時間的延長而降低，而槲皮素含量則是隨著炒制時間的延長而升高。槲皮素作為其重要的止瀉成分但在生品中的含量很低，清炒后可大大提高槲皮素含量，提高有效成分煎出率。此外，番石榴葉清炒過后可緩解其苦澀之味，改善口感。故建議用番石榴葉治療腹瀉時選擇炒番石榴葉。本試驗所確定的清炒番石榴葉的炮制工藝可為炒番石榴葉的生產(chǎn)提供實驗指導，具有一定的實際意義。

參考文獻

［1］廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標準：第一冊［M］.廣州：廣東科學技術出版社，2004： 190-191．

［2］李丹，楊森，馮靖雯，等.炒番石榴葉急性毒性及降血糖作用機制研究［J］.中藥藥理與臨床，2020，36（4）：140-143.

［3］朱寅荻，劉洋洋，李春娜，等.HPLC測定番石榴葉乙酸乙酯提取物中5種黃酮苷的含量［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（8）：2469-2472.

［4］傅予，張巖，陶遵威.HPLC同時測定不同產(chǎn)地番石榴葉藥材中4種黃酮類成分含量［J］.中國現(xiàn)代應用藥學，2017，34（11）：1585-1588.

［5］李開斌，陳維，楊文，等.ICP-MS法測定中藥材番石榴葉中15種微量元素［J］.貴州科學，2019，37（6）：44-47.

［6］鄭曉紅，孟大利，李銑.番石榴葉的化學成分［J］.沈陽藥科大學學報，2014，31（7）：518-520，525.

［7］方皓，熊素琴，燕娜娜，等.一測多評法測定番石榴葉中6種黃酮類成分的含量［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2019，31（9）：1559-1566.

［8］符春麗，彭燕，陳紫云，等.番石榴葉化學成分的研究［J］.中藥材，2016，39（12）： 2781-2784.

［9］李丹，馮靖雯，陳鴻平，等.基于指紋圖譜和化學計量法評價不同產(chǎn)地番石榴葉的質量［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2021，33（6）：899-912.

［10］占穎. 番石榴葉化學成分及藥理作用研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學，2014.

［11］任善亮，吳茂，徐露林，等.番石榴葉化學成分分離鑒定及psiguadial D的抗癌活性研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2019，31（6）：1001-1005.

［12］趙玉靜，李建寬，張鑫，等.番石榴葉黃酮類化學成分及其抗氧化活性研究［J］.中國中藥雜志，2018，43（4）：760-765.

［13］汪梅花，魏文浩，吳振強.番石榴葉的生物活性研究進展［J］.中藥材，2015，38（10）：2215-2219.

［14］劉美鳳，谷靈靈，蔣利榮，等.番石榴葉抗糖尿病研究進展［J］.中國新藥雜志，2013，22（2）：183-189，205.

［15］葉端爐，吳敏姿.番石榴葉治療腸炎的臨床療效分析［J］.海峽藥學，2013，25（4）：197-198.

［16］陳延，歐陽博文.番石榴葉治療濕熱型急性腹瀉的臨床研究［J］.新中醫(yī)，2009，41（3）：45-46.

［17］張文舉，陳寶田，王彩云，等.槲皮素止瀉機制研究［J］.第一軍醫(yī)大學學報， 2003 （10）：1029-1031.

［18］余淑華，何春琳，張培，等.番石榴葉總黃酮對高血壓模型大鼠心肌肥厚的改善作用［J］.中國藥房，2022，33（2）：191-195，202.

［19］廖小英.番石榴葉炒糠應用于圈養(yǎng)草食動物腹瀉?。跩］.中獸醫(yī)學雜志，2011（6）：27-28.

［20］趙承春，陳忠文.番石榴葉與米炒黃煎劑治療輪狀病毒腸炎68例［J］.華人消化雜志，1998（S2）：377.

［21］文佑姣.番石榴葉湯治療輪狀病毒小兒腹瀉96例［J］.中國中西醫(yī)結合消化雜志，2009，17（4）：272-273.

［22］曹明明，車琳琳，朱路文.金絲桃苷藥理作用及機制研究進展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2022，24（6）：150-155.

［23］張文舉，陳寶田，王彩云，等.槲皮素止瀉機制研究［J］.第一軍醫(yī)大學學報，2003 （10）：1029-1031.

［24］馬納，李亞靜，范吉平.槲皮素藥理作用研究進展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2018， 20（8）：221-224.

（收稿日期：2023-07-28 編輯：劉 斌）