關(guān)鍵詞：王族海棠：Alfin-like家族基因；生物信息學(xué)分析；功能鑒定；鹽脅迫；基因表達(dá)

中圖分類號(hào)：S685.99：Q781 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2024）06-0016-09

隨著全球氣候變化，極端天氣頻發(fā)，植物的生長發(fā)育易遭受各種不利環(huán)境因素如土壤鹽漬化、干旱和極端溫度等引起的非生物脅迫。土壤鹽堿化是影響植物生長和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的主要非生物脅迫因素，而由于耕作管理不合理，這一問題正在不斷惡化。為了在逆境中生存，植物逐漸進(jìn)化出復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制以降低非生物脅迫帶來的損傷，其中誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)是其緩解非生物脅迫的重要生理策略之一。近十年來，隨著高通量測(cè)序、基因組學(xué)等相關(guān)生物技術(shù)的發(fā)展，已在植物中發(fā)現(xiàn)許多受鹽脅迫誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子家族，如DREB、ERF、WRKY、MYB、bZIP及Alfin-like（AL）等。其中AL家族為植物同源域（PHD）鋅指蛋白的重要成員，參與種子萌發(fā)、生殖生長、果實(shí)成熟及維持植物細(xì)胞水分穩(wěn)態(tài)等多種生物過程。

一般而言，植物體中的AL蛋白主要存在3個(gè)特征結(jié)構(gòu)域：由130個(gè)氨基酸殘基組成的N端保守結(jié)構(gòu)域（Alfin結(jié)構(gòu)域），由50個(gè)氨基酸殘基組成的C端保守PHD鋅指結(jié)構(gòu)域（含有Cys4-His-Cys3鋅結(jié)合基序），以及這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間稱為V結(jié)構(gòu)域的可變剪區(qū)。PHD鋅指蛋白是典型的環(huán)指蛋白，因此具有E3連接酶活性；此外，有證據(jù)表明PHD鋅指結(jié)構(gòu)域參與介導(dǎo)染色質(zhì)的形成與功能調(diào)節(jié)。如：AtAL5通過介導(dǎo)染色質(zhì)動(dòng)力學(xué)參與擬南芥幼苗在暗反應(yīng)過程中對(duì)茉莉酸（JA）的響應(yīng)。在大豆中，Alfin蛋白GmPHD6可以與除GmPHD2之外的其他GmPHDs形成同源二聚體或異源二聚體，共同發(fā)揮作用。在擬南芥中，Alfin-like蛋白是典型的核蛋白，除AtAL6外的所有AL成員均可與富含G堿基（GTGGNG或GNGGTG）的元素結(jié)合，形成強(qiáng)復(fù)合物，抑制多種負(fù)調(diào)控因子，從而影響擬南芥非生物脅迫耐受性；進(jìn)一步的氨基酸序列分析表明，AtAL6的DNA無法與富含G的元素形成復(fù)合物是由第34、35位兩個(gè)C殘基發(fā)生變異引起的。

AL家族是植物耐鹽性調(diào)控的主要轉(zhuǎn)錄因子家族之一。在紫花苜蓿（Medicago sativa L.）中，Alfin-likel不僅可以促進(jìn)根系生長，還可以在鹽堿條件下通過序列特異性方式結(jié)合DNA來上調(diào)根系中鹽誘導(dǎo)型MsAL2基因的表達(dá)。在線果芥（Conringia planisiliqua）中，CpAL2在提高其耐鹽耐旱性中發(fā)揮著重要作用。

王族海棠（Malus doumeri‘Royalty’）為薔薇科蘋果屬（Malus）落葉喬木，樹姿優(yōu)美，樹形高貴典雅，果實(shí)富含類黃酮、多酚及氨基酸等生物活性物質(zhì)，是集觀葉、觀花及用果于一體的景觀經(jīng)濟(jì)樹種。包括王族海棠在內(nèi)的絕大多數(shù)海棠品種雖耐旱、耐寒、耐瘠薄，但耐鹽性較弱，對(duì)土壤中鹽含量敏感性強(qiáng)。本研究對(duì)王族海棠AL家族基因進(jìn)行了全基因組鑒定，并系統(tǒng)分析其進(jìn)化關(guān)系、結(jié)構(gòu)特征和啟動(dòng)子區(qū)順式作用元件，檢測(cè)其在不同器官中的轉(zhuǎn)錄譜，分析其在鹽脅迫下的表達(dá)情況，以期為未來王族海棠的基因工程改良提供理論支持。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料及處理方法

供試王族海棠（Malus doumeri‘Royalty’）種子及植株均由江蘇長景園林有限公司提供。試驗(yàn)于2022年2—10月開展。分別于王族海棠種子、幼苗、根、莖、葉、花、100daa果實(shí)（花后100天的果實(shí)）、成熟期果實(shí)共8個(gè)階段取樣，采用TAE緩沖液沖洗后液氮速凍，-80℃保存，用于分析基因表達(dá)的組織特異性。

鹽脅迫試驗(yàn)在常州大學(xué)園藝培養(yǎng)室中進(jìn)行：將王族海堂種子播于海棠專用育苗基質(zhì)中，于培養(yǎng)第60天用200 mL 150 mmol/L NaCl溶液進(jìn)行鹽脅迫（SS）處理，對(duì)照（CK）則澆灌相應(yīng)體積的蒸餾水，并分別在處理0、3、6、12、24 h取樣，采用TAE緩沖液小心沖洗后于-80℃保存，用于qRT-PCR分析。

1.2王族海棠AL家族基因的全基因組分析

1.2.1王族海棠AL家族基因成員的鑒定及蛋白理化性質(zhì)分析為了鑒定王族海棠中潛在的AL蛋白序列，在Phytozome數(shù)據(jù)庫（https：//phyto-zome.jgi.doe.gov/pz/portal.html）中下載所有的王族海棠ALs，然后基于擬南芥（Arabidopsis thali-ana）和水稻（Oryza sativa L.）的AL蛋白序列進(jìn)行BLAST搜索（E值-5），擬南芥和水稻的AL蛋白序列通過搜索NCBI數(shù)據(jù)庫下載。使用簡單模塊化架構(gòu)研究工具數(shù)據(jù)庫（http：//smart.embl-hei-delberg.de/）檢查候選序列，以鑒定包含Alfn結(jié)構(gòu)域（DUF3594）和PHD鋅指基序的保守AL蛋白序列，從而獲得非冗余的AL家族基因，并命名為MdALs。

采用ExPASy工具（https：//web.expasy.org/protparam/）分析推定的MdALs蛋白序列長度、分子量及等電點(diǎn)（pI）；采用NCBI的開放閱讀框（ORF）工具（http：//www. ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html）確定ORF的長度。

1.2.2王族海棠AL家族成員的系統(tǒng)發(fā)育分析為了比較來自不同物種的AL基因的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，使用序列對(duì)比分析軟件ClustalX對(duì)擬南芥、水稻、玉米、紫花苜蓿和王族海棠的AL基因進(jìn)行多序列比對(duì)。紫花苜蓿和玉米的Alfin1蛋白序列分別從NC-BI數(shù)據(jù)庫中獲取。利用MEGA 7.0軟件采用鄰接法（NJ）構(gòu)建AL蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹，并用1000次重復(fù)測(cè)定bootstrap檢驗(yàn)發(fā)育樹的可靠性。

1.2.3 MdALs基因結(jié)構(gòu)、上游序列分析、染色體定位及蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析采用基因結(jié)構(gòu)顯示服務(wù)器GSDS（http：//gsds.gao-lab.org/）獲得王族海棠AL家族成員的內(nèi)含子-外顯子特征。從海棠基因組數(shù)據(jù)庫（https：//iris.angers.inra.fr/gd-dh13/）下載起始密碼子（ATG）前端1500 bp上游基因組DNA序列，采用PlantCARE數(shù)據(jù)庫（ht-tp：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plant-care/html/）分析MdALs啟動(dòng)子序列中的順式元件。采用Mapinspect軟件（http：//www. plant-breeding.wur.nl/uk/software_mapinspect.html）繪制MdALs的染色體遺傳圖譜?；赟TRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org/cgi/network）測(cè)定MdALs的氨基酸序列以預(yù)測(cè)可行的相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)。

1.2.4 MdALs的基因復(fù)制事件、異義替換／同義替換比值（Ka/Ks）的計(jì)算通過NCBI的BLAST窗口（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）進(jìn)行序列比對(duì)以識(shí)別重復(fù)基因，其中候選基因的相似性和覆蓋率需gt;80%。在遺傳學(xué)中，異義替換與同義替換的比值（Ka/Ks）可用于闡明選擇壓力是否有助于解釋宏觀進(jìn)化模式，用EMBL-EBI中的ClustalW2平臺(tái)（http：//www.ebi.ac.uk/Tools/msa／clustalw2/）預(yù)測(cè)旁系同源物，接著基于PAL2NAL（http：//www.bork.embl.de/pa12nal/）計(jì)算Ka/Ks值，以檢測(cè)選擇模式并用于計(jì)算復(fù)制事件的大致時(shí)間；Ka/Ks值gt;1、lt;1、=1分別表示正選擇、純化選擇和中性選擇，基因?qū)Φ倪M(jìn)化時(shí)間計(jì)算方法參照Li等的方法。

1.3王族海棠RNA提取、轉(zhuǎn)錄分析及qRT-PCR分析

1.3.1 RNA提取 將王族海棠樣品（250 mg）用液氮快速研磨，按照Trizol總RNA提取試劑盒相關(guān)說明提取總RNA，采用NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度，采用1.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量。

1.3.2MdALs基因轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的獲取與表達(dá)分析利用MdALs的氨基酸序列在植物基因組數(shù)據(jù)庫（https：//ftp.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/pz.portal.html#）下載獲得其轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，將下載文件的格式轉(zhuǎn)換為fastq格式，再通過Trim Galore軟件（http：//www. bioinformatics.babraham.ac.uk/pro- jects/trim_galore/）進(jìn)行質(zhì)控。獲得的clean reads序列用RNA-seq數(shù)據(jù)量化軟件kallisto進(jìn)行定量，通過TBtools（https：//github.com/CJ-Chen/TBtools）進(jìn)行Heatmap可視化。

1.3.3MdALs的qRT-PCR分析 基于轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果選取王族海棠高表達(dá)Md ALs的組織樣品提取RNA，采用PrimeScrip^TM RT Reagent Kit withgDNA Eraser逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cD-NA，并采用無菌水將cDNA稀釋100倍作為后續(xù)實(shí)時(shí)熒光定量分析（qRT-PCR）的模板。采用Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物（表1），以Actin作為內(nèi)參基因。qRT-PCR的擴(kuò)增體系、擴(kuò)增程序參照文獻(xiàn)，使用Light Cycler 96 Instrument熒光定量PCR儀進(jìn)行PCR分析，采用斷層掃描法（2^-ΔΔCt）計(jì)算目標(biāo)基因的表達(dá)量。

1.4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用Microsoft Excel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用相應(yīng)在線繪圖工具、R軟件及Origin 10軟件進(jìn)行相關(guān)圖形的繪制。

2結(jié)果與分析

2.1 王族海棠AL家族基因的鑒定及特征分析

基于王族海棠的保守Alfin結(jié)構(gòu)域和PHD鋅指基序進(jìn)行BLAST搜索，共鑒定出11個(gè)MdALs基因，ORF長度在711～1680 bp之間，根據(jù)在1-17號(hào)染色體上的位置分別將其命名為MdAL1—MdAL11（表2）。MdALs蛋白序列長度為231～559個(gè)氨基酸（aa），pl從5.11（MdAL8）到6.96（MdAL9）；MdAL1分子量最低，為26.76 kDa，MdAL9分子量最高，為63.65 kDa。

2.2 MdALs的系統(tǒng)發(fā)育分析

為了分析來自不同物種的AL家族基因的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，利用鄰接法基于王族海棠（11個(gè)）、玉米（18個(gè)）、水稻（9個(gè)）、擬南芥（7個(gè)）的AL蛋白及紫花苜蓿Alfn1全長序列構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹（圖1）?？芍?，46個(gè)Alfn蛋白可分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三組，分別有16、14個(gè)和16個(gè)成員。其中，MdALs僅分布在Ⅰ組和Ⅱ組中，分別包括5個(gè)和6個(gè)MdALs成員；Ⅰ組中的5個(gè)成員與AtAL1和AtAL2關(guān)系較近，Ⅱ組中的MdAL5和MdAL11與AtAL6、AtAL7和紫花苜蓿的Alfin1關(guān)系較近，而其余4個(gè)成員與AtAL4關(guān)系較近。ZmALs和Os-ALs主要分布在Ⅲ組中，分別有11個(gè)和5個(gè)成員，僅各有1個(gè)成員分布在Ⅱ組，另分別有6個(gè)和3個(gè)成員分布在Ⅰ組；擬南芥的AtAL3、AtAIA、AtAL5、AtAL6和AtAL7均存在于組Ⅱ中，AtAL1和AtAL2則存在于組Ⅰ中。

2.3MdALs基因的結(jié)構(gòu)和序列比對(duì)分析

由圖2A可知，MdALs含有4～10個(gè)內(nèi)含子，其中，MdAL1、MdAL2、NdAL3、MdAL4昶MdAL6均有4個(gè)內(nèi)含子，Md AL5和MdAL10均有6個(gè)內(nèi)含子，MdAL8和MdAL11有5個(gè)內(nèi)含子，MdAL7有8個(gè)內(nèi)含子，而MdAL9有10個(gè)內(nèi)含子，是內(nèi)含子數(shù)量最多的成員。多序列比對(duì)結(jié)果（圖2B）表明，MdALs的N端和C端分別存在高度保守的Alfin結(jié)構(gòu)域和PHD鋅指基序。

2.4MdALs啟動(dòng)子區(qū)的順式作用元件分析

對(duì)起始密碼子（ATG）前端的MdALs家族上游啟動(dòng)子區(qū)域分析的結(jié)果（圖3）表明，共預(yù)測(cè)到23類順式作用元件，富含MBS、LTR、TC的重復(fù)序列和ARE元件，分別與干旱誘導(dǎo)、低溫響應(yīng)、防御和脅迫響應(yīng)以及厭氧誘導(dǎo)相關(guān)；同時(shí)包含分生組織表達(dá)元件（CAT-box），表明MdALs基因積極響應(yīng)脅迫環(huán)境；此外，還包含與調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育相關(guān)的激素順式作用元件，例如參與茉莉酸甲酯（Me-JA）響應(yīng)的CGTCA基序，與赤霉素響應(yīng)相關(guān)的P-box以及水楊酸響應(yīng)所需的TCA元件。

2.5MdALs的染色體定位、同線性分析和基因復(fù)制事件分析

2.5.1Md ALs的染色體定位、同線性分析 通過MapChart工具進(jìn)行染色體連鎖定位分析，結(jié)果（圖4A）表明，11個(gè)MdALs基因定位在1、4、8、10、13、15號(hào)染色體上，其中，1、4、15號(hào)染色體均包含2個(gè)成員，8、10、13分別包含1、1、3個(gè)成員；從染色體中的基因復(fù)制事件來看，除同一連鎖位置的串聯(lián)重復(fù)基因（MdAL1/MdAL2、MdAL3/MdAL4、MdAL7/MdAL8/MdAL9）外，不同染色體中還有4個(gè)片段重復(fù)基因（MdAL1/MdAL3、MdAL2/MdAL3、MdAL4/MdAL9、MdAL6/MdAL7）。

通過比較分析王族海棠、水稻、玉米和擬南芥AL家族基因的結(jié)構(gòu)構(gòu)建同線性圖以剖析不同物種AL基因間的關(guān)系，由結(jié)果（圖4B）可知，共鑒定出41對(duì)同源基因，其中，王族海棠與擬南芥的同源基因共14對(duì)，王族海棠與水稻的同源基因共10對(duì)，王族海棠與玉米的同源基因共17對(duì)。此外，檢測(cè)到與MdAL1基因相關(guān)的同源基因呈現(xiàn)一對(duì)多（12個(gè)）的共線性，表明MdAL1與擬南芥、水稻和玉米AL家族基因的相關(guān)性高于其他家族成員。

2.5.2MdALs的基因復(fù)制事件分析 重復(fù)的MdALs基因的進(jìn)化時(shí)間采用異義替換（Ks）作為時(shí)間代表加以估計(jì)，由表3可知，5對(duì)旁系同源基因的復(fù)制時(shí)間大約發(fā)生在過去11萬～1152萬年。5個(gè)基因?qū)Φ腒a/Ks值均lt;1，表明MdALs基因?qū)κ窃趶?qiáng)烈的負(fù)選擇或純化選擇壓力下進(jìn)化的，其中純化選擇對(duì)于MdALs基因的功能差異至關(guān)重要。

2.6 MdALs基因在王族海棠不同組織中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜

通過搜索相應(yīng)的微陣列數(shù)據(jù)檢測(cè)了王族海棠8個(gè)主要器官或組織（種子、幼苗、根、莖、葉、花、100daa果實(shí)、成熟果實(shí)）中11個(gè)MdALs成員的表達(dá)水平，結(jié)果（圖5）表明，除MdAL5、MdAL10、MdAL11外，其他MdALs成員在種子、幼苗、根及莖中的表達(dá)水平均較低；除MdAL10、MdAL11外，其他MdALs成員在成熟果實(shí)中的表達(dá)水平皆高于其他組織，尤其MdAL2、MdAL3、MdAL4、MdAL7、MdAL8、MdAL9。

2.7MdALs表達(dá)響應(yīng)鹽脅迫的qRT-PCR分析

如圖6所示，無論有無鹽脅迫，處理0h的MdALs基因表達(dá)水平均較低；CK處理下，MdAL2、MdAL3、MdAL6及MdAL7表達(dá)水平隨著處理時(shí)間的延長，呈升-降-升的變化趨勢(shì)，其中MdAL6的表達(dá)在處理6h達(dá)到最高水平，是Oh的22倍。MdAL5、MdAL9及MdAL11表達(dá)水平隨著處理時(shí)間的延長，呈降-升-降的變化趨勢(shì)。

鹽脅迫處理（SS）下，MdAL3和MdAL6的表達(dá)水平分別在處理6h和12h較高：MdAL4的表達(dá)水平隨著NaCl處理時(shí)間的延長呈增加趨勢(shì)，在12、24 h處于最高水平，是0h表達(dá)量的近10倍；MdAL11在鹽處理3h時(shí)達(dá)到最高，之后表達(dá)量逐漸下降；MdAL8、MdAL1、MdAL10、MdAL9、MdAL2和MdAL7的表達(dá)水平在各時(shí)間段的波動(dòng)均較小。這些結(jié)果表明主要是MdAL3、MdAL4、MdAL6參與了對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)，尤其MdAL4。

3討論與結(jié)論

AL轉(zhuǎn)錄因子是雙結(jié)構(gòu)域蛋白，在N端具有Alfin結(jié)構(gòu)域，在C端具有PHD鋅指結(jié)構(gòu)域，參與植物對(duì)脅迫的響應(yīng)和／或耐受性。本研究基于擬南芥和水稻的AL蛋白序列，對(duì)王族海棠的保守Alfn結(jié)構(gòu)域和PHD鋅指基序進(jìn)行BLAST搜索，共鑒定出11個(gè)MdALs基因，其編碼蛋白皆為酸性蛋白，序列長度為231～559aa，分子量為26.76～63.65 kDa。開放閱讀框（ORF）是基因序列的一部分，在DNA序列中具有編碼蛋白質(zhì)潛能，是指從起始密碼子開始至終止密碼子結(jié)束的連續(xù)堿基序列；一般而言，ORF越長往往越容易發(fā)生解離。本研究中，MdALs基因的ORF長度在711～1680bp范圍變化，有些成員間的ORF長度差距較大，這意味著其響應(yīng)環(huán)境變化的敏感度存在較大差異。

本研究基于鄰接法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系表明，王族海棠、玉米、水稻、擬南芥的45個(gè)AL蛋白及紫花苜蓿的Alfinl蛋白可分為三組，MdALs蛋白集中于Ⅰ組和Ⅱ組中，Ⅲ組中沒有MdALs蛋白，這可能是王族海棠在進(jìn)化過程中AL蛋白的堿基發(fā)生突變的緣故。此外，外顯子一內(nèi)含子結(jié)構(gòu)分析表明，MdALs的內(nèi)含子數(shù)皆不超過10個(gè)，大多數(shù)為4～6個(gè)內(nèi)含子，這與線果芥CpALs基因的結(jié)構(gòu)特征趨于一致。內(nèi)含子特征與基因進(jìn)化有關(guān)，更多和更長的內(nèi)含子往往存在于高表達(dá)的基因中，而內(nèi)含子數(shù)量差異較小表明家族成員間的功能穩(wěn)定性較佳。啟動(dòng)子順式作用元件分析結(jié)果表明，MdALs基因啟動(dòng)子區(qū)富含MBS、LTR、TC的重復(fù)序列和ARE元件，這與在葡萄（Vitis vinifera L.）中的研究結(jié)果基本一致，但VvAL家族沒有響應(yīng)MejA的TGACG基序，這可能是不同植物的N端結(jié)構(gòu)域存在差異的緣故。

進(jìn)化是植物適應(yīng)環(huán)境變化的必然選擇，植物單體基因的共同進(jìn)化往往發(fā)生在具有兩個(gè)以上結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)家族成員中。本研究結(jié)果表明，MdALs在PHD鋅指結(jié)構(gòu)域和Alfin結(jié)構(gòu)域的分布位置表現(xiàn)出高度保守的氨基酸序列，這意味著兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的進(jìn)化過程具有相似性。基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)移和丟失是促進(jìn)基因家族成員功能進(jìn)化的主要驅(qū)動(dòng)力。在胡椒和馬鈴薯中，PHD鋅指基因通過基因復(fù)制，包括轉(zhuǎn)座子復(fù)制、片段復(fù)制和串聯(lián)復(fù)制以誘導(dǎo)進(jìn)化。本研究結(jié)果表明，重復(fù)事件基因?qū)Γ∕dAL1/MdAL3、MdAL2/MdAL3、MdAL4/MdAL9、MdAL6/MdAL7）對(duì)王族海棠的進(jìn)化起著至關(guān)重要的作用，其復(fù)制時(shí)間大約發(fā)生在11萬～1152萬年。這與琴葉擬南芥（Arabidopsis lyrata）、擬南芥（Arabidopsis thaliana）和鹽芥（Thellungiella halophila）中AL蛋白家族的重復(fù)事件相似。

AL轉(zhuǎn)錄因子蛋白的特異性結(jié)合狀態(tài)及功能形式是決定其調(diào)節(jié)能力的基本表征。本研究結(jié)果表明，MdALs成員主要在王族海棠發(fā)育后期的果實(shí)中表達(dá)，尤其表現(xiàn)在MdAL2、MdAL3、MdAL4、MdAL7、MdAL8及MdAL9。前人研究表明，紫花苜蓿Alfin1主要在根中高表達(dá)，而在其他營養(yǎng)器官中低表達(dá)或不表達(dá)；大豆GmPHDs在子葉、莖中的表達(dá)相對(duì)較高，而在根中和種子萌芽期表達(dá)較低。這種表達(dá)模式的差異取決于不同植物AL蛋白的功能多樣化。鹽脅迫是影響土壤可持續(xù)化及植物發(fā)育代謝的典型非生物威脅之一，鹽脅迫會(huì)誘導(dǎo)活性氧等氧化產(chǎn)物累積，引起膜脂過氧化?；趯?shí)時(shí)熒光定量分析表明，與0h相比，鹽脅迫后期MdAL3、MdAL4、MdAL6表達(dá)水平升高，尤其MdAL4，其表達(dá)水平隨著鹽脅迫時(shí)間的延長整體呈增加趨勢(shì)。

綜上表明，王族海棠AL轉(zhuǎn)錄因子家族與植物激素和非生物脅迫密切相關(guān)，尤其是MdAL4基因強(qiáng)烈響應(yīng)鹽脅迫。本研究結(jié)果可為揭示MdALs的進(jìn)化和生理功能提供理論依據(jù)，也為王族海棠的基因工程改良提供潛在靶點(diǎn)。