摘 要：本文建立了頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定面包中的曲酸含量，并優(yōu)化頂空條件以及進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證測(cè)定。結(jié)果表明，當(dāng)平衡溫度為90 ℃、平衡時(shí)間為30 min時(shí)，曲酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.190 3X+0.004 6，r2為0.999 6，保留時(shí)間為12.175 min。曲酸的平均加標(biāo)回收率為92.51%～96.49%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為9.0%～10.2%。該方法具有線性關(guān)系良好、回收率和精密度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于面包中曲酸的定量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：曲酸；氣相色譜-質(zhì)譜法；固相微萃??；面包

Abstract： In this paper， a headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry method was developed for the determination of trichothecenes in bread. The determination was carried out by optimizing the headspace conditions as well as performing methodological validation. The results showed that when the equilibrium temperature was 90 ℃ and the equilibrium time was 30 min， the standard curve equation of crotonic acid was Y=0.190 3X+0.004 6， r2 was 0.999 6， and the retention time was 12.175 min. The average spiked recoveries of crotonic acid were in the range of 92.51%～96.49% with the relative standard deviations of 9.0%～10.2%. The method has the advantages of good linearity， high recovery and precision， and can be used for the quantitative determination of crotonic acid in bread.

Keywords： varicose acid; gas chromatography-mass spectrometry; solid-phase microextraction; bagel bread

面包是人們?nèi)粘Ｉ钪谐Ｒ姷陌l(fā)酵食品之一，其獨(dú)特的風(fēng)味和口感深受消費(fèi)者喜愛。曲酸，一種由曲霉屬和青霉屬真菌在好氧條件下發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸，天然存在于多種發(fā)酵食品中。近年來，食品生產(chǎn)領(lǐng)域中曲酸作為添加劑的使用呈現(xiàn)出濫用趨勢(shì)，增加了食品安全的潛在風(fēng)險(xiǎn)[1]。因此，對(duì)面包等發(fā)酵食品中曲酸的快速檢測(cè)對(duì)食品生產(chǎn)質(zhì)量安全具有重要意義。建立一種能快速、準(zhǔn)確檢測(cè)面包中曲酸的頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法，以期為該法在面包質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用提供技術(shù)參考[2]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

面包，購(gòu)自超市。U-[13C6]-曲酸（25 mg·L-1），上?？?jī)祥生物科技有限公司；無水氯化鈉（分析純），四川源盛達(dá)化工有限公司；甲酸、甲醇、乙腈、乙酸銨和正己烷（色譜純），均購(gòu)自美國(guó)Merck公司；乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，美國(guó)Merck公司。

1.2 儀器與設(shè)備

7890B-5977B氣相色譜-質(zhì)譜儀，美國(guó)Agilent公司；N-EVAP氮吹儀，美國(guó)Agilent公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

①曲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱量10 mg曲酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%），用乙腈溶解后定容至10 mL容量瓶中，即得曲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0 g·L-1）。②曲酸標(biāo)準(zhǔn)中間液：精密量取0.10 mL曲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈定容至10 mL容量瓶中，即得曲酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0 mg·L-1）。③曲酸內(nèi)標(biāo)中間液：精密量取0.40 mL 25 mg·L-1的U-[13C6]-曲酸溶液，用乙腈定容至10 mL容量瓶中，即得曲酸內(nèi)標(biāo)中間液（1.0 mg·L-1）。

1.3.2 樣品前處理

樣品粉碎→試樣（2 g試樣放入50 mL離心管）+40 μL曲酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0 mg·L-1）+3 g無水硫酸鈉（升溫至550 ℃，保持4 h）+10 mL甲酸無水乙醇（0.1%）→渦旋混勻→超聲提取10 min→10 000 r·min-1離心5 min→取上清液50 mL→40 ℃氮吹至近干→加入超純水20 mL→用固相萃取柱收集續(xù)濾液，棄去前1 mL初濾液→過0.22 μm水相濾膜→待測(cè)。

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件

（1）色譜條件。流動(dòng)相A：甲酸-5 mmol·L-1乙酸銨（1∶99）混合溶液；流動(dòng)相B：甲酸-乙腈（1∶99）混合溶液；洗脫程序：0～0.1 min，99%A；1.0～1.5 min，99%→10%A；1.5～3.0 min，10%A；3.0～3.1 min，10%→99%A；3.1～5.0 min，99%A；進(jìn)樣量：2 μL；柱溫：30 ℃。

（2）質(zhì)譜條件。ESI+模式；離子源溫度：150 ℃；掃描模式：多反應(yīng)檢測(cè)模式。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按照1.3.3氣相色譜-質(zhì)譜條件，將曲酸內(nèi)標(biāo)溶液（1.0 mg·L-1）、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（0.5 μg·L-1、1.0 μg·L-1、2.0 μg·L-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1、25.0 μg·L-1、50.0 μg·L-1和100.0 μg·L-1）依次進(jìn)行上機(jī)測(cè)定，以曲酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，曲酸與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[3]。

1.3.5 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

在1.3.3氣相色譜-質(zhì)譜條件下，準(zhǔn)備5 g（精確至0.01 g）空白樣品，向空白樣品中添加15.0 μg·kg-1、30.0 μg·kg-1、60.0 μg·kg-1曲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3.2進(jìn)行樣品前處理，平行測(cè)定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度。

2 結(jié)果與分析

2.1 頂空條件優(yōu)化

2.1.1 平衡溫度的選擇

本試驗(yàn)考察不同平衡溫度（10 ℃、20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃和90 ℃）對(duì)曲酸內(nèi)標(biāo)物峰面積的影響。由圖1可知，當(dāng)平衡溫度為90 ℃時(shí)，曲酸內(nèi)標(biāo)物峰面積最大?？紤]到面包在實(shí)驗(yàn)中需要稀釋，且在實(shí)驗(yàn)中需避免水沸騰后造成污染[4]。因此，本次實(shí)驗(yàn)選擇90 ℃作為平衡溫度。

2.1.2 平衡時(shí)間的選擇

本試驗(yàn)考察不同的平衡時(shí)間（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min和80 min）對(duì)曲酸內(nèi)標(biāo)物峰面積的影響。由圖2可知，當(dāng)平衡時(shí)間為30 min時(shí)，曲酸內(nèi)標(biāo)物峰面積達(dá)到最大值，表明對(duì)曲酸進(jìn)行30 min加熱即可達(dá)到氣液平衡，并實(shí)現(xiàn)充分反應(yīng)。因此，本次實(shí)驗(yàn)選擇30 min作為平衡時(shí)間。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)及檢出限

依照空白基質(zhì)加標(biāo)樣品的方式制作標(biāo)準(zhǔn)溶液，以曲酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以曲酸與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[5]。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.190 3X+0.004 6，相關(guān)系數(shù)r2為0.999 6，說明線性關(guān)系良好。檢出限為5 μg·kg-1，定量限為15 μg·kg-1，曲酸的保留時(shí)間為12.175 min。

2.3 回收率與精密度

由表1可知，曲酸的平均加標(biāo)回收率為92.51%～96.49%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為9.0%～10.2%，表明實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性較高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精密度較好。

2.4 實(shí)際樣品檢測(cè)

采用本文建立的方法對(duì)6個(gè)品牌的面包進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示所有樣品中均能檢測(cè)出曲酸，檢出率最高為68.2%。說明該方法可用于多種面包樣品中曲酸的檢測(cè)。

3 結(jié)論

本研究建立了頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定面包中曲酸的方法。通過對(duì)頂空條件的優(yōu)化以及方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明，在平衡溫度為90 ℃、平衡時(shí)間為30 min的頂空條件下，本法的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系、樣品回收率以及方法精密度等均表現(xiàn)良好，在快速準(zhǔn)確地檢測(cè)面包中的曲酸含量方面具有有效性和可靠性，該法對(duì)促進(jìn)面包生產(chǎn)行業(yè)的食品安全監(jiān)管和可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：王丹（1989—），女，甘肅天水人，本科，工程師。研究方向：食品藥品安全檢驗(yàn)檢測(cè)方面的抽檢或檢測(cè)新方式新方法。