〔摘要〕 目的 基于過氧化物酶體增殖物激活受體家族（peroxisome proliferators-activated receptors， PPAR）信號(hào)通路研究健脾化痰方對(duì)多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome， PCOS）伴胰島素抵抗（insulin resistance， IR）大鼠模型的作用機(jī)制。方法 40只SD大鼠隨機(jī)分為兩組，空白對(duì)照組10只和造模組30只，造模組采用來曲唑灌胃及高脂飼料喂養(yǎng)造模8周。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、二甲雙胍組、健脾化痰方組，每組10只。健脾化痰方組和二甲雙胍組分別予以健脾化痰方、二甲雙胍干預(yù)，連續(xù)4周。采用HE染色法觀察卵巢組織病理學(xué)改變;ELISA法測(cè)定卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone， FSH）、黃體生成素（luteinizing hormone， LH）、雌二醇（estradiol， E2）、總睪酮（testosterone， T）、空腹血糖（fasti ng blood glucose， FBG）、空腹胰島素（fasting serum lisulin， FINS）、脂聯(lián)素的水平并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（homeostatic model assessment of insulin resistance， HMOR-IR）;PCR和Western blot分別檢測(cè)卵巢組織PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠體質(zhì)量明顯增加，血清LH、T、LH/FSH升高，E2、FSH降低，卵巢多囊性改變明顯，糖脂代謝調(diào)控失常（Plt;0.01）;與模型對(duì)照組比較，健脾化痰方組大鼠可控制體質(zhì)量增速，調(diào)節(jié)大鼠血清、血脂、血糖代謝環(huán)節(jié)，T、LH水平降低（Plt;0.05），F(xiàn)SH、E2、脂聯(lián)素水平升高（Plt;0.05），卵巢組織多囊樣改變改善，卵泡發(fā)育良好，卵巢組織PPARα、PPARγ的mRNA及蛋白表達(dá)水平上調(diào)（Plt;0.05）。結(jié)論 健脾化痰方能有效降低來曲唑聯(lián)合高脂飼料誘導(dǎo)的PCOS-IR大鼠體質(zhì)量，改善胰島素抵抗和脂代謝紊亂，調(diào)節(jié)性激素分泌，保護(hù)PCOS-IR大鼠卵巢生殖功能，可能是通過激活PPARα、PPARγ來發(fā)揮作用。

〔關(guān)鍵詞〕 多囊卵巢綜合征;健脾化痰方;來曲唑;高脂飼料;胰島素抵抗;PPARα、PPARγ

〔中圖分類號(hào)〕R285.1" " " " "〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A" " " " " 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.12.003

Mechanism of Jianpi Huatan Formula in improving PCOS-IR rats by regulating PPAR signaling pathway

LIN Anying2， YANG Luyu3， YANG Zhengwang4， YU Ximing1*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Maternal and Child Health Hospital in Guangzhou Huadu District， Guangzhou， Guangdong 510810， China; 3. Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Hospital in Jiangxi Province， Nanchang， Jiangxi 330012， China; 4. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Abstract〕 Objective To investigate the mechanism of action of Jianpi Huatan Formula （JPHTF） in improving polycystic ovary syndrome （PCOS） with insulin resistance （IR） in a rat model， based on the peroxisome proliferators-activated receptor （PPAR） signaling pathway. Methods Forty SD rats were randomized into a blank control group （n=10） and a model group （n=30）. The model group was induced with letrozole by gavage and fed with a high-fat diet for eight weeks. The successfully modeled rats were then randomly subdivided into a model control group， a metformin group， and a JPHTF group， with 10 rats in each group. The JPHTF and metformin groups were treated with JPHTF and metformin， respectively， for four consecutive weeks. HE staining was used to observe the histopathological changes in ovarian tissues; ELISA was performed to measure the levels of follicle-stimulating hormone （FSH）， luteinizing hormone （LH）， estradiol （E2）， testosterone （T）， fasting blood glucose （FBG）， fasting serum insulin （FINS）， and adip?onectin， and to calculate the homeostatic model assessment of insulin resistance （HMOR-IR）; PCR and Western blot were used to examine the mRNA and protein expression levels of PPARα and PPARγ in ovarian tissues， respectively. Results Compared with the blank control group， the model control group showed significantly increased body weight， serum levels of LH and T， as well as LH/FSH ratio， decreased levels of E2 and FSH， evident ovarian polycystic changes， and dysregulation of glucose and lipid metabolism （Plt;0.01）; compared with the model control group， the rats in the JPHTF group showed a slower body weight gain， improved serum， glucose， and lipid metabolism， and reduced T and LH levels （Plt;0.05）. The group also demonstrated elevated FSH， E2， and adiponectin levels （Plt;0.05）， alleviated ovarian polycystic changes， enhanced follicular development， and upregulated mRNA and protein expression levels of PPARα and PPARγ in ovarian tissues （Plt;0.05）. Conclusion JPHTF can effectively reduce body weight， improve insulin resistance and lipid metabolism disorders， regulate sex hormone secretion， and protect ovarian reproductive function in PCOS-IR rats induced by letrozole combined with a high-fat diet. It may exert its effects through activating PPARα and PPARγ.

〔Keywords〕 polycystic ovary syndrome; Jianpi Huatan Formula; letrozole; high-fat diet; insulin resistance; PPARα， PPARγ

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）作為育齡期女性常見內(nèi)分泌性疾病和代謝紊亂疾病，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，全球有8%～13%的育齡婦女深受此病困擾，該病嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[1]。全球約有一半的PCOS患者存在肥胖甚至超重的困擾，肥胖型PCOS患者血脂代謝異常、血清睪酮水平也更高。胰島素抵抗（insulin resistance，IR）作為PCOS的核心發(fā)病機(jī)制之一，可通過激活脂肪動(dòng)員，影響體內(nèi)脂質(zhì)代謝從而造成體內(nèi)脂質(zhì)堆積。葡萄糖-脂肪酸循環(huán)假說表明脂代謝紊亂可影響葡萄糖代謝，葡萄糖受損與IR狀態(tài)密不可分[2]。IR與脂代謝異常互相促進(jìn)，形成惡性循環(huán)，造成排卵障礙、月經(jīng)失調(diào)、不孕及糖尿病、冠心病、代謝綜合征等不良影響[3]。近年來越來越多研究表明，PCOS-IR與脂代謝異常及高脂血癥密切相關(guān)，過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferators-activated receptor，PPAR）主要包括PPARɑ、PPARγ，作為脂質(zhì)內(nèi)源性配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，故PPAR是代謝紊亂的重要藥物靶點(diǎn)[4]。

西醫(yī)以雙胍類藥物作為治療PCOS-IR臨床首選藥物，可有效緩解PCOS患者胰島素抵抗癥狀，但該類藥物存在禁忌證及胃腸道不適、肝功能損害等不良反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)者通過歸納PCOS-IR患者的癥狀、體征，認(rèn)為該病病機(jī)多以脾虛為本，痰濕為標(biāo)，脾虛痰濕是該病所致氣血津液代謝失常之本[5]。健脾化痰方為楊正望教授臨床經(jīng)驗(yàn)方，本團(tuán)隊(duì)前期臨床研究發(fā)現(xiàn)健脾化痰方可有效緩解患者的肥胖、糖脂代謝紊亂等代謝異常癥狀，且可有效改善患者卵泡發(fā)育及排卵障礙等問題[6-7]，但健脾化痰方治療PCOS-IR的研究以臨床觀察為主，相關(guān)分子水平及干預(yù)機(jī)制仍在探索階段。因此，本研究通過構(gòu)建PCOS-IR大鼠模型，探討該方治療PCOS-IR大鼠的作用機(jī)理，以期為日后臨床治療該病提供參考。

1 材料與方法

1.1" 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雌性SPF級(jí)21日齡SD大鼠40只，體質(zhì)量（53±6） g，購自湖南斯萊克景實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004。實(shí)驗(yàn)全程于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行，予以12 h光照/黑暗循環(huán)，環(huán)境為室溫，濕度40%～60%，大鼠可自由飲水采食，分籠飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)至23日齡。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2019-0009。本實(shí)驗(yàn)倫理審批號(hào)：LL2022020801，符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的3R原則。

1.2" 實(shí)驗(yàn)藥物

健脾化痰方由柴胡10 g，茯苓、黃芪各15 g，枳殼10 g、蒼術(shù)10 g，川芎5 g，浙貝母10 g，法半夏、當(dāng)歸各10 g，黃連5 g，甘草3 g（均購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院）組成。羧甲基纖維素鈉（批號(hào)：9004-32-4，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。戊巴比妥鈉（批號(hào)：P3761，Merck KGaA）。

1.3" 主要試劑

胰島素ELISA試劑盒（江蘇菲亞生物科技有限公司，批號(hào)：2205R42）;脂聯(lián)素ELISA試劑盒（江蘇菲亞生物科技有限公司，批號(hào)：FY3462-B）;卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（luteinizing hormone， LH）、雌二醇（estradiol，E2）、總睪酮（testosterone，T）ELISA試劑盒（批號(hào)分別為：FY3441-B、FY3676-B、FY3452-B、FY3450-B，江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司）;PPARα抗體、PPARγ抗體（貨號(hào)分別為PAB45809、PAB47899，武漢貝茵萊生物科技）。

1.4" 主要儀器

TGL16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;PIKOREAL 96熒光定量PCR儀（Thermo Fisher Scientific公司）;Chemray240全自動(dòng)生化分析儀、Rayto RT-6100酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）。

2 方法

2.1" 造模

將40只SPF級(jí)雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（10只）及造模組（30只）?？瞻讓?duì)照組大鼠予普通飼料喂養(yǎng)和0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（carboxymethylcellulose， CMC-Na）灌胃，CMC-Na給藥體積為10 mL·kg-1。造模組大鼠依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[8-10]進(jìn)行歷時(shí)8周的PCOS-IR大鼠模型制備：給予45%高脂飼料喂養(yǎng)8周，自第4周起將來曲唑溶于0.5% CMC-Na進(jìn)行灌胃，灌胃體積為10 mL·kg-1。脾虛痰濕證模型采用飲食不節(jié)、勞倦過度的多因素造模法。造模結(jié)束后連續(xù)4日取大鼠陰道涂片，顯微鏡下觀察并判斷動(dòng)情周期，出現(xiàn)動(dòng)情周期紊亂、血清HOMA-IR顯著升高表示造模成功。

2.2" 分組及給藥

從造模成功的大鼠中隨機(jī)抽取30只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對(duì)照組、健脾化痰方組及二甲雙胍組，每組10只。分組后分別予以健脾化痰方及二甲雙胍干預(yù)，給藥劑量按體表面積換算[11-12]：二甲雙胍組每日灌服等效劑量二甲雙胍溶液（每日用量為200 mg·kg-1）;健脾化痰方每日灌服等效用量為11.07 g·kg-1。各組每日灌胃1次，干預(yù)時(shí)間為4周。

2.3" 脾虛痰濕證大鼠行為學(xué)等指標(biāo)的觀察

每日觀察并記錄各組大鼠進(jìn)食量、體型、體態(tài)精神狀態(tài)、活動(dòng)狀況、皮毛色澤、糞便質(zhì)地等外觀行為學(xué)指標(biāo)，參考文獻(xiàn)[13-14]進(jìn)行中醫(yī)證候評(píng)估。脾虛模型評(píng)估從有無異味（無異味、淡臭、臭、惡臭）、精神狀況（良好、倦怠、朦朧欲睡、多怒撕咬）、活動(dòng)狀況（自如、蜷縮、畏寒喜暖、拱背發(fā)抖）、呼吸（平順、氣喘、喘急、呼吸微弱）、皮毛色澤（光滑、無光澤、豎毛蓬松、枯黃稀少）、大便質(zhì)地（正常、偏濕、濕爛、黏液便）分項(xiàng)計(jì)算脾虛積分，其中各項(xiàng)正常為1分，根據(jù)嚴(yán)重程度逐分遞增，最終總分≤6為無脾虛，7≤總分≤12為輕度脾虛，13≤總分≤18為典型脾虛，19≤總分≤24為重度脾虛。痰濕證證候根據(jù)大鼠是否形體肥胖、毛發(fā)油膩及血清血脂水平升高進(jìn)行評(píng)估。

2.4" 樣本采集與處理

每周定時(shí)（上午9：00—9：30）檢測(cè)2次稱取各組大鼠體質(zhì)量并記錄，末次給藥后禁食不禁水12 h，次日上午7：00稱取并記錄大鼠體質(zhì)量，各組大鼠分別予戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，確定大鼠無反應(yīng)后，暴露腹主動(dòng)脈用采血針采血，取血4～5 mL室溫下靜置凝固后3 000 r·min-1離心（離心半徑10 cm）15 min取其上清液。眼科剪鈍性分離大鼠卵巢組織，分別置于-80 ℃下保存?zhèn)溆眉?%多聚甲醛溶液固定。

2.5" HE染色觀察大鼠卵巢組織切片

待卵巢組織經(jīng)固定24 h后，依次用75%、90%、95%、100%乙醇脫水、石蠟包埋后切片，脫蠟后蘇木精染液染色處理，待切片干燥后使用數(shù)目顯微鏡攝像系統(tǒng)觀察卵巢組織形態(tài)變化并拍照。

2.6" ELISA法檢測(cè)大鼠血清性激素、脂聯(lián)素及胰島素濃度

將存于-80 ℃冰箱的血清解凍后再次離心，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書測(cè)定大鼠血清FSH、 LH、E2、T、脂聯(lián)素及胰島素水平。

2.7" 生化法檢測(cè)大鼠血清中血脂水平

全自動(dòng)生化分析儀自動(dòng)檢測(cè)大鼠血清中血脂四項(xiàng)甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total choles?terol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）的濃度。

2.8" PCR法檢測(cè)大鼠卵巢組織PPARα、PPARγ mRNA的表達(dá)

取卵巢組織并經(jīng)Trizol法提取總RNA，進(jìn)入NCBI找到目的基因的序列信息，由北京擎科合成引物，進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PPARα、PPARγ的mRNA相對(duì)表達(dá)水平。引物序列詳見表1。

2.9" Western blot檢測(cè)卵巢組織PPARα、PPARγ蛋白的表達(dá)水平

將取出保存完好的卵巢組織按照實(shí)驗(yàn)試劑說明書進(jìn)行研磨、室溫孵育后得到組織總蛋白產(chǎn)物，按照要求配制分離膠與濃縮膠后完成電泳。接著將蛋白條帶與PVDF膜及濾紙一同放入轉(zhuǎn)膜緩沖液完成轉(zhuǎn)膜，用含5%脫脂奶粉的封閉液浸泡PVDF膜，室溫?fù)u床封閉2 h，孵育一抗、二抗，用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光30/60 s，觀察結(jié)果并保存圖片。

2.10" 統(tǒng)計(jì)與分析

運(yùn)用SPSS 29.0及GraphPad Prism 8.0軟件處理，所有計(jì)量資料均以“x±s”表示，組間采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以Plt;0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1" PCOS-IR模型制備過程中大鼠體質(zhì)量的變化

各組大鼠造模前體質(zhì)量無明顯差異（Pgt;0.05）;第4周起，造模組大鼠體質(zhì)量顯著高于空白對(duì)照組（Plt;0.05）;健脾化痰方干預(yù)結(jié)束后，與模型對(duì)照組相比，第12周起健脾化痰方組大鼠體質(zhì)量增速得到控制（Plt;0.01）。詳見圖1。

3.2" 各組大鼠一般情況及證候積分情況

空白對(duì)照組精神狀態(tài)良好，活動(dòng)自如，呼吸平順，毛發(fā)順滑有光澤，大便成型，質(zhì)地正常。與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠形體肥胖，毛發(fā)蓬松，易激惹，大便次數(shù)多且質(zhì)地濕爛，脾虛痰濕證候積分顯著升高（Plt;0.01），健脾化痰方干預(yù)后大鼠體質(zhì)量得以控制，活動(dòng)自如，大便次數(shù)減少且成形，脾虛證候積分明顯下降（Plt;0.01）。詳見圖2。

3.3" 各組大鼠卵巢組織形態(tài)的變化

空白對(duì)照組大鼠卵巢組織內(nèi)處于不同發(fā)育階段的卵泡，顆粒細(xì)胞排列厚實(shí)緊密，生長活躍，發(fā)育良好，可見成熟黃體。模型對(duì)照組大鼠卵巢組織中閉鎖卵泡數(shù)量增多，內(nèi)可見較多囊性擴(kuò)張卵泡，并伴有間質(zhì)纖維組織增生情況。與模型對(duì)照組比較，健脾化痰方干預(yù)后大鼠卵巢組織內(nèi)黃體數(shù)量增多，囊性擴(kuò)張卵泡及閉鎖卵泡數(shù)量明顯減少，顆粒細(xì)胞層數(shù)增多，未見間質(zhì)纖維組織增生。詳見圖3。

3.4" 各組大鼠血清性激素水平的變化

與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清中LH、T、LH/FSH水平顯著升高（Plt;0.01），E2水平顯著降低（Plt;0.01），大鼠血清性激素紊亂。與模型對(duì)照組相比，予以健脾化痰方干預(yù)后大鼠血清LH、T、LH/FSH水平降低（Plt;0.01），E2、FSH升高（Plt;0.01）。詳見表2。

3.5" 各組大鼠血清脂代謝及脂聯(lián)素水平的變化

與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清TC、TG及LDL-C水平顯著升高，HDL-C、脂聯(lián)素水平顯著降低（Plt;0.01，Plt;0.05）。與模型對(duì)照組相比，健脾化痰方及二甲雙胍組大鼠血清中TC、TG及LDL-C的含量顯著降低（Plt;0.01），血清中脂聯(lián)素含量升高（Plt;0.01，Plt;0.05），可升高HDL-C水平，但組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。詳見表3。

3.6" 各組大鼠卵巢組織PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)水平的變化

與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)下調(diào)（Plt;0.05，Plt;0.01）;與模型對(duì)照組相比，兩給藥組PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)增加（Plt;0.05，Plt;0.01）。詳見圖4。

3.7" 各組大鼠卵巢PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)水平的變化

與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)水平下調(diào)（Plt;0.05，Plt;0.01）;與模型對(duì)照組相比，兩給藥組PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)水平增加（Plt;0.05，Plt;0.01）。詳見圖5。

4 討論

PCOS病程較長，病情復(fù)雜，影響卵泡的生長發(fā)育而出現(xiàn)稀發(fā)排卵;影響子宮內(nèi)膜發(fā)育致使子宮內(nèi)膜容受性缺陷，出現(xiàn)著床困難，甚至導(dǎo)致不孕或不良妊娠，對(duì)女性的生殖、代謝產(chǎn)生嚴(yán)重影響。脾虛痰濕為臨床PCOS患者常見證型之一，脾主運(yùn)化氣血津液，若脾虛失運(yùn)，水濕痰飲阻于經(jīng)絡(luò)胞宮，則見月經(jīng)失調(diào)、肥胖、卵巢多囊樣改變等。中醫(yī)通過四診合參辨證論治，多以醒脾祛濕、行氣化痰為其治法。

本次實(shí)驗(yàn)首先通過來曲唑聯(lián)合高脂飼料構(gòu)建PCOS-IR大鼠模型，發(fā)現(xiàn)大鼠體質(zhì)量明顯增加，血清性激素水平紊亂，卵巢多囊樣改變明顯，脂代謝紊亂明顯，卵巢組織中PPARα、PPARγ表達(dá)水平顯著下降，在用健脾化痰方干預(yù)后，PCOS大鼠體質(zhì)量增速有所減緩甚至下降，卵泡發(fā)育情況見好，血清脂代謝異常改善，改善大鼠性激素紊亂、脂聯(lián)素降低，提示健脾化痰方可能基于PPARα、PPARγ信號(hào)通路促進(jìn)大鼠卵泡生長發(fā)育、改善排卵障礙、調(diào)節(jié)大鼠內(nèi)分泌水平及改善糖脂代謝紊亂。

盡管PCOS病因復(fù)雜，目前尚未有明確發(fā)病機(jī)制，但研究發(fā)現(xiàn)PCOS發(fā)生發(fā)展中脂代謝異常和IR亦會(huì)互相促進(jìn)，形成惡性循環(huán)[15-16]。過高的胰島素濃度激活脂肪動(dòng)員，從而影響低密度脂蛋白代謝、加速高密度脂蛋白清除，造成脂質(zhì)累積[17]。臨床統(tǒng)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)其常伴隨IR及高脂血癥[18-19]。葡萄糖-脂肪酸循環(huán)假說表明脂代謝紊亂可影響葡萄糖代謝，葡萄糖受損與IR狀態(tài)密不可分。脂代謝紊亂影響葡萄糖代謝，繼而出現(xiàn)肥胖、胰島素抵抗和性激素紊亂等[20]。PPAR作為核受體蛋白的家族中的一員，由調(diào)節(jié)參與葡萄糖和脂質(zhì)代謝等多種過程的轉(zhuǎn)錄因子組成[21]，在機(jī)體的新陳代謝、生長發(fā)育及體內(nèi)許多生理過程中扮演重要角色，PPAR表達(dá)異?？赡芘c血脂異常、肥胖、代謝綜合征和2型糖尿病等疾病相關(guān)[22]。PPARα配體是影響脂質(zhì)合成、分解和代謝的脂肪酸衍生物[23]。PPARα在肝脂蛋白代謝中起重要作用[24]。SUN等[25]證明通過PPARα可促進(jìn)脂質(zhì)分解代謝和胰島素敏感性，缺乏脂肪酸氧化會(huì)增加肝臟脂肪變性和胰島素抵抗，從而導(dǎo)致脂質(zhì)積聚。PPARγ與脂肪生成、糖脂代謝密不可分，主要在脂肪組織、巨噬細(xì)胞和卵巢中表達(dá)。PPARγ通過調(diào)節(jié)脂肪組織中脂肪酸的合成和儲(chǔ)存及影響胞內(nèi)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，卵巢組織中的PPARγ主要表達(dá)于卵泡顆粒細(xì)胞中，與卵巢激素合成與代謝、顆粒細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)[26-27]，在各級(jí)卵泡生長發(fā)育中發(fā)揮重要作用，影響排卵和卵子質(zhì)量，從而在代謝與生殖中發(fā)揮重要作用。

中醫(yī)學(xué)中并無PCOS這一病名，但通過歸納PCOS-IR患者的證型、體質(zhì)可將該病歸屬于“月經(jīng)后期”“閉經(jīng)”“不孕癥”范疇。運(yùn)用中醫(yī)多思路辨證論治PCOS-IR具有一定優(yōu)勢(shì)，且中醫(yī)藥治療該病具有安全、不良反應(yīng)少且適用性廣的優(yōu)勢(shì)。前期臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，脾虛痰濕證在肥胖型PCOS-IR患者中尤為常見[6-7]。清代《傅青主女科》：“婦人素體肥胖，兼恣膏粱厚味，以致痰濕內(nèi)生，流注沖任胞脈，或因體脂過盛，壅塞胞脈和胞宮而致不孕。”脾虛失健，氣血津液代謝失常是肥胖之源泉，也是PCOS-IR所致代謝異常之根本原因。“女子以血為用”，中醫(yī)認(rèn)為氣血是月經(jīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，氣血調(diào)和則月經(jīng)正常。若素體脾虛，或因過食肥甘厚膩，或勞倦思慮過度，耗傷脾氣，中州失運(yùn)，脾胃升降樞紐失常，一則脾胃見化源不足，二則不能運(yùn)化水濕，聚而成痰化飲，痰濕作為病理產(chǎn)物，又可成為繼發(fā)性病理因素。痰濁浸漬四肢、肌肉，表現(xiàn)為肥胖等癥;痰濕阻滯，經(jīng)絡(luò)壅塞，沖任受損，則胞宮失職，以致月經(jīng)逾期不至、月經(jīng)過少，甚則不孕等癥;痰濕與氣血互結(jié)為穢濁之物壅滯于胞宮，胞宮氣血運(yùn)行不暢日久則發(fā)為癥積，故卵巢呈多囊樣改變。故PCOS-IR患者的治療以健脾化痰為宗旨，治痰當(dāng)先復(fù)脾之健運(yùn)，而痰可自化。健脾化痰方為楊正望臨床有效經(jīng)驗(yàn)方，可有效改善患者肥胖、排卵障礙、月經(jīng)失調(diào)、不孕等癥狀、提高妊娠率[4-5]，有健脾化痰除濕、行氣理血調(diào)經(jīng)之效?，F(xiàn)代藥理研究表明，健脾化痰方中茯苓具有降血糖，增強(qiáng)胰島素敏感性的作用[28]，黃芪則可雙向調(diào)節(jié)血糖、調(diào)控血脂[29]，半夏、陳皮可降血脂、抗糖尿病、改善胰島素抵抗[30-31]，柴胡具有抑制脂肪酸合成的功效[32]，枳殼、當(dāng)歸、川芎可調(diào)控血脂水平[33-35]。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)基于PCOS與IR的重要關(guān)聯(lián)，以來曲唑聯(lián)合高脂飼料構(gòu)建的PCOS-IR大鼠為模型，探討健脾化痰方對(duì)PCOS-IR大鼠的內(nèi)分泌、卵巢形態(tài)學(xué)及糖脂代謝的作用機(jī)制，推測(cè)健脾化痰方可通過激活PPARα、PPARγ信號(hào)通路調(diào)控脂代謝，改善胰島素抵抗，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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〔基金項(xiàng)目〕湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2022JJ40317）;湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地開放基金項(xiàng)目（21PTKF1011）;國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（202210541064）。

〔通信作者〕*余曦明，女，碩士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，E-mail：63175725@qq.com。