摘" 要： 本研究旨在探究牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）感染對牛腎細(xì)胞（Madin-Darby Bovine Kidney cells， MDBK）鐵死亡的調(diào)控作用及其對病毒復(fù)制的影響。本研究通過激光共聚焦、Western blot、qPCR和電鏡技術(shù)等技術(shù)檢測BVDV感染MDBK細(xì)胞鐵死亡發(fā)生與病毒復(fù)制水平，另外，使用鐵死亡抑制劑Fer-1研究鐵死亡對病毒復(fù)制和細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響。結(jié)果表明：BVDV（MOI=5）感染細(xì)胞較正常對照組細(xì)胞死亡率顯著增加（Plt;0.05），感染細(xì)胞內(nèi)Fe2+和脂質(zhì)過氧化水平較正常細(xì)胞顯著升高（Plt;0.05），透射電鏡檢測可見線粒體表面積變小、嵴減少以及膜密度增加等鐵死亡發(fā)生特征；將鐵死亡抑制劑Fer-1預(yù)處理MDBK細(xì)胞后，可顯著抑制BVDV感染病毒復(fù)制水平（Plt;0.05）；此外，BVDV感染誘導(dǎo)鐵死亡對MDBK細(xì)胞中IL-1β、IL-18以及IFN-β等炎性因子呈正調(diào)控效應(yīng)。以上結(jié)果提示，BVDV感染可引起宿主細(xì)胞鐵死亡，且鐵死亡發(fā)生可顯著促進(jìn)病毒復(fù)制水平以及宿主細(xì)胞炎性因子表達(dá)。

關(guān)鍵詞： 牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；鐵死亡；病毒復(fù)制；炎性因子

中圖分類號： S852.653

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：0366-6964（2024）12-5716-09

doi： 10.11843/j.issn.0366-6964.2024.12.034

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

收稿日期：2023-12-12

基金項(xiàng)目：國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項(xiàng)目（202310712186）；陜西省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新計劃項(xiàng)目（NYKJ-2022-YL（XN）08）

作者簡介：張梓璇（2003-），女，河北安平人，本科生，主要從事動物醫(yī)學(xué)研究，E-mail：451095676@qq.com

*通信作者：齊雪峰，主要從事反芻獸重大疫病致病機(jī)制與防控研究，E-mail：yxyan2002@163.com

The Effects of Bovine Viral Diarrhoea Virus （BVDV）-induced Ferroptosis on Virus Replication

ZHANG" Zixuan1，2， ZHANG" Ying1，2， LI" Zhijun1，2， YANG" Jingling1，2， JIANG" Zihao1，2， HUANG" Huamin1，2， QI" Xuefeng1，2*

（1.College of Veterinary Medicine， Northwest Aamp;F University， Yangling 712100，" China;

2.Key Laboratory of Ruminant Disease Prevention and Control （West）， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Yangling 712100， China）

Abstract：" This study aimed to investigate the regulatory effect of bovine viral diarrhoea virus（BVDV） infection on ferroptosis in Madin-Darby Bovine Kidney（MDBK） cells and its effect on viral replication. Technologies such as confocal microscopy， Western blot， qPCR and electron microscopy were used to detect ferroptosis and the level of viral replication in BVDV-infected cells. Furthermore， the viral replication level and inflammatory cytokines expression in BVDV-infected cells pretreated with Fer-1， a commonly used ferroptosis inhibitor， were also detected. The results showed that， compared with the normal control group， the mortality rate of cells infected with BVDV （MOI=5） was significantly increased （Plt;0.05）， which was accompanied with increased levels of Fe2+ and lipid peroxidation （Plt;0.05）. Transmission electron microscopy （TEM） analysis revealed that BVDV-infected and Erastin-treated cells displayed shrunk mitochondria with fewer cristae， increased mitochondrial membrane density and decreased mitochondrial mean areas compared with those of mock-infected cells， which was a typical morphological feature of ferroptosis. Fer-1 treatment significantly inhibited the levels of viral replication in BVDV-infected cells （Plt;0.05）. In addition， ferroptosis induced by BVDV infection had positive regulatory effects on inflammatory cytokines expression， including IL-1β， IL-18 and IFN-β. The results suggested that BVDV infection can induce ferroptosis in host cells， and the induction of ferroptosis enhanced the level of viral replication and the expression of inflammatory cytokines.

Key words： bovine viral diarrhoea virus （BVDV）; ferroptosis; virus replication; inflammatory cytokines

*Corresponding author： QI Xuefeng，E-mail：yxyan2002@163.com

牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus， BVDV）在全世界分布廣泛，其宿主包括牛、豬、羊、牦牛、鹿、駱駝及多種野生偶蹄動物［1］。BVDV以持續(xù)性感染和免疫抑制為主要致病特征。牛感染BVDV后會出現(xiàn)腹瀉，消化道和腸黏膜糜爛等癥狀；懷孕母牛感染則會造成胚胎死亡、胎兒畸形或胎兒建立免疫耐受，持續(xù)性感染動物出生［2-3］。持續(xù)性感染的?？梢酝ㄟ^分泌物等持續(xù)不斷地向環(huán)境中排毒，致使更多的牛感染BVDV，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大損害［3］。

鐵死亡是由脂質(zhì)過氧化介導(dǎo)的一種鐵依賴性細(xì)胞程序性死亡方式。細(xì)胞鐵死亡過程由鐵代謝、活性氧（reactive oxygen species，ROS）調(diào)控和脂質(zhì)代謝三種因素共同參與［4］。有研究表明，鐵死亡可以通過自由基等途徑參與病毒感染過程［5］。例如豬流感病毒（SI）、輪狀病毒（RV）通過誘導(dǎo)宿主細(xì)胞鐵死亡促進(jìn)病毒復(fù)制水平［6-7］；而豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬瘟病毒（CSFV）通過抑制鐵死亡增強(qiáng)病毒感染水平［8-9］。然而，有關(guān)BVDV感染對宿主細(xì)胞鐵死亡的調(diào)控尚不清楚。

本研究旨在探究致細(xì)胞病變型（CP） BVDV感染對MDBK細(xì)胞鐵死亡的調(diào)控作用及其對病毒復(fù)制的影響，進(jìn)一步探究抑制鐵死亡對病毒復(fù)制水平以及細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響，這對深入闡明BVDV致病機(jī)理及發(fā)掘防控新靶點(diǎn)具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。

1" 材料與方法

1.1" 病毒及細(xì)胞

本試驗(yàn)中所用BVDV HJ-1株（基因型為BVDV-1b，登錄號：JX065783）為本實(shí)驗(yàn)室保存，感染MDBK細(xì)胞可出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect，CPE）；牛腎細(xì)胞（MDBK）由本實(shí)驗(yàn)室傳代保存。

1.2" 主要試劑

DMEM購自美國Hyclone公司；胎牛血清、青霉素/鏈霉素雙抗溶液和Opti-MEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司；胰蛋白酶購自上海閃晶生物公司；RIPA蛋白裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑和5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖溶液購自北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；TRIzol試劑購自大連寶生物公司產(chǎn)品；鼠抗BVDV NS4B抗體為本實(shí)驗(yàn)室制備保存；鼠抗IL-18抗體、鼠抗IL-1β抗體和鼠抗IFN-β抗體購自美國Immunoway公司；鼠抗GAPDH抗體購自美國Abcom公司產(chǎn)品；Liperfluo-細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物檢測試劑盒、鐵離子探針FerroOrange-二價鐵離子檢測探針均購自同仁化學(xué)試劑公司；脂質(zhì)氧化（MDA）檢測試劑盒購自碧云天試劑公司；HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗購自北京TransGen Biotech公司；瓊脂糖（Agarose）購自HydraGene公司；PVDF膜購自美國Merck-Millipore公司；ECL發(fā)光液試劑盒購自上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix購自北京TransGen Biotech公司；TransStart Tip Green qPCR SuperMix購自北京TransGen Biotech公司。

1.3" 試驗(yàn)設(shè)計

將感染BVDV（MOI=5）48 h的MDBK細(xì)胞作為試驗(yàn)組，同時設(shè)置未感染BVDV細(xì)胞為陰性對照組，用Erastin（10 μmol·L－1）處理組細(xì)胞為陽性對照組。測定比對BVDV感染的MDBK細(xì)胞的細(xì)胞活率、線粒體形態(tài)變化以及細(xì)胞中的鐵死亡特征變化，從而判斷BVDV感染的MDBK細(xì)胞是否發(fā)生鐵死亡。

在探究BVDV誘導(dǎo)鐵死亡對其復(fù)制水平的影響時，將BVDV+Fer-1組作為試驗(yàn)組，BVDV+DMSO組作為對照組，通過qPCR、Western blot和TCID50法進(jìn)行測定。同時BVDV+Fer-1組作為試驗(yàn)組，BVDV+DMSO組、Fer-1組、DMSO組作為對照組測定各組各炎性細(xì)胞因子mRNA以及蛋白質(zhì)表達(dá)水平，從而探究BVDV誘導(dǎo)的鐵死亡對其感染細(xì)胞中炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響。

1.4" 病毒感染及TCID50測定

取生長狀態(tài)良好的MDBK細(xì)胞，用胰酶消化，在10% DMEM培養(yǎng)液中重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105個·mL－1，于12孔板按1 mL·孔－1添加細(xì)胞懸液。培養(yǎng)24 h后，棄掉培養(yǎng)液用PBS清洗2次后，每孔加1 mL 2%的DMEM培養(yǎng)液，每孔感染BVDV（MOI=5），于37℃孵育。收獲的病毒液進(jìn)行TCID50測定，將收集的細(xì)胞或上清反復(fù)凍融，經(jīng)梯度稀釋后（10-1、10-2、……、10-10），分別加入96孔板中，每孔100 μL，每個梯度8個重復(fù)。置細(xì)胞于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中5～7 d，每天觀察細(xì)胞病變情況，并用Reed-Muench法計算TCID50。

1.5" Western blot檢測

將收集細(xì)胞樣本用RIPA裂解液（含PMSF）裂解后進(jìn)行SDS-PAGE檢測，然后將蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)至PVDF膜上，封閉液室溫封閉2 h，分別孵育抗目的蛋白一抗，4 ℃孵育過夜，TBST洗膜5次，二抗孵育2h，TBST洗膜5次，加入化學(xué)發(fā)光劑ECL，通過凝膠照相系統(tǒng)對蛋白進(jìn)行曝光并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.6" Fe2+和脂質(zhì)過氧化物L(fēng)PO熒光檢測

將MDBK細(xì)胞接種至鋪有細(xì)胞爬片的24孔板中培養(yǎng)至24 h后，接種BVDV（MOI=5），培養(yǎng)至48h后，吸出培養(yǎng)基，用PBS洗3遍。分別加入Fe2+熒光探針FerroOrange工作液（終濃度1 μmol·L－1）和脂質(zhì)過氧化物探針Liperfluo工作液（終濃度10 μmol·L－1），37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 min，吸掉工作液，PBS洗2遍。加入4%多聚甲醛固定15 min。PBS洗3遍，加DAPI染色液室溫孵育15 min，PBS洗3遍，每次5 min。將片子取出，在載玻片上滴1滴防熒光淬滅劑，將玻璃片倒扣在載玻片上，標(biāo)記，用熒光顯微鏡觀察記錄。

1.7" RNA提取和熒光定量PCR

將MDBK細(xì)胞接種至6孔板中，待細(xì)胞匯合度為60%～70%時，接種BVDV（MOI=5），接毒后繼續(xù)培養(yǎng)48 h。用TRIzol收獲各試驗(yàn)組和對照組細(xì)胞并提取總RNA，用Nanodrop 2000測定RNA濃度，用EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix將總量為1 μg RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以此cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR檢測。采用TransStart Tip Green qPCR SuperMix進(jìn)行qPCR檢測，每組設(shè)3個重復(fù)。反應(yīng)體系如下：1 μL cDNA，上、下游引物各1 μL ，10 μL Tip Green qPCR SuperMix 和7 μL RNase free water共20μL。qPCR反應(yīng)程序如下：94 ℃預(yù)變性30 s；94 ℃ 5 s，60 ℃ 30s，40個循環(huán)。分別檢測各組細(xì)胞樣本中BVDV Npro、IL-18、IL-1β和IFN-β基因轉(zhuǎn)錄水平，各基因引物序列見表1。以GAPDH為內(nèi)參基因，2-△△Ct進(jìn)行相對定量計算，每個樣品重復(fù)3次求平均值。

1.8" 透射電鏡

將MDBK細(xì)胞鋪于6 cm細(xì)胞皿中，待細(xì)胞匯合度為70%時感染BVDV（MOI=5），繼續(xù)培養(yǎng)至48 h，棄去培養(yǎng)基，PBS沖洗細(xì)胞3次，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，用1.5 mL離心管收集細(xì)胞后1 500 r·min－1離心10 min。細(xì)胞樣品具體處理步驟如下：將細(xì)胞沉淀用2.5%的戊二醛4 ℃固定48 h，棄掉戊二醛，使用PBS清洗細(xì)胞5次；1%鋨酸4 ℃固定2 h，用PBS清洗細(xì)胞5次；然后分別用不同濃度的乙醇進(jìn)行脫水，最后用100%的丙酮脫水2次，每次30 min；滲透依次用Epon812環(huán)氧樹脂∶丙酮=1∶3處理2 h，環(huán)氧樹脂∶丙酮=1∶1處理5 h，環(huán)氧樹脂∶丙酮=3∶1處理12 h，環(huán)氧樹脂滲透2次，每次24 h；之后依次放入30℃烘箱24 h，60℃烘箱24 h進(jìn)行包埋；使用超薄切片機(jī)切片，設(shè)好切片厚度（50～60 nm），醋酸雙氧鈾、檸檬酸鉛進(jìn)行染色10 min；雙蒸水沖洗染色液，用濾紙吸干存放在樣品夾中，使用HT7700型透射電鏡觀察制備好的樣品超薄切片并獲取圖像。

1.9" 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

每個試驗(yàn)重復(fù)3次，所有數(shù)據(jù)均采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用“x±s”表示，“*”表示差異顯著（Plt;0.05），“**”表示差異極顯著（Plt;0.01），“n.s.”表示差異不顯著。

2" 結(jié)" 果

2.1" BVDV感染MDBK細(xì)胞活率與線粒體形態(tài)變化

經(jīng)測定病毒滴度為107.35TCID50/0.1 mL。將BVDV（MOI=5）感染MDBK細(xì)胞后48 h，同時設(shè)置未感染BVDV細(xì)胞為陰性對照組，用Erastin（10 μmol·L－1）處理組細(xì)胞為陽性對照組，進(jìn)行臺盼藍(lán)染色通過顯微鏡觀察細(xì)胞的死亡率。結(jié)果顯示，與陰性對照組細(xì)胞相比，BVDV感染MDBK細(xì)胞后細(xì)胞死亡率極顯著上升（Plt;0.01），陽性對照鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin處理組細(xì)胞死亡率較對照組極顯著上升（Plt;0.01，圖1）。

通過透射電鏡觀察各組細(xì)胞線粒體的形態(tài)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BVDV感染細(xì)胞線粒體與對照組相比，可見線粒體萎縮，平均表面積極顯著降低（Plt;0.01），線粒體膜密度增加，與陽性對照組（Erastin）一致（圖2）。提示BVDV感染MDBK細(xì)胞能誘導(dǎo)鐵死亡的發(fā)生。

2.2" BVDV感染MDBK細(xì)胞中鐵死亡特征變化

為進(jìn)一步檢測BVDV感染細(xì)胞中鐵死亡發(fā)生特征，本研究檢測Fe2+、LPO以及丙二醛（malondialdehyde， MDA）的水平變化。本研究通過熒光法檢測BVDV感染引起的Fe2+熒光強(qiáng)度變化，發(fā)現(xiàn)BVDV感染細(xì)胞中Fe2+平均熒光強(qiáng)度相較于未感染對照細(xì)胞極顯著增加（Plt;0.01，圖3）。此外，可見BVDV感染細(xì)胞中LPO平均熒光強(qiáng)度相較于未感染的對照細(xì)胞極顯著增加（Plt;0.01，圖4）。MDA是細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物。為檢測BVDV感染細(xì)胞中MDA變化，使用MDA檢測試劑盒對細(xì)胞進(jìn)行處理，用酶標(biāo)儀在532nm測量吸光度。結(jié)果顯示，BVDV感染組較正常細(xì)胞組MDA含量極顯著增加（Plt;0.01，圖5）。綜上，結(jié)果表明BVDV感染MDBK細(xì)胞中脂質(zhì)過氧化水平顯著升高，F(xiàn)e2+含量增加，鐵死亡發(fā)生水平增加。

2.3" BVDV誘導(dǎo)鐵死亡對其復(fù)制水平的影響

為探究BVDV誘導(dǎo)鐵死亡對其復(fù)制水平的影響，本研究分別通過qPCR、Western blot和TCID50法檢測鐵死亡抑制劑Fer-1處理對BVDV感染細(xì)胞中病毒復(fù)制水平的影響。結(jié)果顯示，F(xiàn)er-1預(yù)處理后BVDV感染不同時間BVDV+Fer-1組細(xì)胞中病毒復(fù)制水平較BVDV+DMSO組均顯著降低（圖6、7、8）。提示BVDV誘導(dǎo)鐵死亡對病毒復(fù)制水平具有促進(jìn)作用。

2.4" BVDV誘導(dǎo)的鐵死亡對其感染細(xì)胞中炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響

為探究BVDV感染誘導(dǎo)鐵死亡對于細(xì)胞中炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響，本研究通過qPCR和Western blot法檢測BVDV感染MDBK細(xì)胞中IFN-β、IL-18、IL-1β的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，在BVDV感染細(xì)胞中各炎性細(xì)胞因子的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均較未感染組細(xì)胞顯著增加（Plt;0.01），而鐵死亡抑制劑Fer-1預(yù)處理的細(xì)胞在感染BVDV后各炎性細(xì)胞因子的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平較未處理感染組均顯著降低（Plt;0.01，圖9）。提示鐵死亡促進(jìn)BVDV感染細(xì)胞中炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。

3" 討" 論

BVDV屬于黃病毒科，瘟病毒屬，是一種小包膜單股正鏈RNA病毒，它具有三種不同的基因型：BVDV-1，BVDV-2，BVDV-3。根據(jù)其是否引起細(xì)胞病變可以分為致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（NCP）［12］。BVDV通過病毒糖蛋白E2與宿主細(xì)胞表面受體CD46進(jìn)行特異性結(jié)合，從而促使病毒感染細(xì)胞［13-14］。在BVDV進(jìn)入細(xì)胞并且感染復(fù)制后，病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白與宿主蛋白分子發(fā)生相互作用，有利于病毒逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視并在細(xì)胞內(nèi)增殖［14］。目前，對于BVDV的致病機(jī)制雖然做了很多有價值的研究工作，但尚不十分明確。

鐵死亡是一種新型細(xì)胞死亡方式，其具有鐵離子依賴性，是細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)活性氧（ROS）生成與降解的平衡失調(diào)所致［15］。鐵死亡不同于細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征，鐵死亡細(xì)胞沒有傳統(tǒng)細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)的現(xiàn)象，如細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)凝集、凋亡小體的形成、細(xì)胞骨架的解體等現(xiàn)象的發(fā)生。發(fā)生鐵死亡的細(xì)胞線粒體在透射電鏡下表現(xiàn)為體積縮小、線粒體膜密度增加和線粒體嵴減少或消失［15-16］。這與本研究中檢測到的BVDV感染MDBK細(xì)胞中線粒體形態(tài)變化一致。有研究發(fā)現(xiàn)，病毒蛋白和線粒體膜之間的相互作用促進(jìn)了ROS的產(chǎn)生，并且越來越多的研究表明，增加的ROS水平有利于增強(qiáng)病毒的復(fù)制［17］。而Fe2+在氧化還原循環(huán)中，由于具有電子轉(zhuǎn)移的特性，使其在芬頓反應(yīng)中可以與H2O2反應(yīng)，產(chǎn)生羥基自由基（·OH）——活性氧（ROS）之一［18］。丙二醛 （MDA）則是細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物。故可以通過檢測Fe2+、LPO以及MDA的含量進(jìn)一步檢測鐵死亡的發(fā)生以及探究鐵死亡對于BVDV復(fù)制水平的影響。Npro是BVDV 開放閱讀框（open reading frame，ORF）編碼的第一個蛋白，具有免疫抑制特性，可以協(xié)助BVDV逃避宿主的免疫監(jiān)控。NS4B為BVDV非結(jié)構(gòu)蛋白，會進(jìn)一步幫助BVDV逃避宿主的固有免疫［19］。故可以通過檢測Npro和NS4B蛋白表達(dá)水平及病毒滴度來檢測鐵死亡對于BVDV復(fù)制水平的影響。本研究中BVDV感染可誘導(dǎo)上述Fe2+以及脂質(zhì)體過氧化水平顯著增強(qiáng)，感染細(xì)胞中上述蛋白表達(dá)水平及病毒滴度顯著增強(qiáng)，明確了BVDV誘導(dǎo)宿主細(xì)胞發(fā)生鐵死亡，且鐵死亡的發(fā)生增強(qiáng)了BVDV的增殖水平。其它研究也表明，輪狀病毒（RV）可通過SLC7A11-AS1/xCT軸觸發(fā)鐵死亡并促進(jìn)自身的復(fù)制［7］。本團(tuán)隊后續(xù)將聚焦BVDV誘導(dǎo)鐵死亡發(fā)生的機(jī)制研究。

鐵死亡發(fā)生伴隨細(xì)胞損傷模式（DAMP）的釋放并促進(jìn)炎性因子的表達(dá)分泌［20］。此外，鐵死亡還受與各種疾病相關(guān)的信號通路的調(diào)節(jié)［21］。例如在 A 型流感病毒（influenza A virus，IAV）與鐵死亡的研究中發(fā)現(xiàn)，IVA可能是通過激活HIF-1α/iNOS/VEGF 信號通路發(fā)揮作用，從而促進(jìn)鐵死亡，促進(jìn)炎性分子分泌［22］；H1N1病毒可以通過NRF2-KEAP1-GCLC信號通路和谷氨酰胺水解誘導(dǎo)hNECs鐵死亡導(dǎo)致鼻黏膜上皮炎癥［23］。本研究中BVDV誘導(dǎo)鐵死亡發(fā)生，同時可見宿主細(xì)胞中促炎性因子IL-18、IL-1β等表達(dá)水平升高，而鐵死亡特異性抑制劑Fer-1預(yù)處理的細(xì)胞在感染BVDV后各炎性細(xì)胞因子的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均較未處理感染組顯著降低，提示鐵死亡發(fā)生可能是BVDV誘導(dǎo)促炎性因子表達(dá)升高的重要途徑。

4" 結(jié)" 論

BVDV感染可引起宿主細(xì)胞線粒體膜密度增加及表面積減少、Fe2+離子增加、LPO和MDA濃度增加最終誘導(dǎo)鐵死亡的發(fā)生，且鐵死亡發(fā)生可顯著促進(jìn)病毒復(fù)制水平以及促炎性細(xì)胞因子表達(dá)。

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（編輯" 范子娟）