收稿日期：2023-12-21

基金項(xiàng)目：河北省高等學(xué)?？茖W(xué)研究項(xiàng)目（ZD2022014）；承德市科技計(jì)劃項(xiàng)目（202304B054）

作者簡介：謝波艷（1998-），女，江蘇南通人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗幱梅N質(zhì)資源分析。（E-mail）1797491496@qq.com

通訊作者：鄭金雙，（E-mail）jinshuangk@163.com

摘要： 本研究以140份北蒼術(shù)種質(zhì)為材料，基于13個(gè)形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行形態(tài)多樣性分析，并利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對其進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果表明，13個(gè)形態(tài)指標(biāo)變異系數(shù)為1.93%～63.11%，其中主莖粗變異系數(shù)最大，花展開度的Shannon-Weiner多樣性指數(shù)最大。主成分分析結(jié)果表明，種子長度、花展開度、主莖粗、株高、主莖與分枝夾角是反映北蒼術(shù)形態(tài)多樣性的主要指標(biāo)?；?3個(gè)形態(tài)指標(biāo)可以將140份北蒼術(shù)種質(zhì)聚為4個(gè)類群。利用篩選出的8對SSR引物擴(kuò)增北蒼術(shù)基因組DNA，根據(jù)特異性條帶將140份北蒼術(shù)種質(zhì)聚為3個(gè)類群。13個(gè)形態(tài)指標(biāo)和3個(gè)遺傳多樣性指標(biāo)間相關(guān)性分析結(jié)果表明，單花結(jié)籽數(shù)與多態(tài)性信息量指數(shù)（PIC）呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）；主莖粗與Nei’s基因多樣性指數(shù)（h）呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。綜上，140份北蒼術(shù)種質(zhì)在形態(tài)指標(biāo)和遺傳多樣性指標(biāo)上均具有豐富的多樣性，且形態(tài)指標(biāo)與遺傳多樣性指標(biāo)間具有一定的相關(guān)性。本研究為北蒼術(shù)種質(zhì)資源鑒定與利用提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 北蒼術(shù)；形態(tài)指標(biāo)；分子標(biāo)記；主成分分析；聚類分析；種質(zhì)多樣性

中圖分類號： S567.21 +1"" 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A"" 文章編號： 000-4440（2024）09-1607-10

Diversity analysis of 40 Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasms based on morphological traits and SSR markers

XIE Boyan KONG Lijing ZHAO Wenjun SU Shuyue ZHANG Sai ZHANG Yubin SUN Chenglong ZHAO Siyuan ZHANG Minghui FAN Shengci XIANG Zengxu ZHENG Jinshuang

（1.College of Agronomy and Biotechnology， Hebei Normal University of Science and Technology/Hebei Provincial Key Laboratory of Crop Stress Biology， Qinhuangdao 066004， China；2.College of Traditional Chinese Medicine， Hebei University， Baoding 071200， China；3.College of Horticulture， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China）

Abstract：" In this study， 40 Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasms were used as the test materials. The morphological diversity of 40 Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasms was analyzed based on 3 morphological indicators， and the genetic diversity was analyzed by SSR molecular markers. The results showed that the variation coefficients of 3 morphological indicators were .93%-63.11%. The variation coefficient of main stem diameter was the largest， and the Shannon-Weiner diversity index of flower spread was the largest. The results of principal component analysis showed that seed length， flower spread， main stem diameter， plant height and angle between main stem and branches were the main indicators reflecting the morphological diversity of Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. Based on 3 morphological indicators， 40 Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasms could be clustered into four groups. The genomic DNA of Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. was amplified with eight pairs of SSR primers， and 40 Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasms were clustered into three groups according to the specific bands. The results of correlation analysis between 3 morphological indicators and three genetic diversity indicators showed that seed number per flower was significantly positive correlated with polymorphic information content （PIC）（P＜0.05）. There was a significantly negative correlation between main stem diameter and Nei’s gene diversity index （h）（P＜0.05）. In conclusion， 40 Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasms had abundant diversity in morphological and genetic diversity indicators， and there was a certain correlation between morphological and genetic diversity indicators. This study provides a theoretical basis for the identification and utilization of Atractylodes chinensis （DC.） Koidz. germplasm resources.

Key words： Atractylodes chinensis （DC.） Koidz.；morphological indicators；molecular markers；principal component analysis；clustering analysis;germplasm diversity

北蒼術(shù)[Atractylodes chinensis （DC.） Koidz.]為菊科蒼術(shù)屬多年生草本植物，其干燥根莖可入藥，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目等功效[1]。隨著蒼術(shù)藥材在保肝[2]、抗腫瘤[3]、鎮(zhèn)痛[4]、抗?jié)僛5]等方面的應(yīng)用，市場需求量逐漸增加，野生北蒼術(shù)資源瀕臨枯竭，近年來，華北和東北地區(qū)北蒼術(shù)人工栽培面積逐年增加[6]。河北省是北蒼術(shù)的道地產(chǎn)區(qū)，北蒼術(shù)已被列入“十大冀藥”[7]。但馴化時(shí)間短，并且北蒼術(shù)屬于異花授粉植物，具有較強(qiáng)的天然混雜特性，其地上部分莖葉特征復(fù)雜多樣[8]，目前尚未形成質(zhì)量穩(wěn)定的優(yōu)良品種。

研究北蒼術(shù)種質(zhì)資源形態(tài)和遺傳的多樣性，對其種質(zhì)資源綜合分析和新品種培育具有十分重要的參考價(jià)值。目前，關(guān)于北蒼術(shù)的研究多集中于藥理藥化[9-10]、種子質(zhì)量[11-12]、種苗繁育與栽培技術(shù)[13-15]、開花結(jié)實(shí)特性[16]、組織培養(yǎng)[17-18]、質(zhì)量評價(jià)與遺傳性狀比較[19-20]等方面。對北蒼術(shù)種質(zhì)資源的研究較少。郭欣慰等[21]分析河北省青龍滿族自治縣北蒼術(shù)葉型，發(fā)現(xiàn)其葉型差異大，葉片有完整型、淺裂型、深裂型，且存在大量淺裂型至深裂型的過渡型；姜雨昕等[22]利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)分析22份不同來源的北蒼術(shù)種質(zhì)資源，發(fā)現(xiàn)其遺傳多樣性豐富；Zhao等[23]基于北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，開發(fā)10對SSR多態(tài)性引物，并用于燕山地區(qū)19個(gè)北蒼術(shù)野生居群遺傳多樣性分析，發(fā)現(xiàn)不同居群間遺傳變異豐富；尹光耀等[24]利用葉綠體基因組開發(fā)2個(gè)特異DNA條形碼，發(fā)現(xiàn)北蒼術(shù)在物種水平上有較高的遺傳多樣性。北蒼術(shù)具有豐富的形態(tài)和遺傳多樣性，從單一指標(biāo)分析種質(zhì)資源較片面。因此，本研究基于形態(tài)指標(biāo)和遺傳指標(biāo)綜合分析140份北蒼術(shù)種質(zhì)資源，為北蒼術(shù)種質(zhì)資源鑒定和優(yōu)良品種選育提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用北蒼術(shù)種子來源于秦皇島市同盛醫(yī)藥有限公司北蒼術(shù)野生資源圃，為天然混合授粉種子，試驗(yàn)地位于河北省秦皇島市青龍滿族自治縣六道河鄉(xiāng)。2017年春，將采集的北蒼術(shù)種子播于河北科技師范學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院綜合試驗(yàn)站，培育野生馴化一代種苗；2018年春，移栽定植，高畦栽培，畦高約20 cm，畦寬約80 cm，每畦雙行種植，行距約30 cm，株距約25 cm，至2020年北蒼術(shù)旺盛生長期，對四年生北蒼術(shù)進(jìn)行地上部分植物學(xué)特征分析，按照莖、葉分化特征，選取140份不同植物學(xué)特征的北蒼術(shù)單株，移栽定植，分別用S1～S140編號，建立種質(zhì)資源圃。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 北蒼術(shù)形態(tài)性狀分析 于2021年4月-2021年10月，分別于旺盛生長期、開花期、結(jié)籽期調(diào)查140份北蒼術(shù)種質(zhì)的13個(gè)形態(tài)指標(biāo)，包括株高、主莖粗、主莖與分枝夾角、花序直徑、花序長度、花開展度、小花數(shù)量、果實(shí)長度、果實(shí)寬度、單花結(jié)籽數(shù)、種子長度、種子寬度、千粒重。

主莖粗：用游標(biāo)卡尺測量主莖基部離地面5 cm處的直徑；主莖與分枝夾角：用量角器測量植株地上部分分枝與主莖之間的夾角；花序直徑：用游標(biāo)卡尺測量頭狀花序最寬部位的直徑；花序長度：用游標(biāo)卡尺測量花序頂端到花軸基部的距離；花開展度：用量角器測量花軸與花朵兩邊邊緣形成的角度；

1.2.2 北蒼術(shù)遺傳多樣性分析 于北蒼術(shù)生長旺盛期，取幼嫩葉片，迅速置于液氮中速凍，-80 ℃保存。利用植物基因組DNA提取試劑盒（北京華越洋生物科技有限公司產(chǎn)品）提取140份北蒼術(shù)種質(zhì)的基因組DNA。參考Zhao等[23]報(bào)道的北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫篩選SSR位點(diǎn)，篩選標(biāo)準(zhǔn)參考李錦超[25]等的方法，利用Primer 5.0設(shè)計(jì)SSR引物，選擇100對引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

利用100對引物擴(kuò)增隨機(jī)選擇的5份北蒼術(shù)種質(zhì)基因組DNA，篩選出清晰、多態(tài)性好的條帶以及對應(yīng)的引物。利用篩選出的SSR引物擴(kuò)增140份北蒼術(shù)種質(zhì)的的基因組DNA。15.0 μL PCR反應(yīng)體系：DNA模板1.0 μL、PAGE Taq PCR Mix （TaKaRa MF047-01） 6.0 μL、10 μmol/L正、反向引物各1.0 μL、ddH2O 6.0 μL。SSR-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性30 s，55 ℃重復(fù)30 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；最終72 ℃延伸10 min。DNA Marker為TaKaRa DL1 000。利用8%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測擴(kuò)增情況。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用Microsoft Excel 2019統(tǒng)計(jì)140份北蒼術(shù)種質(zhì)的13個(gè)形態(tài)指標(biāo)數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值、最大值和最小值。采用SPSS 26.0計(jì)算變異系數(shù)（CV）、Shannon-Weiner多樣性指數(shù)（H），并進(jìn)行主成分分析[26]、聚類分析[27]和相關(guān)性分析[28]。絕對值大于0.5的載荷，可作為該主成分中的主導(dǎo)變量[29]。

根據(jù)SSR擴(kuò)增結(jié)果，構(gòu)建（0，1）矩陣，有條帶記為“1”，無條帶記為“0”，利用POPGENE 32軟件計(jì)算遺傳多樣性指標(biāo)：Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（h）和Shannon’s多樣性指數(shù)（I）；利用PIC-CALC軟件計(jì)算多態(tài)信息量（PIC）；通過NTSYS 2.1的非加權(quán)組平均法（UPGMA）計(jì)算遺傳相似系數(shù)，并利用MEGA軟件構(gòu)建遺傳多樣性聚類圖；利用Origin 2021軟件分析形態(tài)指標(biāo)和遺傳指標(biāo)的相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 北蒼術(shù)種質(zhì)的形態(tài)多樣性分析

2.1.1 形態(tài)指標(biāo)的變異分析 如表1所示，140份北蒼術(shù)種質(zhì)的13個(gè)形態(tài)指標(biāo)的變異系數(shù)為1.93%～63.11%，其中千粒重的變異系數(shù)最小，為1.93%，主莖粗的變異系數(shù)最大，為63.11%。13個(gè)形態(tài)指標(biāo)變異系數(shù)由大到小依次為主莖粗＞單花結(jié)籽數(shù)＞花序直徑＞果實(shí)寬度＞小花數(shù)量＞主莖與分枝夾角＞株高＞花序長度＞花展開度＞種子寬度＞果實(shí)長度＞種子長度＞千粒重。種子長度的Shannon-Weiner多樣性指數(shù)最小為1.03，花展開度的Shannon-Weiner多樣性指數(shù)最大為2.08，13個(gè)形態(tài)指標(biāo)的Shannon-Weiner多樣性指數(shù)由大到小依次為花展開度＞果實(shí)長度＞果實(shí)寬度＞株高＞千粒重＞種子寬度＞花序長度＞主莖粗＞單花結(jié)籽數(shù)＞小花數(shù)量＞主莖與分枝夾角＞花序直徑＞種子長度。

2.1.2 3個(gè)形態(tài)指標(biāo)的主成分分析 如表2所示，對140份北蒼術(shù)種質(zhì)的13個(gè)形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行主成分分析，提取特征值大于1的特征向量作為主成分，共獲得5個(gè)主成分，累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)76.800%，包含了形態(tài)指標(biāo)的絕大部分信息。第1主成分特征值為4.313，貢獻(xiàn)率為33.176%，其中千粒重、花序直徑、花展開度、種子長度、種子寬度、果實(shí)長度、果實(shí)寬度、花序長度和單花結(jié)籽數(shù)的載荷值的絕對值大于0.5，說明主成分1主要受這9個(gè)形態(tài)指標(biāo)影響，其中種子長度的正向載荷值最大。第2主成分特征值為2.083，貢獻(xiàn)率為16.020%，僅花展開度的載荷值的絕對值大于0.5，說明主成分2主要受花展開度影響。第3主成分特征值為1.359，貢獻(xiàn)率為10.456%，主莖粗和主莖與分枝夾角載荷值的絕對值大于0.5，說明主成分3主要受這2個(gè)指標(biāo)影響，其中主莖粗載荷值最大。第4主成分特征值為1.222，貢獻(xiàn)率為9.403%，僅株高載荷值的絕對值大于0.5，說明主成分4主要受株高影響。第5主成分特征值為1.007，貢獻(xiàn)率為7.745%，主莖與分枝夾角的載荷值大于0.5，說明主成分5主要受主莖與分枝夾角影響。綜上，北蒼術(shù)種質(zhì)間形態(tài)指標(biāo)差異主要體現(xiàn)在種子長度、花展開度、主莖粗、株高、主莖與分枝夾角上。

2.1.3 基于13個(gè)形態(tài)指標(biāo)的北蒼術(shù)種質(zhì)聚類分析 基于13個(gè)形態(tài)指標(biāo)數(shù)據(jù)，利用SPSS26.0軟件對140份北蒼術(shù)種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，在歐式距離為12.5處，北蒼術(shù)種質(zhì)聚為4個(gè)類群（圖1）。第Ⅰ類群包括1份種質(zhì)，為S83，該類群的種質(zhì)花冠長度、小花數(shù)量和單花結(jié)籽數(shù)均低于平均值；第Ⅱ類群包括5份種質(zhì)，該類群的種質(zhì)果實(shí)寬度、花展開度和花序長度均大于平均值；第Ⅲ類共23份種質(zhì)，該類群的種質(zhì)植株高、種子長度、果實(shí)長度、主莖與分枝夾角均較大；第Ⅳ類包括108份種質(zhì)，該類群的種質(zhì)主莖粗、花序直徑、種子寬度均大于平均值。

2.2 北蒼術(shù)種質(zhì)的遺傳多樣性分析

從北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選出100對SSR引物，經(jīng)過有效性驗(yàn)證和多態(tài)性驗(yàn)證，獲得8對核心引物（表3）。

引物篩選標(biāo)準(zhǔn)為在不同種質(zhì)間能夠擴(kuò)增出差異性條帶，且擴(kuò)增出的差異條帶清晰、重復(fù)性好。如圖2所示，利用Bcz99引物一共擴(kuò)增出11條條帶，其中8條存在多態(tài)性。

利用表4中的8對引物對140份北蒼術(shù)種質(zhì)基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出86條條帶，其中79條條帶存在多態(tài)性，多態(tài)率達(dá)92.42%（表4）。不同引物擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶的數(shù)量差異較大，其中Bcz21和Bcz76擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶最多，為13條；Bcz53擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶最少，為7條。8對引物擴(kuò)增得到的片段大小為100～1 000 bp，Nei’s基因多樣性指數(shù)為0.24～0.39，Shannon’s信息指數(shù)為0.37～0.56，多態(tài)性信息量指數(shù)均大于0.5，說明這8對引物具有較高的多態(tài)性，可用于分析140份北蒼術(shù)種質(zhì)的遺傳多樣性。

利用8對引物擴(kuò)增出清晰、多態(tài)性好的條帶，采用UPGMA法對140份北蒼術(shù)種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，在遺傳相似系數(shù)為0.06時(shí)，北蒼術(shù)種質(zhì)被分為3個(gè)類群（圖3）。第Ⅰ類群包含7份北蒼術(shù)種質(zhì)，此類群內(nèi)的北蒼術(shù)種質(zhì)遺傳距離較近，形態(tài)指標(biāo)上表現(xiàn)為植株高大、單花結(jié)籽數(shù)多、種子長度和種子寬度較大；第Ⅱ類群又分為3個(gè)亞群（圖中用Ⅱ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3、Ⅱ-4表示），共133份種質(zhì)，其中Ⅱ-1亞群包含28份種質(zhì)；Ⅱ-2亞群包含8份種質(zhì)；Ⅱ-3亞群包含20份種質(zhì)；Ⅱ-4亞群包含24份種質(zhì)。第Ⅱ類群內(nèi)的種質(zhì)在遺傳距離上較遠(yuǎn)，出現(xiàn)了明顯的分化，主莖與分枝夾角、花展開度較小，種子較小，單花結(jié)籽數(shù)少。第Ⅲ類群包含53份種質(zhì)，種質(zhì)親緣關(guān)系較近，表現(xiàn)為主莖較粗，果實(shí)長度和果實(shí)寬度較小，花展開度大，花序直徑大。

2.3 北蒼術(shù)形態(tài)指標(biāo)和遺傳多樣性指標(biāo)的相關(guān)性分析

綜合分析發(fā)現(xiàn)，形態(tài)聚類與遺傳聚類一致的種質(zhì)共42份，分別為S57、S2、S88、S12、S84、S51、S10、S44、S37、S35、S82、S65、S67、S66、S138、S78、S45、S85、S104、S56、S42、S72、S36、S113、S89、S75、S58、S62、S118、S125、S49、S76、S46、S132、S116、S51、S103、S92、S110、S109、S117、S120。

為進(jìn)一步了解140份北蒼術(shù)種質(zhì)形態(tài)性狀與遺傳多樣性間的關(guān)系，將13個(gè)形態(tài)指標(biāo)與3個(gè)遺傳多樣性指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。由表5可知，多態(tài)性信息量指數(shù)與單花結(jié)籽數(shù)呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），與花序直徑、花序長度和果實(shí)寬度、主莖與分枝夾角、小花數(shù)量、果實(shí)長度和種子長度呈正相關(guān)。多態(tài)性信息量指數(shù)與種子寬度、千粒重和主莖粗呈負(fù)相關(guān)；Shannon’s信息指數(shù)與花序長度、果實(shí)長度、單花結(jié)籽數(shù)、種子長度和千粒重呈正相關(guān)，與種子寬度、株高、主莖粗、花序直徑、小花數(shù)量和果實(shí)寬度呈負(fù)相關(guān)；Nei’s遺傳多樣性指數(shù)與主莖粗呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與株高和種子寬度呈負(fù)相關(guān)，與花序長度和結(jié)籽數(shù)呈正相關(guān)。

3 討論

形態(tài)指標(biāo)是植物分類的重要依據(jù)，也是評價(jià)種質(zhì)資源多樣性的重要標(biāo)志。陳慧玲[30]等分析發(fā)現(xiàn)16份野生山桐子種質(zhì)資源葉片的7個(gè)形態(tài)指標(biāo)的變異系數(shù)為1.84%～40.54%，表明山桐子葉片的7個(gè)形態(tài)指標(biāo)存在明顯差異。本研究中，140份北蒼術(shù)種質(zhì)13個(gè)形態(tài)指標(biāo)的變異系數(shù)為15.43%～63.62%。蒼術(shù)種質(zhì)形態(tài)的多樣性主要體現(xiàn)在種子長度、花展開度、主莖粗、株高、主莖與分枝角度，這與劉庭付等[31]和張茹等[32]的結(jié)果相似。劉庭付等[31]發(fā)現(xiàn)，6份野生豆腐柴種質(zhì)資源的6個(gè)葉片形態(tài)指標(biāo)中，葉片長度可以作為區(qū)分不同豆腐柴種質(zhì)資源的重要指標(biāo)。張茹等[32]對42份遠(yuǎn)志種質(zhì)資源的12個(gè)形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行主成分分析，發(fā)現(xiàn)莖分支、葉色、花色、根重、株高等形態(tài)指標(biāo)可以反映其形態(tài)多樣性。

利用植物形態(tài)指標(biāo)分析種質(zhì)資源具有直觀、易識別等優(yōu)點(diǎn)，但易受環(huán)境影響，SSR分子標(biāo)記具有不易受環(huán)境影響、穩(wěn)定性高、試驗(yàn)方法相對簡單、共顯性等優(yōu)勢，適用于植物種內(nèi)遺傳多樣性分析。利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行種質(zhì)資源遺傳多樣性分析已在枸杞[33]、杜仲 [34]、山茱萸[35]等藥用植物上廣泛應(yīng)用。在基于SSR分子標(biāo)記的北蒼術(shù)遺傳多樣性分析方面，僅見Zhao等[23]基于北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫分析燕山地區(qū)19個(gè)野生居群北蒼術(shù)種質(zhì)資源遺傳多樣性，發(fā)現(xiàn)北蒼術(shù)不同居群間遺傳變異豐富。但是目前還沒有關(guān)于同一居群不同種質(zhì)間遺傳多樣性的研究。

種質(zhì)資源是藥用植物遺傳育種的基礎(chǔ)，通過形態(tài)標(biāo)記和SSR分子標(biāo)記綜合分析北蒼術(shù)種質(zhì)資源，有利于加快優(yōu)良種質(zhì)的發(fā)掘，推動北蒼術(shù)種質(zhì)資源鑒定和良種培育工作。北蒼術(shù)種質(zhì)資源混雜，形態(tài)指標(biāo)一定程度上可以反映植物遺傳變異情況，但植物形態(tài)是由基因和環(huán)境共同決定的[36-38]。本研究發(fā)現(xiàn)，分別基于形態(tài)指標(biāo)和分子標(biāo)記的140份北蒼術(shù)種質(zhì)聚類結(jié)果大多不一致，其中基于形態(tài)指標(biāo)和基于分子標(biāo)記聚類結(jié)果一致的種質(zhì)僅42份。宋江琴等[39]也發(fā)現(xiàn)，將9個(gè)萬壽菊雄性不育兩用系分別基于9個(gè)形態(tài)指標(biāo)聚類和基于分子標(biāo)記聚類，其中6份材料基于形態(tài)指標(biāo)聚類和基于分子標(biāo)記聚類結(jié)果一致，其余材料聚類不一致。聚類結(jié)果不一致可能是由于北蒼術(shù)異花授粉的植物特性，北蒼術(shù)有雌花和兩性花兩種類型，且自交不結(jié)實(shí)[40]。聚類結(jié)果還可能受所篩選SSR引物的數(shù)量和種類影響。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)種子長度、花展開度、主莖粗、株高、主莖與分枝夾角是反映北蒼術(shù)多樣性的主要形態(tài)指標(biāo)。基于北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，篩選出8對多態(tài)性引物，多態(tài)性信息量指數(shù)為0.82～0.92，表明篩選出的引物可以有效區(qū)分北蒼術(shù)種質(zhì)；Nei’s遺傳多樣性指數(shù)為0.24～0.39，Shannon’s多樣性指數(shù)為0.37～0.56，說明140份北蒼術(shù)種質(zhì)遺傳多樣性豐富。本研究基于形態(tài)指標(biāo)和SSR分子標(biāo)記綜合分析北蒼術(shù)種質(zhì)，為北蒼術(shù)種質(zhì)資源評價(jià)、鑒定及良種培育提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

[2] 塔西斯，張 潔，杭永付，等. 北蒼術(shù)炮制前后水提液和多糖部位保肝部位作用比較研究[J]. 現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2011，25（3）：45-47.

[3] 許 靜，孟利娜，南 楠，等. 北蒼術(shù)多糖的酶法輔助超聲提取工藝的優(yōu)化及其體外抗腫瘤活性研究[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床，2014，29（3）：231-233.

[4] 李涵秋，杜靖艷，滿孜拉·吐達(dá)吉，等. 基于HPLC優(yōu)化北蒼術(shù)三種藥用成分提取及測定方法[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2023，39（11）：43-49.

[5] HODDEVIK E H， KHAN F H， RAHMANI S. Factors determining the density of AQP4 water channel molecules at the brain blood interface[J]. Brain Structure amp; Function，2017，222（4）：1753-1766.

[6] 李 涵，金香環(huán)，趙百慧，等. 北蒼術(shù)的化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[J]. 吉林農(nóng)業(yè)，2019（3）：72-73.

[7] 李國英. 道地好藥材——青龍北蒼術(shù)栽培技術(shù)[J]. 河北農(nóng)業(yè)，2022（6）：30-31.

[8] 于學(xué)霖，賈 琳，尹海波，等. 遼寧省北蒼術(shù)生態(tài)適宜性和品質(zhì)區(qū)劃研究[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志，2023，30（8）：1-7.

[9] 姜雨昕，姜大成，翁麗麗，等. 北蒼術(shù)種子的萌發(fā)特性及其生態(tài)適應(yīng)性研究[J]. 種子，2020，39（8）：158-163.

[10]LIU Y Q， ZHANG B X， CAI Q. Study on the pharmacodynamics and metabolomics of five medicinal species in Atractylodes DC. on rats with rheumatoid arthritis[J]. Biomedicine amp; Pharmacotherapy，2020，131：110554.

[11]孫 金，翁麗麗，肖春萍，等. HPLC一測多評法結(jié)合色差原理分析不同生長年限北蒼術(shù)藥材的質(zhì)量[J]. 中國藥房，2020，31（11）：1314-1319.

[12]SHAKEEL A， ZHAN C S， YANG Y Y， et al. The transcript profile of a traditional Chinese medicine，Atractylodes lancea，revealing it’s sesquiterpenoid biosynthesis of the major active components[J]. PLoS One，2016，11（3）：e0151975.

[13]SHIMATO Y， OTA M， ASAI K， et al. Comparison of byakujutsu （Atractylodes rhizome） and sojutsu （Atractylodes lancea rhizome） on anti-inflammatory and immu-nostimulative effects in vitro[J]. Journal of Natural Medicines，2018，72（1）：192-201.

[14]姜雨昕，曾行調(diào)，種湘歌，等. 不同因素對北蒼術(shù)種子育苗的影響[J]. 人參研究，2023，35（2）：47-51.

[15]鄭金雙，王文頗，李彥生. 溫度與基質(zhì)含水量對北蒼術(shù)種子萌發(fā)及幼苗形態(tài)建成的影響[J]. 中藥材，2018，41（6）：1282-1284.

[16]REN C G， DAI C C. Jasmonic acid is involved in the signaling pathway for fungal endo-phyte induced volatile oil accumulation of Atractylodes chinensis [J]. BMC Plant Biology，2012，12（1）：128.

[17]詹 鑫，劉春蓮，王 燕，等. 基于能量代謝與燥性相關(guān)性考察茅蒼術(shù)、北蒼術(shù)藥性差異[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2022，28（19）：139-147.

[18]趙 楷，姚 杰，于鵬程，等. 干旱提高北蒼術(shù)藥材質(zhì)量的生物學(xué)機(jī)制[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2023，29（13）：180-187.

[19]左靜靜，劉少翔，閆貴云，等. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化北蒼術(shù)組織培養(yǎng)研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2017，33（11）：21-24.

[20]張煒坤，趙 恢，張小芳，等. 北蒼術(shù)組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究[J]. 種子，2018，37（12）：136-139.

[21]郭欣慰，喬 旭，李艾蓮. 河北省青龍地區(qū)北蒼術(shù)葉型變異模式初探[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021，25（3）：76-80.

[22]姜雨昕，肖春萍，孫 金，等. 基于ISSR標(biāo)記的北蒼術(shù)種質(zhì)資源親緣關(guān)系分析[J]. 種子，2021，12（40）：32-38.

[23]ZHAO J H， SUN C Z， SHI F Y， et al. Comparative transcriptome analysis reveals sesquiterpenoid biosynthesis among -，2-and 3-year old Atractylodes chinensis [J]. BMC Plant Biology，2021，21：354.

[24]尹光耀，袁 林，王 馨，等. 北蒼術(shù)特異性DNA條形碼篩選、種質(zhì)資源鑒定及遺傳多樣性分析[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，2023，58（6）：1693-1704.

[25]李錦超，董俊美，賈凱旋，等. 基于山藥轉(zhuǎn)錄組測序的EST-SSR信息分析及分子標(biāo)記開發(fā)[J/OL]. 分子植物育種. http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.s.20221017.1120.008.html.

[26]魯 云，洪婉敏，姚曉璇，等. 麩炒北蒼術(shù)飲片粉末的色度值與質(zhì)量指標(biāo)的相關(guān)性分析及其炮制時(shí)間研究[J]. 中國藥房，2021，32（21）：2605-2612.

[27]趙艷云，張建云，鄭開顏，等. 不同產(chǎn)地北蒼術(shù)化學(xué)模式識別及4種成分一測多評法的建立[J]. 中國中藥雜志，2022，47 （16）：4395-4402.

[28]馮佳鑫，吳玉柱，李思雨，等. 基于色差原理分析茅蒼術(shù)、北蒼術(shù)有效成分含量與顏色的相關(guān)性[J]. 中國中藥雜志，2023，48（8）：2086-2091.

[29]趙慧琴. 數(shù)據(jù)處理技術(shù)與SPSS實(shí)驗(yàn)教程[M]. 廣州：華南理工大學(xué)出版社，2016.

[30]陳慧玲，劉 華，黃國偉，等. 湖北16個(gè)山桐子野生資源分布區(qū)葉片形態(tài)多樣性分[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2023，39（5）：63-68.

[31]劉庭付，周大云，繆葉旻子. 麗水市野生豆腐柴葉片形態(tài)多樣性研究[J]. 中國野生植物資源，2023，42（2）：45-50.

[32]張 茹，吳昌娟，張麗君，等. 基于形態(tài)性狀和指標(biāo)成分的遠(yuǎn)志遺傳多樣性分析及綜合評價(jià)[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào)，2022，36（12）：2381-2390.

[33]尹 躍，安 巍，趙建華，等. 黑果枸杞轉(zhuǎn)錄組SSR信息分析及分子標(biāo)記開發(fā)[J]. 浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，36（2）：215-221.

[34]黃海燕，杜紅巖，烏云塔娜，等. 基于杜仲轉(zhuǎn)錄組序列的SSR分子標(biāo)記的開發(fā)[J]. 林業(yè)科學(xué)，2013，49（5）：176-181.

[35]楊麗麗，董 浩，陸 陽，等. 基于轉(zhuǎn)錄組測序的山茱萸SSR分子標(biāo)記開發(fā)[J/OL]. 分子植物育種. http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S.20230331.1012.006.html.

[36]XU H， LIU M G， DONG S J， et al. Diversity and geographical variations of germplasm resources of Armeniaca mandshurica[J]. Chinese Journal of Plant Ecology，2019，43（7）：585-600.

[37]李長紅，許海濤，孫聯(lián)合. 夏玉米形態(tài)指標(biāo)、氮肥利用及抗倒特性對密度與氮肥耦合效應(yīng)的響應(yīng)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（11）：63-70.

[38]陳文杰，陳 淵，韋清源，等. 南方大豆皺葉發(fā)生時(shí)葉片形態(tài)變化及其對產(chǎn)量性狀的影響 [J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2022，53（2）：460-468.

[39]宋江琴，唐 楠，唐道城，等. 基于表型性狀和SSR標(biāo)記的9份萬壽菊種質(zhì)遺傳多樣性分析[J]. 種子，2021，40（10）：6-11，19.

[40]王秋玲，郭 旭，劉福清，等. 北蒼術(shù)開花結(jié)實(shí)特性觀察及種子分級研究[J]. 中國現(xiàn)代中藥，2015，17（6）：568-571.

（責(zé)任編輯：成紓寒）