摘 要：目的：建立改進的QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析牛奶中麥草畏及代謝物殘留的檢測方法。方法：樣品采用乙腈-0.1%乙酸的混合溶液提取，無水硫酸鎂和C18凈化，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的MRM模式進行測定。結(jié)果：在2.0～500.0 μg·L-1，3，6-二氯水楊酸和麥草畏的線性相關(guān)系數(shù)分別為

0.996 0和0.999 0，回收率分別為76.1%～98.5%和82.1%～103.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.3%～7.3%和5.4%～8.6%，定量限為10 μg·kg-1。結(jié)論：該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，適用于牛奶中麥草畏農(nóng)藥殘留的檢測。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；牛奶；麥草畏

Determination of Dicamla and Its Metabolite Residues in Milk with Modified QuEChERS-HPLC-MS/MS

BAI Guotao， MA Caixia， REN Caixia， ZHANG Hui， CHEN Limei， WANG Jing

（Hohhot Customs Technical Centre， Hohhot 010020， China）

Abstract： Objective： To establish an improved QuEChERS high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of dicamla and its metabolites in milk. Method： The samples were extracted with mixed solution of acetonitrile and 0.1% acetic acid， purified by anhydrous magnesium sulfate and C18， and determined by MRM mode of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometer. Result： The linear correlation coefficients of dichlorosalicylic acid and trivaloba in 2.0～500.0 μg·L-1， 3，6-dichlorosalicylic acid and trivaloba were 0.996 0 and 0.999 0， respectively. The recoveries were 76.1%～98.5% and 82.1%～103.9%， and relative standard deviation were 5.3%～7.3% and 5.4%～8.6%， respectively. The limit of quantification was 10 μg·kg-1. Conclusion： The method is simple and accurate， and suitable for the determination of dicamla pesticide residues of dicamba in milk.

Keywords： high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; milk; dicamla

麥草畏屬安息香酸類除草劑，由美國威爾斯科爾化學(xué)公司研發(fā)[1]，適用于高粱和玉米等作物輪作中闊葉雜草的防治[2]。GONZALEZ等[3]通過對人類淋巴細胞進行體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，一定濃度的麥草畏可能會導(dǎo)致細胞中毒和干擾細胞循環(huán)進程。《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規(guī)定，麥草畏在動物源性食品中的殘留物為麥草畏和3，6-二氯水楊酸之和，牛奶中的最大殘留限量為0.2 mg·kg-1[4]。

麥草畏測定方法主要包括氣相色譜法[5]、氣相色譜-質(zhì)譜法[6-7]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8]、液相色譜法[9]和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法[10-14]等。采用氣相色譜檢測，前處理過程需要衍生化處理，液相色譜不適用于確證檢測，而應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行測定，有前處理簡便、定量限低、測試時間短等優(yōu)點。牟仁祥等[10]建立了稻米中13種苯氧羧酸類除草劑殘留檢測方法，樣品經(jīng)乙腈提取，鹽酸酸化，SCX陽離子吸附劑分散固相萃取凈化，方法檢出限達0.01 mg·kg-1；王可等[11]建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定嬰幼兒谷物食品中苯氧羧酸類除草劑殘留檢測方法，采用2%甲酸的乙腈溶液提取，以PSA和MgSO4凈化，方法定量限為8.1 μg·kg-1；張立佳等[12]建立了牛乳中麥草畏殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法，樣品通過0.5%甲酸的乙腈溶液提取，氯化鈉鹽析，方法定量限為10 μg·kg-1。這些方法均未包含麥草畏代謝物3，6-二氯水楊酸。本方法采用QuEChERS結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立了牛奶中麥草畏及其代謝物農(nóng)藥殘留的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

麥草畏、3，6-二氯水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品，純度均大于97.0%，阿爾塔科技公司；乙腈（色譜純），美國Fisher公司；甲酸（分析純），J.T.Baker公司；冰乙酸（分析純），天津市天大化工實驗廠；氯化鈉、無水硫酸鎂（分析純），福晨（天津）化學(xué)試劑有限公司；C18填料（粒徑40～63 μm），上海安普實驗科技股份公司。

Agilent 6495型液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀，配ESI源，美國安捷倫科技公司；渦旋振蕩器，日本EYELA公司；Thermo超純水發(fā)生器，美國Thermo Fisher公司；3K-15冷凍離心機，德國SIGMA公司。

1.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2 g牛奶（精確至0.01 g）樣品，置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL含0.1%乙酸的乙腈溶液，渦旋振蕩提取10 min后，再加入2 g氯化鈉，振蕩混勻5 min，在4 ℃條件下10 000 r·min-1離心5 min。在10 mL離心管中分別加入C18填料150 mg、無水硫酸鎂250 mg，再加入2 mL上清液，渦旋振蕩凈化2 min，在4 ℃條件下5 000 r·min-1離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜，待高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.3 LC-MS/MS檢測條件

（1）色譜條件。色譜柱：Agilent SB C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫箱溫度：35 ℃；進樣量：5.0 μL。流動相及線性洗脫梯度見表1。

（2）質(zhì)譜條件。采用電噴霧離子源的負離子模式測定；離子源溫度：250 ℃；去溶劑氣溫度：350 ℃；去溶劑氣流量：11.0 L·min-1；四極桿溫度：100 ℃。質(zhì)譜參數(shù)見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本文分別對3，6-二氯水楊酸和麥草畏標(biāo)準(zhǔn)溶液進行母離子正、負離子模式掃描，發(fā)現(xiàn)麥草畏、3，6-二氯水楊酸在負模式下均有較好的響應(yīng)，正模式響應(yīng)較差。麥草畏的二級碎片離子為m/z 175.0，其他離子響應(yīng)較??；3，6二氯水楊酸的二級碎片離子為m/z 160.9和125.0，且m/z 160.9的響應(yīng)值較高且穩(wěn)定，因此選擇204.9/160.9為定量離子對。

2.2 提取條件的優(yōu)化

本文考察了乙腈、甲醇對麥草畏及其代謝物在牛奶基質(zhì)中的提取效果。結(jié)果表明，用甲醇進行提取時，基質(zhì)的沉降蛋白效果較差，用乙腈提取時，基質(zhì)的蛋白沉降較充分。此外，在樣品的提取體系中加入適量的酸可抑制羧酸類化合物的解離，增加有機相中的溶解度[10]。而負離子模式下，過多的酸會影響檢測靈敏度。故本文采用含0.1%乙酸的乙腈溶液進行提取，且麥草畏和3，6-二氯水楊酸的回收率均在85%以上。

2.3 線性范圍、相關(guān)系數(shù)、定量限和基質(zhì)效應(yīng)

采用空白牛奶基質(zhì)溶液分別配制2.0 μg·mL-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1、50.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1、250.0 μg·L-1和500.0 μg·L-1的麥草畏及3，6-二氯水楊酸溶液，并用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行分析。在上述測定條件下，以3，6-二氯水楊酸和麥草畏定量離子的色譜峰面積（Y）和相應(yīng)的質(zhì)量濃度（X）建立校準(zhǔn)曲線。在2.0～500.0 μg·L-1，3，6-二氯水楊酸和麥草畏的線性相關(guān)系數(shù)分別為0.996 0和0.999 0。以10倍信噪比（S/N）得出麥草畏及3，6-二氯水楊酸在牛奶中的定量限均為10 μg·kg-1，結(jié)果詳見表3。

用體積分數(shù)為1∶9的乙腈和0.1%甲酸水溶液配制2.3相同濃度的麥草畏及3，6-二氯水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析，按照基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線斜率與純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值評估基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明，麥草畏的基質(zhì)效應(yīng)為106%，3，6-二氯水楊酸的基質(zhì)效應(yīng)為90.8%。兩者的基質(zhì)效應(yīng)不明顯，可以采用溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液進行定量。

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度

向空白牛奶樣品中分別添加10 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1的麥草畏及3，6-二氯水楊酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，每個水平重復(fù)測定6次，按照1.2和1.3進行樣品前處理以及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，計算回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表4可知，3，6-二氯水楊酸的回收率為76.1%～98.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.3%～7.3%，麥草畏的回收率為82.1%～103.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.4%～8.6%。

2.5 實際樣品測定

按照本方法對市售的20批次牛奶樣品進行麥草畏及3，6-二氯水楊酸測定。結(jié)果表明，20批次樣品均未檢出麥草畏及3，6-二氯水楊酸。

3 結(jié)論

本文采用改進的QuEChERS前處理方法，建立了測定牛奶中麥草畏及3，6-二氯水楊酸農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法的凈化效果優(yōu)、重復(fù)性好、靈敏度高，適用于牛奶中麥草畏及3，6-二氯水楊酸的測定，具有廣泛的適用性。

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