摘 要：目的：對肉蓯蓉配方茶中總黃酮、總多酚、總多糖、總皂苷含量進行檢測，為配方茶的質量控制及抗疲勞物質的基礎研究提供實驗依據(jù)。方法：用紫外可見分光光度法測定肉蓯蓉配方茶中總黃酮、總多酚、總多糖、總皂苷的含量。結果：肉蓯蓉配方茶中總黃酮、總多酚、總多糖及總皂苷的含量分別為8.23%～8.75%、9.30%～9.67%、1.20%～1.58%、1.87%～2.86%。結論：肉蓯蓉配方茶中主要成分為黃酮類及多酚類，皂苷及多糖含量較少。

關鍵詞：肉蓯蓉配方茶；總黃酮；總多酚；總多糖；總皂苷；紫外分光光度法

Determination of Total Flavonoids， Total Polyphenols， Total Polysaccharides and Total Saponins in Cistanche deserticola Formula Tea by Ultraviolet-Visible Spectrophotometry

YAN Luomei1，2， Zakiyagul Gujahmat2， HAO Juan2， HU Shixian2， LIU Xuanlin3， Mourboul Ablise1*

（1.College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830000， China;

2.Xinjiang Huachun Biological Pharmaceutical Co.， Ltd.， Urumqi 830000， China;

3.Xinjiang Uygur Autonomous Region Pharmaceutical Research Institute， Urumqi 830000， China）

Abstract： Objective： To detect the contents of total flavonoids， total polyphenols， total polysaccharides and total saponins in Cistanche deserticola formula tea， so as to provide experimental basis for the quality control of tea and the basic research of anti-fatigue substances. Method： The contents of total flavonoids， total polyphenols， total polysaccharides and total saponins in Cistanche deserticola formula tea were determined by ultraviolet-visible spectrophotometry （UV-Vis）. Result： The contents of total flavonoids， total polyphenols， total polysaccharides and total saponins in Cistanche deserticola formula tea were 8.23%～8.75%， 9.30%～9.67%， 1.20%～1.58% and 1.87%～2.86%， respectively. Conclusion： The main components of Cistanche deserticola formula tea are flavonoids and polyphenols， and the contents of saponins and polysaccharides are relatively low.

Keywords： Cistanche deserticola formula tea; total flavonoids; total polyphenols; total polysaccharides; total saponins; ultraviolet-visible spectrophotometry

肉蓯蓉配方茶是以肉蓯蓉、淫羊藿、刺五加、紅棗和正山小種為原料制成的具有抗疲勞效果的保健食品。研究表明，肉蓯蓉配方茶原料中含有較多潛在的抗疲勞成分，如肉蓯蓉、淫羊藿、紅茶中的多糖類、皂苷類、多酚類和黃酮類物質，可通過調節(jié)代謝、抗氧化作用、神經保護等方式延緩外周及中樞疲勞、減少自由基過度積累而起到抗疲勞作

用[1-4]。因此，明確肉蓯蓉配方茶中黃酮類、皂苷類、多糖類和多酚類的含量，對于確定發(fā)揮抗疲勞作用的主成分，進而對產品進行精準質量控制，以及進一步研究可能的抗疲勞機制具有十分重要的意義。本研究采用紫外分光光度法對肉蓯蓉配方茶中總黃酮、總多酚、總多糖和總皂苷的含量進行測定與分析，為產品質量控制提供實驗依據(jù)，也為配方茶的相關研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

肉蓯蓉配方茶（批號：20220321、20220322、20220323），新疆華春生物藥業(yè)股份有限公司產品。

蘆丁標準品（批號：100080-202012）、沒食子酸標準品（批號：110831-201906）、D-無水葡萄糖（批號：110833-202109）、紫丁香苷（批號：111574-202106），均購于中國食品藥品檢定研究院；濃硫酸（分析純），購于四川西隴科學有限公司；高氯酸（分析純），購于上海桃浦化工廠；甲醇、乙醇、乙醚、冰乙酸和苯酚（分析純），均購于天津市致遠化學試劑有限公司；福林酚（生物技術級），購于上海麥克林生化有限公司；亞硝酸鈉、香草醛、氫氧化鈉和碳酸鈉，均購于天津北聯(lián)精細化工有限公司；硝酸鋁，購于天津市致遠化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

UV-2700型紫外可見分光光度計（島津）、JB5374-91分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、HH-S4型電熱恒溫水浴鍋（上海齊欣科學儀器有限公司）、KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、Neofuge 15R低溫高速離心機（上海利康儀器有限公司）和SB-100型旋蒸蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）。

1.3 對照品溶液的制備

1.3.1 蘆丁溶液制備

精密稱取蘆丁對照品0.100 0 g，置于100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，超聲溶解，得1 mg·mL-1的蘆丁貯備液。精密移取1 mg·mL-1的蘆丁標準品溶液10 mL置于50 mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，得200 μg·mL-1的蘆丁標準品溶液（總黃酮對照品溶液），以備顯色。

1.3.2 沒食子酸溶液制備

精密稱取0.009 3 g沒食子酸標準品置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得93 μg·mL-1的沒食子酸標準品溶液。精密移取5 mL沒食子酸標準品溶液置于25 mL容量瓶中，蒸餾水定容至刻度，得18.6 μg·mL-1的沒食子酸標準品溶液（總多酚對照品溶液），以備顯色。

1.3.3 D-葡萄糖溶液制備

精密稱取D-無水葡萄糖對照品0.010 25 g，加水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得102.5 μg·mL-1的D-葡萄糖標準品溶液（總多糖對照品溶液），以備顯色。

1.3.4 紫丁香苷溶液制備

精密稱取紫丁香苷對照品0.010 05 g，加甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，得1 005 μg·mL-1的紫丁香苷標準品溶液（總皂苷對照品溶液），以備顯色。

1.4 供試品溶液的制備

1.4.1 總黃酮及總多酚樣品溶液制備

精密稱取肉蓯蓉配方茶約0.25 g，每批次3份（20220321、20220322、20220323），共9份，置于50 mL容量瓶中，加入20 mL 70%乙醇超聲20 min，移取上清液置于100 mL容量瓶中，重復超聲5次，合并上清液冷卻后，用70%乙醇定容至刻度，即得供試品溶液，以備顯色。

1.4.2 總多糖樣品溶液制備

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0 g，每批次3份（20220321、20220322、20220323），共9份，分別置于100 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水15 mL，100 ℃回流提取1 h，放至室溫，用脫脂棉過濾到離心管中，并加入無水乙醇至溶液乙醇體積分數(shù)為65%，搖勻，置于4 ℃冰箱靜置過夜（12 h）。第2天，對提取溶液3 000 r·min-1離心10 min，棄去上清液，加入5 mL的65%乙醇溶液洗滌沉淀，以上操作重復3次，離心后留下的沉淀物加水使其溶解并定容到100 mL容量瓶中，即得實驗樣品溶液，以備顯色。

1.4.3 總皂苷樣品溶液制備

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0 g，每批次3份（20220321、20220322、20220323），共9份，分別置于100 mL圓底燒瓶中，加入50 mL 75%乙醇在80 ℃下回流提取2次，每次1 h。冷卻后在5 000 r·min-1下離心10 min，合并提取液，將離心上清液收集后在旋轉蒸發(fā)儀上濃縮至干，濃縮物加蒸餾水定容至100 mL容量瓶中。取1 mL上清液，移入裝有D101大孔吸附樹脂的層析柱（10 mL注射器當作層析柱，填料填到6 cm左右），用25 mL水洗柱，棄去洗脫液，用25 mL 70%乙醇洗脫，收集洗脫液轉移至蒸發(fā)皿中，用60 ℃水浴蒸發(fā)至干。蒸發(fā)皿中的蒸干物，用5 mL甲醇溶解，用0.45 μm濾膜過濾即得樣品液。取1 mL轉移至具塞試管，在70 ℃下水浴蒸干，以備顯色。

1.5 顯色方法

1.5.1 總黃酮樣品和蘆丁對照品溶液的顯色

參考刁海鵬等[5]的方法進行顯色?？傸S酮樣品與蘆丁對照品溶液中分別加入5%亞硝酸鈉0.4 mL，靜置5 min，加入10%硝酸鋁0.4 mL，靜置5 min，后加入4%氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水定容至10 mL，搖勻，靜置15 min，即顯色完成。

1.5.2 總多酚樣品和沒食子酸對照品溶液的顯色

參考陳向東等[6]的方法進行顯色。總多酚樣品與沒食子酸對照品溶液中分別加入0.5 mL福林酚溶液，加蒸餾水至6 mL，搖勻后加1.5 mL 10%碳酸鈉，蒸餾水定容至10 mL。75 ℃下水浴加熱10 min，避光放涼，即顯色完成。

1.5.3 總多糖樣品和D-葡萄糖對照品溶液的顯色

參考許世浩等[7]的方法進行顯色?？偠嗵菢悠放cD-葡萄糖對照品溶液中分別加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5 mL，搖勻，置沸水浴中加熱15 min，再置于冰水浴中冷卻5 min，加水定容至10 mL，即顯色完成。

1.5.4 總皂苷樣品和紫丁香苷對照品溶液的顯色

參考孫云波等[8]的方法進行顯色?？傇碥諛悠放c紫丁香苷對照品蒸干物中分別加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液，使殘渣溶解，再加入0.8 mL高氯酸，混勻后移入試管中，蓋緊蓋子在60 ℃水浴加熱20 min，取出，冰浴冷卻5 min后，準確加入5 mL冰乙酸，搖勻，即顯色完成。

1.6 方法學考察

1.6.1 標準曲線的繪制

（1）蘆丁標準曲線繪制。精密移取200 μg·mL-1的蘆丁對照品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、

2.5 mL和3.0 mL置于10 mL容量瓶中，按1.5.1顯色。以隨行試劑作空白對照，在510 nm波長處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標X，吸光度為縱坐標Y，進行線性擬合。

（2）沒食子酸標準曲線繪制。精密移取

18.6 μg·mL-1的沒食子酸對照品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL和2.5 mL置于10 mL容量瓶中，按1.5.2顯色。以隨行試劑作空白對照，在760 nm處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標X、吸光度為縱坐標Y，進行線性擬合。

（3）D-葡萄糖標準曲線繪制。精密移取

102.5 μg·mL-1的D-葡萄糖對照品溶液0.5 mL、0.8 mL、1.1 mL、1.4 mL、1.7 mL和2.0 mL置于10 mL容量瓶中，按1.5.3顯色。以隨行試劑作空白對照，在波長490 nm處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標X、吸光度為縱坐標Y，進行線性擬合。

（4）紫丁香苷標準曲線繪制。精密移取

1 005 μg·mL-1的紫丁香苷對照品溶液70 μL、100 μL、130 μL、160 μL、190 μL、220 μL和250 μL至10 mL試管中，70 ℃下水浴蒸干，蒸干物按1.5.4顯色。以隨行試劑作空白對照，在波長553 nm處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標X、吸光度為縱坐標Y，進行線性擬合。

1.6.2 精密度實驗

（1）總黃酮。精密移取總黃酮樣品溶液4 mL于10 mL容量瓶，按照1.5.1顯色，平行6份，在510 nm處測定吸光度，計算得相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）。

（2）總多酚。精密移取總多酚樣品溶液2 mL于10 mL容量瓶，按照1.5.2顯色，平行6份，在760 nm處測吸光度，計算其RSD值。

（3）總多糖。精密移取總多糖樣品溶液1 mL于20 mL具塞試管中，按照1.5.3顯色，平行6份，在波長490 nm處測定吸光度，計算其RSD值。

（4）總皂苷。精密移取總皂苷樣品溶液1 mL轉移至6個具塞試管中，在70 ℃下水浴蒸干，按照1.5.4顯色，以隨行試劑作空白對照，在波長553 nm處測定吸光度，計算其RSD值。

1.6.3 重復性實驗

（1）總黃酮。精密稱取同批樣品6份，每份約0.25 g，按照1.4.1制備樣品溶液，精密移取4 mL于10 mL容量瓶中，按照1.5.1顯色終體積為10 mL，在510 nm處測定吸光度，計算其RSD值。

（2）總多酚。精密稱取同批樣品6份，每份約0.25 g，按照1.4.1制備樣品溶液，精密移取2.5 mL于25 mL容量瓶中，按照1.5.2顯色終體積為、25 mL，在760 nm處測定吸光度，計算其RSD值。

（3）總多糖。精密稱取同批樣品6份，按照1.4.2制備樣品溶液，精密吸取1 mL于20 mL具塞試管中，按照1.5.3顯色，加水定容至15 mL，在490 nm處測定吸光度，計算其RSD值。

（4）總皂苷。精密稱取同批樣品6份，按照1.4.3制備樣品溶液，水浴蒸干，按照1.5.4顯色。以隨行試劑作空白對照，在553 nm處測定吸光度，計算其RSD值。

1.6.4 穩(wěn)定性實驗

（1）總黃酮。精密移取1.4.1下樣品溶液5 mL置于25 mL容量瓶中，按照1.5.1顯色。在0 min、2 min、5 min、7 min、10 min、12 min、15 min、

17 min和20 min測定吸光度，計算RSD值。

（2）總多酚。精密移取1.4.1下樣品溶液1 mL于50 mL容量瓶中，按照1.5.2顯色。在0 h、0.50 h、0.75 h、1.00 h、1.25 h、1.50 h和2.00 h測定吸光度，計算RSD值。

（3）總多糖。精密移取1.4.2下樣品溶液1 mL于20 mL具塞試管中，按照1.5.3顯色，加水定容至14 mL。在0 min、5 min、10 min和15 min測定吸光度，計算RSD值。

（4）總皂苷。精密移取1.4.3下樣品溶液1 mL水浴蒸干，按照1.5.4顯色。以隨行試劑作空白對照，在0 min、10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min、80 min、110 min、100 min、120 min和140 min測定吸光度，計算RSD值。

1.6.5 加標回收率

（1）總黃酮。精密移取1.4.1下的樣品溶液9份1 mL置于10 mL容量瓶中，分別加入0.8 mL、0.8 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.0 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.2 mL和1.2 mL的200 μg·mL-1蘆丁標準品溶液，按照1.5.1顯色，另做空白，在510 nm處測定吸光度，計算加標回收率。

（2）總多酚。精密移取1.4.1下的樣品溶液9份0.5 mL于50 mL容量瓶中，各加入1.0 mL、1.0 mL、1.0 mL、1.3 mL、1.3 mL、1.3 mL、1.6 mL、1.6 mL和1.6 mL的93 μg·mL-1的沒食子酸標準品溶液，按照1.5.2顯色，另做空白，在760 nm處測定吸光度，計算加標回收率。

（3）總多糖。精密移取1.4.2下樣品溶液9份1 mL于20 mL具塞試管中，各加入0.6 mL、0.6 mL、0.6 mL、0.9 mL、0.9 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.2 mL和1.2 mL重新配制的濃度為107.9 μg·mL-1的D-葡萄糖標準品溶液，充分混勻，按1.5.3顯色，加水定容至13 mL。在490 nm處測定吸光度值，計算加標回收率。

（4）總皂苷。精密稱取1.4.3下樣品溶液9份1 mL于試管中，各加入45 μL、45 μL、45 μL、60 μL、60 μL、60 μL、75 μL、75 μL和75 μL的1 005 μg·mL-1的紫丁香苷對照品溶液，充分混勻，水浴蒸干，按照1.5.4顯色。以隨行試劑作空白對照，在553 nm處測定吸光度，計算加標回收率。

1.7 含量測定

1.7.1 總黃酮

精密稱取肉蓯蓉配方茶約0.25 g，3批次（20220321、20220322、20220323），每批次3份，共9份，按照1.4.1制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液2 mL置于10 mL容量瓶中；按照1.5.1顯色，在510 nm處測定吸光度，按線性回歸方程計算總黃酮含量。

1.7.2 總多酚

精密稱取肉蓯蓉配方茶約0.25 g，3批次（20220321、20220322、20220323），每批次3份，共9份，按照1.4.1制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中；按照1.5.2顯色，在760 nm處測定吸光度，按線性回歸方程計算總多酚含量。

1.7.3 總多糖

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0 g，3批次（20220321、20220322、20220323），每批次3份，共9份，按照1.4.2制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液1 mL置15 mL具塞試管中，按照1.5.3顯色，加水定容至15 mL；以隨性溶液為空白對照溶液，在490 nm處測定吸光度，按線性回歸方程計算總多糖含量。

1.7.4 總皂苷

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0 g，3批次（20220321、20220322、20220323），每批次3份，共9份，按照1.4.3制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液各1 mL置于15 mL試管中，水浴蒸干，按照1.5.4顯色；以隨行試劑作空白對照，在553 nm處測定吸光度，按線性方程計算總皂苷含量。

2 結果與分析

2.1 方法線性考察結果

如表1所示，蘆丁標準曲線回歸方程的R2值大于0.999，符合要求，線性范圍為10.00～60.00 μg·mL-1；沒食子酸標準曲線回歸方程的R2值大于0.999，符合要求，線性范圍為0.93～4.65 μg·mL-1；D-葡萄糖標準曲線回歸方程的R2值大于0.999，符合要求，線性范圍為5.13～20.50 μg·mL-1；紫丁香苷標準曲線回歸方程的R2值大于0.999，符合要求，線性范圍為11.72～41.88 μg·mL-1。

2.2 精密度實驗

如表2所示，總黃酮樣品溶液精密度RSD為1.20%，總多酚樣品溶液精密度RSD為0.20%，總多糖樣品溶液精密度RSD為1.90%，總皂苷樣品溶液精密度RSD為1.44%，均符合規(guī)定要求（RSD＜2%），表明方法精密度良好。

2.3 重復性實驗

如表3所示，同批次總黃酮樣品溶液重復性RSD為0.18%，同批次總多酚樣品溶液重復性RSD為0.40%，同批次總多糖樣品溶液重復性RSD為1.45%，同批次總皂苷樣品溶液重復性RSD為0.16%，均符合規(guī)定要求（RSD＜2%），表明方法重復性良好。

2.4 穩(wěn)定性實驗

總黃酮溶液在20 min內的穩(wěn)定性RSD為1.50%，表明樣品中的總黃酮在規(guī)定時間內相對穩(wěn)定，穩(wěn)定時間相對較短?？偠喾尤芤涸? h內的穩(wěn)定性RSD為0.40%，表明樣品中的總多酚在規(guī)定時間內穩(wěn)定。總多糖溶液在15 min內的穩(wěn)定性RSD為1.67%，表明樣品中的總多糖在規(guī)定時間內穩(wěn)定，穩(wěn)定時間相對較短?？傇碥杖芤涸?40 min內的穩(wěn)定性RSD為1.93%，表明樣品中的總皂苷在規(guī)定時間內較穩(wěn)定。

2.5 加標回收率

2.5.1 總黃酮

如表4所示，樣品總黃酮平均加標回收率在98.1%～101.9%，RSD＜2%，加標回收率結果符合相關要求。

2.5.2 總多酚

如表5所示，樣品總多酚平均加標回收率在97.0%～99.8%，RSD＜2%，加標回收率結果符合相關要求。

2.5.3 總多糖

如表6所示，樣品總多糖平均加標回收率為101.4%～107.8%，RSD＜2%，加標回收率結果符合相關要求。

2.5.4 總皂苷

如表7所示，樣品總皂苷高中低濃度下平均加標回收率為99.6%～107.1%，RSD＜2%，加標回收率結果符合相關要求。

2.6 含量測定

2.6.1 總黃酮

20220321批次樣品總黃酮的含量為8.55%～8.75%，20220322批次樣品總黃酮的含量為8.35%～8.53%，20220323批次樣品總黃酮的含量為8.23%～8.40%。不同批次之間的總黃酮含量差異較小，樣品總黃酮含量較穩(wěn)定，結果見表8。

2.6.2 總多酚

20220321批次樣品總多酚的含量為9.30%～9.65%，20220322批次樣品總多酚的含量為9.48%～9.67%，20220323批次樣品總多酚的含量為9.34%～9.53%。不同批次之間的總多酚含量差異較小，樣品總多酚含量較穩(wěn)定，結果見表8。

2.6.3 總多糖

20220321批次樣品總多糖的含量為1.38%～1.50%，20220322批次樣品總多糖的含量為1.42%～1.58%，20220323批次樣品總多糖的含量為1.20%～1.30%。不同批次之間的總多糖含量差異較小，樣品總多糖含量較穩(wěn)定，但樣品中總多糖含量較其他有效成分較少，結果見表8。

2.6.4 總皂苷

20220321批次樣品總皂苷的含量為2.56%～2.86%，20220322批次樣品總皂苷的含量為1.91%～2.38%，20220323批次樣品總皂苷的含量為1.87%～2.63%。不同批次之間的總皂苷含量差異較大，樣品中總皂苷含量也較低，結果見表8。

3 結論

本文對肉蓯蓉配方茶中的主要化學成分總黃酮、總多酚、總多糖及總皂苷的含量進行了測定，結果顯示，各成分的含量分別為8.23%～8.75%、9.30%～9.67%、1.20%～1.58%、1.87%～2.86%。本研究結果為肉蓯蓉配方茶的開發(fā)研究、質量標準建立、企業(yè)標準起草及抗疲勞功效物質的基礎研究提供了一定的依據(jù)。

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基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學青年基金（2023D01C211）。

作者簡介：閆洛美（1989—），女，甘肅武威市人，博士，講師。研究方向：藥物化學與有機化學。

通信作者：木合布力·阿布力孜（1963—），男，維吾爾族，新疆烏魯木齊人，博士，教授。研究方向：藥物化學與有機化學。E-mail： 1784383217@qq.com。