【摘要】 目的 分析在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA檢測中實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值。方法 納入2020年1月—2023年12月東莞市松山湖中心醫(yī)院收治的160例疑似HBV患者作為研究對象，檢測其乙型肝炎病毒DNA（hepatitis B virus-DNA，HBV-DNA）含量。使用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），以電化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，對比2種方法的診斷結(jié)果及其效能，并分析不同HBV感染狀態(tài)下HBV-DNA含量的差異。結(jié)果 在160例疑似HBV患者中，電化學(xué)發(fā)光法檢測陽性77例、陰性83例；實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測陽性82例、陰性78例；ELISA檢測陽性46例、陰性114例。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度均高于ELISA（P＜0.05）。小三陽與急慢性感染期HBV-DNA含量低于大三陽（P＜0.05）。結(jié)論 實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在HBV-DNA檢測中具有較高的診斷效能和價(jià)值，能夠有效判斷患者病情嚴(yán)重程度，有助于醫(yī)生制定針對性治療方案。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒；酶聯(lián)免疫吸附法；實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

文章編號：1672-1721（2025）01-0040-04" " "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A" " "中國圖書分類號：R512.6+2

臨床上，HBV會引起慢性乙型肝炎，臨床表現(xiàn)有多種，其中包括腹脹、乏力等，伴隨病情的不斷變化和發(fā)展，致使患者的肝功能代謝能力下降，嚴(yán)重者引起肝硬化或其他疾病，不利于患者的正常生活[1]。上述結(jié)論可以說明，對于慢性乙型肝炎患者來說，早期診斷和治療不僅可以緩解病情發(fā)展，還可以提高患者的生活質(zhì)量，促進(jìn)預(yù)后[2]。電化學(xué)發(fā)光法檢測是診斷慢性HBV的標(biāo)準(zhǔn)之一，但是這一檢測方法容易發(fā)生鉤狀效應(yīng)，且如果稀釋倍數(shù)過于高，對于臨床則失去了意義。與此同時(shí)，反復(fù)使用流動池會發(fā)生重復(fù)污染的情況；沖洗氣泡直接影響測定結(jié)果，漫長的沖洗過程會導(dǎo)致檢測效率減慢，并且儀器成本和維護(hù)費(fèi)用高。ELISA是臨床診斷HBV感染的一種常用手段，其特點(diǎn)是價(jià)格低、快速、方便、簡單等，但受多種因素的影響，比如病毒滴度低、病毒變異等，致使漏診、誤診發(fā)生[3]。近些年，隨著醫(yī)學(xué)水平的不斷提高，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在臨床廣泛應(yīng)用，它可以精準(zhǔn)檢測HBV-DNA的含量，能夠直接反映HBV復(fù)制狀態(tài)及傳染性的最佳指標(biāo)，通過HBV-DNA含量能直接反映病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量、是否傳染、傳染性強(qiáng)度，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值[4]。鑒于此，本研究以東莞市松山湖中心醫(yī)院收治的160例疑似HBV患者作為研究對象，對實(shí)時(shí)熒光PCR在HBV-DNA檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果及價(jià)值展開分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月—2023年12月東莞市松山湖中心醫(yī)院收治的160例疑似HBV患者作為研究對象，其中男性79例，女性81例；年齡34～72歲，平均年齡（54.16±1.38）歲；病程1～7 年，平均病程（4.39±0.18）年。

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡34～72歲；積極配合研究者；可接受本研究檢測方法者；患者及其家屬知曉本研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有語言功能嚴(yán)重障礙或精神疾?。挥捎趥€(gè)人原因無法配合檢測；伴有心、腎等器官嚴(yán)重功能障礙；研究期間主動退出者。

1.2 方法

所有患者取清晨空腹靜脈血4 mL，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速、10 cm半徑離心15 min，采用ELISA法檢測血液標(biāo)本的乙肝e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）性質(zhì)與狀態(tài)，以上操作均按照說明書內(nèi)容嚴(yán)格執(zhí)行。HBeAg水平正常數(shù)值為＜0.5 ng/mL。采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對HBV-DNA水平進(jìn)行定量檢測，隨后按照檢測結(jié)果進(jìn)行陽性、陰性的判定，HBV-DNA定量檢測水平≥100 copies/mL為陽性，HBV-DNA定量檢測水平＜100 copies/mL為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）診斷結(jié)果。以電化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，對比實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)和ELISA的診斷結(jié)果。（2）分析對比實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)、ELISA的診斷效能（靈敏度，特異度，準(zhǔn)確度）。（3）對比分析不同HBV感染狀態(tài)下的HBV-DNA含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以x±s表示，行t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果

在160例疑似HBV患者中，電化學(xué)發(fā)光法檢測陽性77例、陰性83例；實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測陽性82例、陰性78例；ELISA檢測陽性46例、陰性114例，見表1。

2.2 診斷效能

實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的檢測準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度均高于ELISA（P＜0.05），見表2。

2.3 HBV-DNA含量

大三陽HBV-DNA含量高于小三陽和急慢性感染期（P＜0.05），見表3。

3 討論

乙型肝炎是一種病毒性傳染病，傳染性和發(fā)病率高，傳播途徑（例如血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液和陰道分泌物等）有多種，應(yīng)避免與他人共用餐具、毛巾、剃須刀、牙具、注射器和取血針等。乙型肝炎通?？梢娪谝倚透窝谆颊叩募毙云凇⒙云?、潛伏期末，亦可見于乙型肝炎病毒的無癥狀攜帶者。如果患者長時(shí)間身體素質(zhì)差、處于病理狀態(tài)，那么很容易出現(xiàn)并發(fā)癥（比如肝硬化、肝衰竭等），生活質(zhì)量下降，生命安全受到嚴(yán)重威脅[5-6]。因此，給予患者早期診斷具有重要意義。準(zhǔn)確的診斷方式有助于醫(yī)生早期制定有效、合理的治療方案，控制疾病發(fā)展，保障患者的生命安全[7]。臨床對于乙型肝炎的診斷以ELISA為主要診斷方法，這是病毒進(jìn)入人體時(shí)免疫狀態(tài)的一種及時(shí)反映，屬于免疫學(xué)檢測方式的一種，乙型肝炎檢出率較高。但是，ELISA不能評估病情進(jìn)展，而且無法判斷實(shí)際病毒載量，同時(shí)，若操作不得當(dāng)，可能直接影響檢測結(jié)果。另外，ELISA對危險(xiǎn)（病毒復(fù)制，感染，病毒傳染）的敏感性十分低，這對疾病的早期診斷和治療方法的制定不利。截至目前，診斷HBV常用化學(xué)發(fā)光檢測法或者電化學(xué)發(fā)光檢測法。這些方法的優(yōu)點(diǎn)是特異度高、靈敏度高，但容易發(fā)生鉤狀效應(yīng)，且如果稀釋倍數(shù)過于高，反而有可能在倍比稀釋的時(shí)候因?yàn)橄到y(tǒng)誤差導(dǎo)致結(jié)果更加不準(zhǔn)，故應(yīng)用效果并不理想。與此同時(shí)，磁性、非磁性微粒的使用會導(dǎo)致散射吸收的強(qiáng)烈性進(jìn)一步降低?；瘜W(xué)發(fā)光檢測法可準(zhǔn)確檢測出HBV感染，但是對于乙型肝炎患者來說，發(fā)病時(shí)期不同，HBV-DNA含量也不同[8]，無法判斷患者的病情嚴(yán)重程度，臨床診斷價(jià)值不高。

隨著醫(yī)學(xué)水平的不斷進(jìn)步與發(fā)展，在乙型肝炎診斷中，臨床廣泛應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測。本研究以化學(xué)發(fā)光檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度均高于ELISA（P＜0.05），進(jìn)一步證實(shí)在HBV-DNA檢驗(yàn)中，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的診斷效能較高，可以更好地檢測HBV疾病，降低漏診、誤診的概率，及時(shí)、準(zhǔn)確評估和判斷患者病情嚴(yán)重程度，為預(yù)后治療方案的制定提供數(shù)據(jù)支持。在乙型肝炎的臨床診斷中，ELISA的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、靈敏度高、成本低。這一檢測手段通過血清中特異性抗原與抗體聯(lián)合進(jìn)行檢測，從而有效判斷患者體內(nèi)是否存在HBV[9]。但是，這一檢測手段受多種因素的影響，例如血清指標(biāo)濃度不同，致使假陰性、假陽性結(jié)果出現(xiàn)，誤診、漏診率較高。與此同時(shí)，ELISA對自身檢測要求十分高，反復(fù)洗板或孔間污染等因素會對檢測結(jié)果產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致診斷準(zhǔn)確度相對下降。采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測的誤診、漏診率低，可以根據(jù)檢測結(jié)果形成檢測報(bào)告，對于血液標(biāo)本的檢測準(zhǔn)確度高，是通過每毫升拷貝數(shù)定量結(jié)果而決定的，臨床優(yōu)勢、優(yōu)點(diǎn)較多，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，可以及時(shí)反饋HBV-DNA水平，為臨床治療提供可靠依據(jù)。從本研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，不同HBV感染狀態(tài)中，大三陽HBV-DNA含量高于小三陽和急慢性感染期（P＜0.05），說明伴隨病情的加重，乙型肝炎患者血液中HBV-DNA含量也越高，定量檢測結(jié)果可以為病情嚴(yán)重程度的綜合判斷提供參考。但ELISA和電化學(xué)發(fā)光檢測法無法對HBV-DNA含量進(jìn)行定量分析，ELISA只能進(jìn)行廣泛篩查，不能深入篩查。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)可以準(zhǔn)確判斷乙型肝炎疾病，通過HBV-DNA含量檢測對患者的病情嚴(yán)重程度進(jìn)行綜合評估，促進(jìn)預(yù)后。除此之外，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的應(yīng)用還能夠進(jìn)一步縮短患者的治療時(shí)間，應(yīng)用價(jià)值較高[10]。

在機(jī)體出現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗體（hepatitis B surface antibody，HbsAb）后，依然可以發(fā)現(xiàn)患者血清中HBV-DNA復(fù)制情況，盡管HbsAb陽性，但血清標(biāo)本中仍然能夠檢測到HBV，其不斷進(jìn)行DNA復(fù)制。與此同時(shí)，伴隨時(shí)間的延長，HBV-DNA陽性檢出率進(jìn)一步下降，分析原因，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)具有一定的精準(zhǔn)性，可及時(shí)準(zhǔn)確測定患者血清中病毒DNA的拷貝數(shù)，從而為評估病毒復(fù)制情況、判斷病情分期、觀察病情變化、調(diào)整治療方案提供依據(jù)。這一技術(shù)是乙型肝炎治療終點(diǎn)的一種綜合評估技術(shù)，通過對乙型肝炎病毒變異株的及時(shí)、綜合檢測，可以有效判斷患者的傳染性情況。ELISA作為臨床檢測乙型肝炎疾病的傳統(tǒng)方法之一，主要根據(jù)患者的病情嚴(yán)重程度反饋機(jī)體病情信息，可以對患者進(jìn)行定性檢驗(yàn)，但是無法進(jìn)行病毒載量、定量的綜合評估。在乙型肝炎抗原抗體檢測中，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在常規(guī)染色方式的基礎(chǔ)上添加了熒光染料，表現(xiàn)能力較強(qiáng)，可以有效收集熒光探針反應(yīng)信號，實(shí)時(shí)檢測乙型肝炎抗體載量目標(biāo)完成情況[11]。除此之外，如果患者無法使用ELISA檢測，而且處于發(fā)病初期，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)可對其進(jìn)行針對性檢測，并且診斷特異度和準(zhǔn)確度較高。這一檢測方法與ELISA相比，可將HBV復(fù)制狀況準(zhǔn)確反映出來，還能充分體現(xiàn)出HBV數(shù)量。但是，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢驗(yàn)也存在一定的缺陷，這一般體現(xiàn)在肝功能基本恢復(fù)正?；颊咧校?yàn)榛颊唧w內(nèi)HBV-DNA水平不斷下降時(shí)，其表達(dá)也可能受人體免疫因素等多種因素的影響，促使實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在檢驗(yàn)期間精準(zhǔn)測定乙肝類型，同時(shí)檢測出HBV載量，但無法檢測出恢復(fù)中的HBV，也可能受到自身狀況的影響，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果存在偏倚。因此，需要根據(jù)患者的具體狀況選擇合理的檢測方式，以進(jìn)一步提高檢測準(zhǔn)確性。對于乙型肝炎患者，治療的關(guān)鍵在于進(jìn)一步抑制病毒的復(fù)制，避免疾病發(fā)展。在乙型肝炎抗病毒治療過程中，采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)評估療效，有利于綜合判斷治療效果。此外，HBV-DNA定量檢測結(jié)果可為聯(lián)合用藥、用藥時(shí)間和用藥劑量提供準(zhǔn)確數(shù)據(jù)和支持。在HBV-DNA檢驗(yàn)中，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)可將病毒復(fù)制活躍度、機(jī)體免疫應(yīng)答水平反映出來，以便為臨床檢測提供依據(jù)，增強(qiáng)患者的治療信心，改善治療效果和患者依從性。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)較ELISA效果顯著，可為醫(yī)生提供更精準(zhǔn)的檢測數(shù)據(jù)，為乙型肝炎準(zhǔn)確診斷提供數(shù)據(jù)支持。與此同時(shí)，通過對HBV-DNA含量的準(zhǔn)確和定量分析，可根據(jù)檢測結(jié)果對患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行綜合評估與分析，為預(yù)后治療提供依據(jù)，改善預(yù)后。林艷等[12]認(rèn)為，在HBV血清學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的效果優(yōu)于ELISA，可以顯著提高乙型肝炎病毒陽性檢出率和臨床療效預(yù)測價(jià)值，為預(yù)后治療提供科學(xué)依據(jù)，這一研究結(jié)果與本研究結(jié)果相似。但此研究結(jié)果受研究時(shí)間短、樣本量少等因素的影響，結(jié)果存在偏倚，在今后的研究中需加大樣本量，延長研究時(shí)間，進(jìn)一步深入探究實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值，為臨床提供可靠依據(jù)。

綜上所述，在HBV-DNA檢測中，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)具有一定的診斷價(jià)值，其檢測的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度較高，并且在HBV-DNA定量檢測中可準(zhǔn)確評估患者的病情嚴(yán)重程度，為預(yù)后治療提供參考。

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（編輯：肖宇琦）