杜元灝　翟　娜

摘要

選用大鼠經(jīng)大腦中動脈阻斷（ＭＣＡＯ），復(fù)制急性腦梗塞模型，采用酶組化法特異性的顯示微血管壁ＡＴＰ酶，觀察其變化及針刺內(nèi)關(guān)、水溝對其的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ＭＣＡＯ后３，６，３６小時缺血及梗塞區(qū)微血管壁上的ＡＴＰ酶代謝嚴(yán)重障礙，酶大量脫失及耗竭，隨著時間的延續(xù)，酶代謝逐漸改善，但活性較低，酶顯示的微血管數(shù)目較少；而針刺組微血管壁上的ＡＴＰ酶代謝較好，活性較高，酶顯示的微血管數(shù)目較多，表明針刺可改善微血管內(nèi)皮細(xì)胞的ＡＴＰ酶代謝，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞鈉鉀跨膜轉(zhuǎn)運動能，從而有效地減輕因缺血缺氧而導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，改善微血管的機能。

主題詞腦梗塞／針灸療法毛細(xì)血管／酶學(xué)腺苷三磷酸酶／代謝

急性腦血管閉塞后，腦微血管自律運動嚴(yán)重紊亂，出現(xiàn)高頻低幅的無效振動，嚴(yán)重地影響著其血供區(qū)及時獲得代償血流，導(dǎo)致腦細(xì)胞酶代謝障礙，出現(xiàn)局灶性腦梗死。因此，當(dāng)急性腦血管閉塞發(fā)生后，其支配區(qū)域微血管的功能狀態(tài)是決定梗死面積大小及可逆腦細(xì)胞能否恢復(fù)功能的樞紐，這就是我們前期研究工作所提出的"微血管樞紐學(xué)說"。為了進(jìn)一步揭示腦梗塞發(fā)生的微血管機制，本研究采用美國學(xué)者ＨｅｒｒｍａｎｎＨ．Ｊ報道的鎂離子激活法，特異性地顯示血管內(nèi)皮細(xì)胞基膜及質(zhì)膜上的ＡＴＰ酶，客觀地揭示腦血管閉塞后血管內(nèi)皮細(xì)胞的酶代謝及針刺效應(yīng)。

１材料與方法

１.１動物分組與模型制作

Ｗｉｓｔａｒ大鼠５５只，體重１８０～２００ｇ，雌雄各半，隨機分為模型組、針刺組、去頸交感神經(jīng)節(jié)組（簡稱去節(jié)組），假手術(shù)組及正常對照組，前３組各按３，６，３６ｈ分３個時相組，每組各５只；后２組各５只。

模型制作：采用熱阻凝法阻斷一側(cè)大腦中動脈，造成腦梗塞模型。假手術(shù)組只開顱而不阻斷ＭＣＡ。

１.２處理方法

針刺組：針刺內(nèi)關(guān)、水溝，先刺內(nèi)關(guān)，用捻轉(zhuǎn)提插相結(jié)合的方法持續(xù)操作１ｍｉｎ；繼刺水溝，行雀啄手法１０次，兩穴留針１０ｍｉｎ；內(nèi)關(guān)接電針，以動物前肢微微抖動為度。

去頸交感神經(jīng)節(jié)組：于ＭＣＡＯ后即刻摘除雙側(cè)頸交感神經(jīng)節(jié)。

其余各組均不作治療處理，而只是同樣抓取。

１.３酶組化實驗方法

參照Ｈｅｒｒｍａｎｎ報道的鎂離子激活法。所有動物按規(guī)定時相斷頭取腦，立即置入－２０℃的恒冷箱切片機中速凍，將腦縱向平分３等份，取近嗅球塊腦組織，切片厚度２０μｍ，染色后封片，顯微鏡下觀察，結(jié)果經(jīng)計算機圖像分析處理。

２結(jié)果

正常動物腦血管內(nèi)皮細(xì)胞上ＡＴＰ酶活性較高，鏡下可見酶染色呈黑棕色，酶顯示的微血管外形清晰，數(shù)目多布滿整個視野。模型組３ｈ時，腦血管內(nèi)皮細(xì)胞上的ＡＴＰ酶大量脫失，鏡下所見酶染色呈淺棕色，酶顯示的微血管數(shù)目極少，而且外形模糊不清；６ｈ時，酶染色略有加深，顯示的微血管數(shù)目略有增加；３６ｈ時酶染色呈棕色，酶顯示的微血管有所增加。針刺組動物３ｈ時，血管內(nèi)皮細(xì)胞染色較深，呈棕色，酶顯示的微血管較多，外形較清晰；隨著時間的延續(xù)，６，３６ｈ內(nèi)皮細(xì)胞酶染色呈棕色及深棕色，酶顯示的微血管較多，外形清晰。各時相酶活性及其顯示的微血管數(shù)目均與模型組有顯著的差異（Ｐ＜０.０１）。

實驗對去除頸交感神經(jīng)節(jié)方法的效果進(jìn)行了觀察，結(jié)果表明該方法確能保護(hù)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的ＡＴＰ酶代謝，但其作用遠(yuǎn)不及針刺的作用。統(tǒng)計結(jié)果見表１。

３討論

以往的鎂離子激活法顯示組織中各種細(xì)胞質(zhì)膜及基膜上的鈉鉀依賴式ＡＴＰ酶，不能特異的顯示某一種細(xì)胞上的該酶，而我們選用的方法能特異的著色于血管內(nèi)皮細(xì)胞的質(zhì)膜和基膜上，其余種類的細(xì)胞質(zhì)膜及基膜并不著色，如本實驗中腦組織細(xì)胞呈白色，只有血管的外形顯示，因此本方法是研究血管內(nèi)皮細(xì)胞ＡＴＰ酶代謝狀況及反應(yīng)微血管機能狀態(tài)的良好手段。

ＡＴＰ酶是組織細(xì)胞能夠直接利用的唯一能量，被稱為能的通用"貨幣"，因此通過觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞的ＡＴＰ酶變化，可準(zhǔn)確地反映內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)。血管內(nèi)皮細(xì)胞膜內(nèi)外的離子轉(zhuǎn)運是一個耗能過程，本方法顯示的酶系鈉鉀依賴式ＡＴＰ酶，故其代謝狀況可反映鈉鉀離子轉(zhuǎn)運的功能。近年來，大量的研究都肯定了血管內(nèi)皮細(xì)胞具有重要的功能，它不僅是微循環(huán)完成組織血氧等供給的基本保證，而且具有重要的分泌功能，如它可分泌內(nèi)皮素，尤其當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷性因素刺激時，大量釋放而介導(dǎo)微血管的嚴(yán)重痙攣。因此，從血管內(nèi)皮細(xì)胞的ＡＴＰ酶代謝角度，探討腦梗塞發(fā)生發(fā)展的微血管機制及針刺效應(yīng)具有重要意義。

實驗結(jié)果表明，腦血管急性閉塞后，血管內(nèi)皮細(xì)胞的ＡＴＰ酶代謝嚴(yán)重障礙，提示微血管內(nèi)皮細(xì)胞遭到損傷，經(jīng)膜鈉鉀離子轉(zhuǎn)運紊亂，微血管機能狀態(tài)障礙，而僅靠機體自身的代償功能是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。針刺可有效地改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的ＡＴＰ酶代謝，從而保護(hù)了內(nèi)皮細(xì)胞的經(jīng)膜鈉鉀離子轉(zhuǎn)運，改善了微血管的機能狀態(tài)。

封閉頸交感神經(jīng)節(jié)治療腦梗塞的方法早在５０年代已經(jīng)用于臨床，近年仍有報道，這種方法的理論依據(jù)就是擴(kuò)張腦血管，增加腦灌注。為了揭示針刺的作用機制，我們選擇了去除頸交感神經(jīng)節(jié)的方法作為對照。實驗結(jié)果表明，該方法確有一定的保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞ＡＴＰ酶代謝作用，但是其效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及針刺的效果，原因何在？

我們認(rèn)為，針刺的作用是多方面的，絕不是簡單的擴(kuò)張微血管，如它在擴(kuò)張微血管的同時可增強微血管的自律運動，增強心臟功能等，這正是封閉或去除頸交感神經(jīng)節(jié)方法所無法達(dá)到的。

綜上所述，針刺可有效地改善急性腦血管閉塞所導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞ＡＴＰ酶代謝，減輕內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，從而改善了腦微血管的機能狀態(tài)，使缺血區(qū)及梗塞區(qū)及時獲得代償血流，這無疑對于縮小梗塞面積和使可逆的腦細(xì)胞恢復(fù)功能具有十分重要的意義。同時也再次證明了我們前期研究工作中所提出的微血管樞紐學(xué)說的合理性。

４參考文獻(xiàn)

１杜元灝，等．針刺治療急性腦缺血的微血管機制研究Ⅰ．針刺研究，１９９８；２３（４）：２７５

２中國中醫(yī)藥學(xué)會博士學(xué)術(shù)委員會．博士論壇．北京科學(xué)技術(shù)出版社，１９９７：１２５～１２７

３ＨｅｒｒｍａｎｎＨ．Ｊ．ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌＲｅｓｅａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈ，１９９７；（１７）：２１５

（修回日期：２０００玻埃丟玻保常齊淑蘭發(fā)稿）