●李瑞午　李翠紅　汪智民

(中國(guó)中醫(yī)研究院針灸所,100700;1北京針灸骨傷學(xué)院解剖教研室)

摘要對(duì)"足三里"穴區(qū)不同層次感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的節(jié)段性分布進(jìn)行了研究。結(jié)果證明"足三里"穴區(qū)皮內(nèi)、皮下、肌層的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的節(jié)段性分布略有不同。皮內(nèi)注射其感覺(jué)神經(jīng)元分布偏于頭側(cè),相對(duì)數(shù)量較多,節(jié)段分布窄,較為集中,以中小細(xì)胞標(biāo)記為主;皮下注射感覺(jué)神經(jīng)元分布較少;肌層注射感覺(jué)神經(jīng)元分布偏于尾側(cè)數(shù)量較多,標(biāo)記細(xì)胞節(jié)段分布寬,較為分散,以大中型細(xì)胞為主。因此,認(rèn)為肌層的經(jīng)穴神經(jīng)分布可能與經(jīng)脈臟腑相關(guān)的關(guān)系更為密切。

主題詞穴,足三里/神經(jīng)支配神經(jīng)節(jié),感覺(jué)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元

不少學(xué)者^[1,2]對(duì)穴位傳入傳出神經(jīng)元的節(jié)段性分布進(jìn)行了不少的研究,大部分的研究將穴位定位在肌層,而臨床上常用的針灸穴位有深淺不等,因此研究不同層次下穴位的感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的節(jié)段性分布對(duì)指導(dǎo)臨床針灸的應(yīng)用是十分必要的。本研究以"足三里"穴位為例,對(duì)皮內(nèi)、皮下、肌層3種不同深度下穴位的傳入、傳出神經(jīng)元的節(jié)段性分布進(jìn)行了比較和研究,現(xiàn)匯報(bào)如下。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

中國(guó)中醫(yī)研究院動(dòng)物室提供的大白鼠,雌雄不拘,體重250～300 g 22只。

動(dòng)物隨機(jī)分為兩組,甲組:右側(cè)注射,深度為皮下;左側(cè)注射,深度為肌層共12只。乙組:左側(cè)注射,深度為肌層;右側(cè)注射,深度為皮內(nèi)共10只。因此肌層注射為22只側(cè),皮內(nèi)為10只側(cè),皮下為12只側(cè)。

藥物:辣根過(guò)氧化物酶(HRP)R_z=6.0為上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品,四甲基聯(lián)苯氨(TMB)、硝普鈉均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品,其他多聚甲醛、戊二醛、硫酸二氫鈉、硫酸氫二鈉、過(guò)氧化氫、鉻明礬、明膠等均為北京化學(xué)試劑公司產(chǎn)品。

1.2注射方法

取5%HRP的生理鹽水溶液50 μl,應(yīng)用微量注射器,根據(jù)比較解剖學(xué)的測(cè)量方法,于大白鼠脛骨外側(cè),脛骨粗隆下"足三里"穴,分別垂直進(jìn)針(肌層)、45度進(jìn)針(皮下)和10度進(jìn)針(皮內(nèi))在皮內(nèi)打成皮丘。注射的范圍約0.5 cm左右。注射后動(dòng)物存活72 h。

灌流和取材:動(dòng)物用1%戊巴比妥鈉過(guò)量麻醉后,經(jīng)主動(dòng)脈插管灌流,順序注入4%枸緣酸鈉200 ml,0.9%氯化鈉溶液200 ml,1%多聚甲醛+1.25%戊二醛的磷酸鹽緩沖液和10%的0.1 M(pH 7.4)的磷酸鹽緩沖液,固定液灌流時(shí)間不少于20 min,灌流后取L1～S3的脊髓和背根節(jié),分別放入20%的蔗糖0.1 M(pH7.4)磷酸鹽緩沖液,貯存過(guò)夜。

冰凍厚40 μm,切片裱于涂有鉻明礬明膠的玻片上,切片經(jīng)蒸餾水沖洗后,經(jīng)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色^[3],中性紅復(fù)染,上行脫水后二甲苯透明,樹(shù)脂膠封固,光學(xué)顯微鏡下觀察。

2結(jié)果

標(biāo)記細(xì)胞的確定:標(biāo)記神經(jīng)元的胞漿內(nèi)充滿(mǎn)黑藍(lán)色的小圓形顆粒,其胞核區(qū)無(wú)標(biāo)記物存在形成中空的圓形缺損,未被標(biāo)記的細(xì)胞胞漿內(nèi)有中性紅復(fù)染后可顯粉紅色顆粒。

"足三里"穴肌層注射HRP后,在標(biāo)記的脊髓背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞主要見(jiàn)于L₃～S₂的節(jié)段,細(xì)胞以大中型細(xì)胞為多,標(biāo)記細(xì)胞高峰見(jiàn)于L4和L₅占標(biāo)記細(xì)胞總數(shù)的75%以上。其中L₃占6.2%,L4占30.4%,L₅占45.1%,S₁占14.2%,S₂占4.1%。其在脊髓前角也見(jiàn)有大量標(biāo)記細(xì)胞,主要見(jiàn)于L₅和S₁,其標(biāo)記細(xì)胞在前角細(xì)胞位置主要見(jiàn)于前角后側(cè)。

"足三里"穴皮下注射HRP后,其標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量明顯少,在背根節(jié)中標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量?jī)H為肌肉注射細(xì)胞數(shù)量的4～5分之一。細(xì)胞仍是大中型細(xì)胞為主,其標(biāo)記細(xì)胞的高峰以L4為主,范圍為L(zhǎng)₃～S₁。L₃占10%,L4占50%,L₅占25%,S1占15%。其在脊髓前角中細(xì)胞數(shù)量也遠(yuǎn)不如肌層注射多,其數(shù)量約為肌層3～4分之一。其標(biāo)記細(xì)胞與肌層的相比,細(xì)胞位置偏于前角的前內(nèi)側(cè)。

"足三里"穴區(qū)皮內(nèi)注射HRP后,其在脊髓背根節(jié)中的標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量比肌層注射相對(duì)要少;而比皮下注射的明顯要多。其大、中、小型標(biāo)記細(xì)胞均可見(jiàn),但以小型標(biāo)記細(xì)胞為主。標(biāo)記細(xì)胞的范圍為L(zhǎng)₂～L₅,與肌層注射相比有明顯前移現(xiàn)象,而且高峰區(qū)集中在L₃節(jié)段。其中L₂占2.1%,L₃占93.4%,L4占3.4%,L₅占1.1%。在脊髓前角的標(biāo)記神經(jīng)元數(shù)量明顯少于肌肉與皮下,不足皮下的二分之一,僅為肌肉的7～8分之一。細(xì)胞位置與皮下位置大致相同。具體內(nèi)容詳見(jiàn)表1。

3討論

本研究結(jié)果證明"足三里"穴區(qū)肌肉層、皮下層、皮內(nèi)層和各層間的神經(jīng)分布略有不同。根據(jù)其在背根節(jié)標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量,分析其感覺(jué)神經(jīng)末梢的分布多少的順序是肌層最多、皮內(nèi)次之、皮下最少,其節(jié)段分布肌層最寬(L₃～S₂)、皮內(nèi)最窄(L₂～L₅)、皮下居中(L₃～S₁)。在背根節(jié)標(biāo)記細(xì)胞大小,肌層以大中細(xì)胞為主,皮內(nèi)以大中小細(xì)胞均有,但小細(xì)胞為多見(jiàn)。其標(biāo)記細(xì)胞出現(xiàn)的最高峰節(jié)段肌肉偏于尾側(cè)(L₅),而皮內(nèi)偏于頭側(cè)(L₃),皮內(nèi)的標(biāo)記細(xì)胞最為集中,皮下的標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量最少,肌層的標(biāo)記細(xì)胞較為分散。此結(jié)果說(shuō)明針刺穴位時(shí),刺入皮內(nèi)受試者,疼痛感覺(jué)明顯定位準(zhǔn)確可能與中小型細(xì)胞較多有關(guān);而進(jìn)入皮下后,疼痛不明顯;針刺深入肌層其感覺(jué)以酸麻重脹為主,定位不明確,這與穴位肌層中感覺(jué)神經(jīng)的分布有一定關(guān)系。其感覺(jué)器可能以肌梭為主,其后根節(jié)中的大中型標(biāo)記細(xì)胞似參與這部分信息的傳遞功能。

由于皮內(nèi)層標(biāo)記細(xì)胞相對(duì)集中,針刺時(shí)定位明確,因此可能淺刺以局部穴位治療局部疾病為主;而肌層其標(biāo)記細(xì)胞分散,定位相對(duì)不準(zhǔn)確,因此,深刺可能與治療有關(guān)臟腑疾病有關(guān),因其與相應(yīng)臟腑的感覺(jué)神經(jīng)末梢可能在此有交匯的分布。

標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元主要分布于相應(yīng)節(jié)段的前角細(xì)胞柱,其比感覺(jué)神經(jīng)元的分布節(jié)段相對(duì)較窄。肌層注射的標(biāo)記細(xì)胞較多,而皮內(nèi)與皮下均較少。但其標(biāo)記細(xì)胞在前角細(xì)胞柱的位置有所不同。其肌層標(biāo)記細(xì)胞主要見(jiàn)于前角的后外側(cè),而在皮下和皮內(nèi)注射后的標(biāo)記細(xì)胞主要分布在前角細(xì)胞柱的前內(nèi)側(cè)。這與傳統(tǒng)的解剖學(xué)知識(shí)有所不同,四肢肌肉的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元應(yīng)分布于前角柱的后外側(cè),而前角細(xì)胞柱的前內(nèi)側(cè)細(xì)胞主要支配中軸肌。皮下和皮內(nèi)的標(biāo)記細(xì)胞出現(xiàn)在前角細(xì)胞柱的前內(nèi)側(cè)是否有何特殊的機(jī)能,有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

4小結(jié)

(1)"足三里"穴區(qū)皮內(nèi)、皮下、肌層的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的節(jié)段性分布略有不同。

(2)皮內(nèi)注射其感覺(jué)神經(jīng)元分布偏于頭側(cè),相對(duì)數(shù)量較多,節(jié)段分布窄,較為集中,以中小細(xì)胞標(biāo)記為主。

(3)皮下注射感覺(jué)神經(jīng)元分布較少。

(4)肌層注射感覺(jué)神經(jīng)元分布偏于尾側(cè)數(shù)量較多,標(biāo)記細(xì)胞節(jié)段分布寬,較為分散,以大中型細(xì)胞為主。

提示:淺刺以局部穴治療局部疾病為主,深刺到肌層可能與治療臟腑疾病有關(guān)。因此,肌層的經(jīng)穴神經(jīng)分布可能與經(jīng)脈臟腑相關(guān)的關(guān)系更為密切。

5參考文獻(xiàn)

1陶之理,等.足三里穴區(qū)感覺(jué)神經(jīng)元的節(jié)段性分布.針刺研究,1983;(2):136

2張家駒,等.家兔足三里穴與盲腸傳入神經(jīng)元節(jié)段性分布-HRP研究.針刺研究,1992;(3):123

3Mesulam MM.Tracing Neural Connection with Horseradish Peroxidase,IBRO Handbook Series:Methods in the Neurosciences.New York,John Wiley and Sons,1982;(2):36

(收稿日期:19990224,齊淑蘭發(fā)稿)