郭彥偉

[摘要] 目的 檢測Ki-67、ER、PR和C-erbB-2在乳腺癌組織中的表達(dá)并探討其相關(guān)關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組化法，檢測乳腺癌組織中ER、PR和C-erbB-2的表達(dá)，分析前者與后三者間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果 Ki-67、ER、PR和C-erbB-2陽性表達(dá)率分別為79.52%、63.25%、60.24%、66.26%，Ki-67表達(dá)強度與C-erbB-2 呈正相關(guān)性，與ER、PR 呈負(fù)相關(guān)性。結(jié)論 乳腺癌組織中Ki-67與ER、PR和C-erbB-2有明確的相關(guān)關(guān)系，聯(lián)合檢測具有實際的臨床意義，可作為臨床病理因素之外早期識別具有高浸潤和轉(zhuǎn)移潛能的乳腺癌及判斷其預(yù)后的有用指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌； 免疫組化； Ki-67； ER； PR； C-erbB-2

[中圖分類號] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2009）13-03-03

Study of the Relationship between Ki-67，ER，PR and C-erbB-2 in Breast Cancer Tissues

GUO Yanwei

Department of Oncology，The First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan 473058

[Abstract] ObjectiveTo detect the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 in breast cancer tissues and discuss the relationship between Ki-67，ER，PR，C-erbB-2 and clinical pathological factors. MethodsImmunohistochemical method was used to detect the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 in breast cancer tissue. ResultsThe positivity rate of the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 were 79.52%，63.25%，60.24%，66.26% respectively. The expression of Ki-67 had positive correlation with C-erbB-2（x²＝109.79，P＜0.01），but had negative correlation with ER and PR（x²＝30.14，P＜0.01；x²＝36.71，P＜0.01）. ConclusionThe expression of Ki-67，ER，PR and C-erbB-2 are all higher in breast tumor tissues，which indicates to be useful for the prognosis judgement. Co-detection ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 can elevate the sensitivity of prognosis evaluation. So，they can be used to detect high infiltrating and high metastasizing tumor，and evaluate their prognosis.

[Key Words]Breast cancer； Immunohistochemistry； Ki-67； ER； PR； C-erbB-2

目前國內(nèi)外對Ki-67與ER、PR和C-erbB-2相關(guān)關(guān)系方面的研究還存在較多的不同觀點。我們應(yīng)用免疫組化實驗方法聯(lián)合檢測166例乳腺癌組織中Ki-67、ER、PR和C-erbB-2的表達(dá)，并探討其相關(guān)關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

乳腺癌腫瘤組織均來自2004年12月～2007年2月南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院，有完整原癌病灶、淋巴結(jié)和癌旁組織的乳腺癌標(biāo)本。均為女性，年齡27~79歲，平均（53.2±11.2）歲。組織學(xué)類型：浸潤性導(dǎo)管癌150例，浸潤性小葉癌8例，髓樣癌6例，小管癌2例。有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者68例。

1.2 方法

免疫組化S-P染色，步驟如下：（1）烤片，68℃，20min；（2）常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；（3）阻斷：滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H₂o₂37℃孵育10min，PBS沖洗3×5min；（4）抗原修復(fù)：置0.01M枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）中用煮沸（95℃，15~20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3×5min。（5）正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗；（6）滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3×5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；滴加生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30min，PBS沖洗3×5min；（7）滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS沖洗3×5min；（8）DAB/ H₂o₂反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。

1.3 Ki-67、ER、PR和C-erbB-2在乳腺癌組織中的表達(dá)及判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 ER（PR）陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) 腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核呈棕黃色為陽性結(jié)果。0級：無細(xì)胞核棕黃染色或少于5%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核較弱棕黃染色；1級：5%～30%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核弱棕黃染色，個別可中到強著色；2級：30%～60%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核弱到中度棕黃著色，個別可強著色；3級：多于60%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核中到強棕黃著色，個別可弱著色。見封三圖1，2。

1.3.2 Ki-67陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) 腫瘤細(xì)胞核棕黃染色為陽性結(jié)果。陽性率判斷標(biāo)準(zhǔn)：以任意5個高倍鏡視野中陽性細(xì)胞所占的細(xì)胞比例的平均值定義為陽性細(xì)胞百分比并作為評定依據(jù)。①陽性細(xì)胞數(shù)＜5%，不著色者為陰性（-）；②陽性細(xì)胞數(shù)在5%～25%為（+），-顯色：淺棕色為弱陽性（+）；③陽性細(xì)胞數(shù)在26%～50%為（++），-顯色：棕黃色為陽性（++）；④陽性細(xì)胞數(shù)大于50%為（+++）。-顯色：深棕色為強陽性（+++）。以（-）和（+）為低表達(dá)組，（++）和（+++）為過表達(dá)組進(jìn)行分析。見封三圖3。

1.3.3 C-erbB-2陽性標(biāo)準(zhǔn) 腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜棕黃染色為陽性結(jié)果。0級：無細(xì)胞染色或少于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜較弱染色；1級：大于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜部分較弱染色；2級：大于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜完全較弱到中等染色；3級：大于10%的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜完全強染色。見封三圖4。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計學(xué)軟件，采用x²檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各項指標(biāo)陽性表達(dá)率

Ki-67為79.52%（132/166），ER為63.25%（105/166），PR為60.24%（100/166），C-erbB-2為66.26%（110/166）。各項指標(biāo)過表達(dá)率（表達(dá)呈++和+++的和占總例數(shù)的比例，+++為過表達(dá)）：Ki-67為47.59%（79/166），ER為44.58%（74/166），PR為45.18%（75/166），C-erbB-2為24.10%（40/166）。

2.2 Ki-67與ER，PR，C-erbB-2的關(guān)系

乳腺癌組織的Ki-67表達(dá)強度與C-erbB-2強度的表達(dá)呈正相關(guān)性（x²＝109.79，P＜0.01）；與ER的表達(dá)強度呈負(fù)相關(guān)性（x²＝30.14，P＜0.01）；與PR的表達(dá)強度呈負(fù)相關(guān)性（x²＝36.71，P＜0.01）。見表1，圖1 ~ 3。

3 討論

目前，ER、PR和C-erbB-2的檢測之所以被廣為接受的主要原因是它們與乳腺癌對內(nèi)分泌治療的反應(yīng)有關(guān)，可以作為臨床選擇內(nèi)分泌治療的依據(jù)。ER和PR均陰性的腫瘤對內(nèi)分泌治療有反應(yīng)的可能性小，而ER和PR均陽性的腫瘤大多數(shù)對內(nèi)分泌治療有效。C-erbB-2過表達(dá)的患者對CMF方案和三苯氧胺治療不敏感，而對蒽環(huán)類藥物和紫杉醇治療敏感，對單克隆抗體Herceptin的治療反應(yīng)良好[1]。據(jù)文獻(xiàn)報道，免疫組化方法測定過度表達(dá)的C-erbB-2的陽性率在20%～30%[2]，ER陽性表達(dá)占原發(fā)性乳腺癌的77%，PR表達(dá)為65%[3]。本研究結(jié)果顯示，以上這些指標(biāo)過度表達(dá)的標(biāo)本占總數(shù)的比例分別為ER為63.25%（105/166）、PR為60.24%（100/166）、C-erbB-2為24.10%

（40/166），與國外文獻(xiàn)統(tǒng)計相同[4，5]。Schippinger等[6]研究表明，C-erbB-2過表達(dá)的乳腺癌患者轉(zhuǎn)移率高，5年與10年生存率較低，同時還發(fā)現(xiàn)，C-erbB-2的表達(dá)與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。本研究利用免疫組化法對166例乳腺癌組織進(jìn)行檢測并進(jìn)行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，C-erbB-2表達(dá)越強，Ki-67表達(dá)也越強；ER、PR表達(dá)越強，則Ki-67表達(dá)越弱，這提示在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中Ki-67與C-erbB-2、ER、PR之間可能存在著特殊關(guān)系，即Ki-67的表達(dá)強度與C-erbB-2的表達(dá)強度呈正相關(guān)性，與ER、PR的表達(dá)強度呈負(fù)相關(guān)，同時也意味著Ki-67過表達(dá)可能是一個不良預(yù)后因素，其與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展具有內(nèi)在聯(lián)系。本研究因隨訪時間有限，關(guān)于乳腺癌組織中Ki-67表達(dá)對于乳腺癌預(yù)后的判斷以及指導(dǎo)治療的價值有待進(jìn)一步研究，但近年來有文獻(xiàn)報道Ki-67可作為乳腺癌化療的敏感性指標(biāo)，腫瘤細(xì)胞增殖率降低，比腫瘤的腫塊縮小更能反映腫瘤對化療敏感的程度。本研究發(fā)現(xiàn)Ki-67在乳腺癌組織過表達(dá)，提示癌細(xì)胞增殖活性的改變在癌前病變階段開始，并且與癌變的過程是相關(guān)的。

總之，Ki-67表達(dá)與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，與ER、PR和C-erbB-2有明確的相關(guān)關(guān)系，能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移，是一不良預(yù)后因子，可作為早期識別具有高浸潤和轉(zhuǎn)移潛能的乳腺癌及判斷其預(yù)后的有用指標(biāo)。

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（收稿日期：2008-12-10）