黃 山,許 健,令狐穎,劉志琴,袁 軍

近年來,隨著社會老齡化進(jìn)程的加快,以及不良生活方式和飲食習(xí)慣的存在,冠心病的發(fā)病率和病死率也急劇增加,已成為危害我國人民群眾生命和健康的重大疾病。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)的具有特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的生長因子,在促進(jìn)血管生成、再生和抗動脈硬化及治療中發(fā)揮著重要的作用,是評價動脈粥樣硬化病程發(fā)展和治療效果評價的一個重要指標(biāo)。為了了解 VEGF在心臟疾病中的診斷價值,我們利用流式細(xì)胞分析技術(shù) (flow cytometer,FCM)對其進(jìn)行了檢測,旨在為臨床相關(guān)疾病的診斷提供依據(jù),現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 血漿標(biāo)本采自2009年 9月—2010年 3月貴州省人民醫(yī)院心內(nèi)科住院病人和健康體檢者,清晨空腹采血,分離血清,-80℃保存待檢。急性冠狀動脈綜合征病例組共 75例,其中男 40例,女 35例,平均年齡 (52.5±17.3)歲。所有病人均符合 1997年 WHO診斷標(biāo)準(zhǔn),其中穩(wěn)定性心絞痛 25例,不穩(wěn)定型心絞痛 25例,急性心肌梗死 25例,正常對照組為各項體檢指標(biāo)均正常的健康人群,共 25例,其中男 10例,女 15例,平均年齡 (42.7±16.9)歲。

1.2 主要試劑和儀器 VEGF試劑盒流式檢測 (批號 51-9004276,美國 BD公司),VEGF標(biāo)準(zhǔn)品 (批號 558336,美國BD公司,濃度 2500ng/L),BD Aria流式細(xì)胞儀 (美國 BD公司)。

1.3 檢測方法 對健康照組、穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛和心肌梗死各 25例血清標(biāo)本,按照試劑盒說明書和 BD Aria流式細(xì)胞儀的操作規(guī)程進(jìn)行檢測,將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋作標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS12.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料采用 t檢驗,以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

病例組 VEGF為 (344.4±99.6)ng/L,對照組為 (78.1±18.7)ng/L,差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。不同病例 4組兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05,見表1)。

表1 4組 VEGF檢測結(jié)果Table1 The result of VEGF

3 討論

VEGF最初是在腫瘤細(xì)胞分泌物中發(fā)現(xiàn)的,具有高度的血管滲透性,主要由內(nèi)皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞產(chǎn)生[1],是迄今發(fā)現(xiàn)的具有特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的生長因子,不僅能誘導(dǎo)血管新生,而且能增加血管通透性,可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞向動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)遷移,在促進(jìn)血管生成、再生和抗動脈硬化及治療中有著重要的意義。VEGF在不同的病理生理變化過程中扮演的不同角色也與VEGF的濃度相關(guān),正常心臟只表達(dá)少量 VEGF[2],健康受試者血漿中游離 VEGF的濃度非常低。同時,在心血管病防治中,VEGF水平的高低還被認(rèn)為是評價動脈粥樣硬化病程發(fā)展和治療效果評價的一個重要指標(biāo)。實驗表明:心肌缺血時,VEGF表達(dá)增加,提示缺血和缺氧刺激 VEGF表達(dá)增加[3]。說明缺血和缺氧是刺激 VEGF表達(dá)增加的重要因素,而缺血和缺氧恰恰是冠狀動脈綜合征不可逾越的重要環(huán)節(jié)。本研究顯示,VEGF在對照組及冠心病組的含量有顯著的差異,同時,其濃度在穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛和心肌梗死時是逐漸增加的,顯示不同類型的冠心病之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,這對冠狀動脈綜合征的診斷具有一定臨床應(yīng)用價值。

目前,在臨床上使用較為廣泛的心臟標(biāo)志物主要是一些診斷價值已經(jīng)臨床證實的確診標(biāo)志物,如肌鈣蛋白、肌紅蛋白、肌酸激酶及其同工酶、利鈉肽等,而其他一些標(biāo)志物如炎癥因子、細(xì)胞黏附分子等,也可用于心肌缺血的早期診斷和急性冠狀動脈綜合征危害因素評估。但由于其檢測方法在臨床實際應(yīng)用上還存在一些有待解決的問題 (如臨床特異性、檢測方法的特異性和敏感性、檢測的標(biāo)準(zhǔn)化、是否適合于常規(guī)檢測實驗室操作等),這些心臟標(biāo)志物還未能在臨床上大規(guī)模應(yīng)用,還需得到更多的臨床研究證實[4]。為此,我們采用 FCM檢測VEGF,目的也在于對不同的 VEGF檢測方法進(jìn)行探索,為VEGF的檢測提供常規(guī)外的另一種選擇。

在 VEGF的檢驗中,方法較多,常用的有酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫試驗、免疫比濁等,但這些方法存在線性較窄,可比性差、干擾因素多等缺點。近年來,流式細(xì)胞分析技術(shù)(Flow Cytometer,FCM)已廣泛應(yīng)用于臨床,并且應(yīng)用前景不斷擴(kuò)大,對此,我們利用 FCM進(jìn)行了檢測。從傳統(tǒng)意義上講,流式細(xì)胞術(shù)只能檢測細(xì)胞及其表面抗原,而近年發(fā)展起來的流式微球分析技術(shù) (cytoometric bead assay,CBA)則是將液體中的可溶性成分結(jié)合在一種類似于細(xì)胞大小的顆粒上,便可用FCM檢測,其工作原理是,首先將包被某種抗體的不同大小和熒光強(qiáng)度的微球與待測樣品溶液混合,微球上的特異性抗體就與樣品中相應(yīng)的抗原或蛋白結(jié)合,再加入熒光素標(biāo)記的二抗,形成 “三明治”夾心復(fù)合物,用流式細(xì)胞儀檢測抗體的熒光信號就能定量可溶性被檢物。與傳統(tǒng)方法比較,CBA所需樣本量更少,并大大縮短操作時間,同時其特異性強(qiáng),靈敏度高,可實現(xiàn)多參數(shù)分析,其應(yīng)用領(lǐng)域越來越廣,值得在臨床上推廣。

1 Senger DR,GalliSJ,PerruzziCA,etal.Tumor cells secretea vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid[J].Scinence,1983,219(4587):983-985.

2 Risau W.Mechanisms of angiogenesis[J].Nature,1997,386(6626):671-674.

3 Cmalan,Mittals,Kumcrs,et al.Arandatized comparison of sublugual and vaginalin isoprostal for cervical prim ing before sution termination of first trinester pregnancy[J].Contraception,2004,70:11.

4 潘柏申.應(yīng)重視心臟標(biāo)志物的臨床應(yīng)用研究 [J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(9):881-884.