陶李明，劉文奇，胡玉龍，周蕓，伍躍東（.湘南學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系，郴州市 42000；2.湖南師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，長沙市 4008；.湘南學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，郴州市 42000）

髓樣分化蛋白88（MyD88）依賴性信號(hào)通路是介導(dǎo)機(jī)體天然免疫和獲得性免疫的重要的信號(hào)通路，近年發(fā)現(xiàn)該通路也參與多種心血管疾病的調(diào)控，如心肌梗死、缺血再灌注損傷、心肌肥大等[1，2]。白介素1受體（IL-1R）是介導(dǎo)天然免疫和獲得性免疫的重要受體[3]，當(dāng)IL-1R胞外段與相應(yīng)配體結(jié)合后，其胞內(nèi)的Toll/IL-1 receptor（TIR）區(qū)即與下游的MyD88的TIR區(qū)相互結(jié)合，同時(shí)誘導(dǎo)MyD88死亡結(jié)構(gòu)域活化，而形成TIR-MyD88活性復(fù)合體，并進(jìn)一步激活下游的信號(hào)通路，啟動(dòng)一系列基因表達(dá)[4～6]。因此，IL-1R/MyD88-TIR具有重要的生物活性。為進(jìn)行相關(guān)研究，筆者以N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸羥基琥珀酰亞胺酯為原料，采用2步反應(yīng)合成了小分子IL-1R/MyD88-TIR擬似物N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺，結(jié)果總收率為81.1%。并與其他院校合作對(duì)其生物功能進(jìn)行了驗(yàn)證[7]，發(fā)現(xiàn)該擬似物對(duì)人胚腎細(xì)胞HEK 293A未見細(xì)胞毒性，可以抑制IL-1β介導(dǎo)的p-38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化程度以及IL-1R相關(guān)激酶（IRAK）-1磷酸化激活程度，能競爭性阻斷IL-1R-TIR與MyD88-TIR的結(jié)合，從而抑制IL-1β介導(dǎo)的MyD88依賴性信號(hào)通路的激活。該擬似物是IL-1R-TIR和MyD88-TIR區(qū)之間的拮抗擬似物，在臨床上有望成為有效減輕心血管疾病發(fā)生、發(fā)展的新的治療靶點(diǎn)。

該擬似物的具體合成路線見圖1。

圖1 N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺的合成Fig 1 Synthesis of N-（3-methyl-1-pyrrolidinyl）-1-butan-oxo-benzenepropanamide

1 材料

N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸羥基琥珀酰亞胺酯（美國Sigma公司，批號(hào)：3392-12-9，分析純），其它試劑和催化劑均為分析純。

INOVA-400 MHz核磁共振（NMR）儀（美國Varian公司）；質(zhì)譜（MS）儀（日本Shimadzu公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮的合成

在25 mL圓底燒瓶中，分別加入N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸羥基琥珀酰亞胺酯（314 mg，1.0 mmol）、吡咯烷（85 mg，1.2 mmol）以及甲苯10 mL，混合物在室溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)過程用薄層色譜（TLC）板跟蹤反應(yīng)進(jìn)度，6 h后反應(yīng)完全。反應(yīng)混合物用乙醚（15 mL×5）萃取，萃取液經(jīng)水洗（15 mL×5）、無水硫酸鎂干燥，減壓蒸干乙醚，再以正己烷/乙酸乙酯（2∶1）為洗脫液，經(jīng)柱層析分離提純得化合物3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮，為無色固體，251 mg，該步收率92.7%。

2.2 N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺的合成

在50 mL圓底燒瓶中，取化合物3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮（240 mg，0.89 mmol）、三氟醋酸（10 mL）、二氯甲烷（20 mL），混合物在室溫下攪拌反應(yīng)4 h后，減壓蒸干溶劑，再加入苯丙酸乙酯（271 mg，1 mmol）、二氯甲烷（15 mL）以及三乙胺（2 mL），混合物繼續(xù)在室溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)過程用TLC板跟蹤反應(yīng)進(jìn)度，8 h后反應(yīng)完全。反應(yīng)混合物用乙醚（15 mL×3）萃取，萃取液再經(jīng)水洗（15 mL×5）、碳酸氫鈉稀溶液洗（15 mL×2），無水硫酸鎂干燥，減壓蒸干乙醚得粗產(chǎn)品，再以正己烷/乙酸乙酯（1∶1）為洗脫液，經(jīng)柱層析分離提純得相應(yīng)的化合物N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺，其為無色液體，235 mg，該步收率87.5%。

2.3 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)表征

將上述產(chǎn)物用NMR和MS進(jìn)行表征，結(jié)果如下。

3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮：白色固體，mp：48.5～49.3 ℃，1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.27（d，J＝9.5 Hz，1H），4.28～4.23（m，1H），3.72～3.62（m，1H），3.57～3.39（m，3H），2.10～1.82（m，5H），1.44（s，9H），0.97（d，J＝6.6 Hz，3H），0.94（d，J＝7.3 Hz，3H）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：177.4，168.3，154.0，80.2，56.5，30.4，28.4，24.7，17.7。

N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺：無色液體，1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.34～7.17（m，5H），6.24（d，J＝8.4 Hz，1H），4.60，4.58（dd，J＝6.8 Hz，7.2 Hz，1H），3.74～3.70（m，1H），3.49～3.40（m，3H），2.99～2.92（m，3H），2.53（t，J＝8.0 Hz，1H），1.97～1.83（m，5H），0.90（d，J＝6.8 Hz，3H），0.82（d，J＝6.8 Hz，3H）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：173.1，172.9，140.2，128.9，127.5，126.3，57.1，48.9，35.2，34.6，31.5，26.3，17.5；MS（70 eV）m/z（%）：302（M+，5），260（2），204（14），154（5），127（4），105（8），91（14），72（100）。

結(jié)果，所得目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征值與文獻(xiàn)[8]值相似，證實(shí)合成的化合物為目標(biāo)產(chǎn)物，總收率為81.1%。

3 分析與討論

N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸羥基琥珀酰亞胺酯與吡咯烷在甲苯中，室溫下反應(yīng)6 h后即可生成3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮。其中物料比以N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸羥基琥珀酰亞胺酯/吡咯烷（1∶2）更有利于反應(yīng)的進(jìn)行。筆者曾比較在其它有機(jī)溶劑如二氯甲烷、乙腈等進(jìn)行的反應(yīng)，結(jié)果發(fā)生，產(chǎn)率雖然相差不大，但在甲苯溶劑中進(jìn)行的反應(yīng)所需時(shí)間更短；反應(yīng)完成后，用乙醚萃取混合物，萃取液需經(jīng)水洗至少5次，才能除去反應(yīng)中所生成的N-羥基琥珀酰亞胺。

在合成N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺時(shí)，加入化合物3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮、三氟醋酸以及二氯甲烷后，攪拌反應(yīng)要充分，使3-甲基-2-叔丁氧羰氨基-1-吡咯烷基-1-丁酮中氨基上的保護(hù)基團(tuán)叔丁氧羰基充分被脫保護(hù)劑三氟醋酸洗脫和脫保護(hù)[9，10]，且反應(yīng)時(shí)間不能低于4 h，減壓蒸干溶劑，得到淡黃色的三氟醋酸鹽；同時(shí)，不需要將脫保護(hù)后的三氟醋酸鹽提純，可以直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。然后再加入苯丙酸乙酯及三乙胺，三乙胺用以調(diào)節(jié)溶液的酸堿性，促使反應(yīng)正向進(jìn)行。反應(yīng)完成后，混合物用乙醚萃取，萃取液需經(jīng)水洗至水層無色、碳酸氫鈉稀溶液再洗滌，以除去殘余的三乙胺、三氟醋酸等。

綜上所述，以N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸羥基琥珀酰亞胺酯為原料，合成了小分子IL-1R/MyD88-TIR擬似物N-（3-甲基-1-吡咯烷基）-1-丁酮基-苯丙酰胺，該反應(yīng)只需2步，操作方便且產(chǎn)率較高，特別是在反應(yīng)的第2步，不需要將脫保護(hù)后的三氟醋酸鹽提純，可以直接進(jìn)行后續(xù)的反應(yīng)操作。該擬似物是IL-1R-TIR和MyD88-TIR區(qū)之間的拮抗擬似物，可以有效阻斷MyD88依賴性信號(hào)通路，從而成為臨床上阻斷MyD88依賴性信號(hào)通路的新的治療靶點(diǎn)。本研究可為后續(xù)研究提供原料藥的來源。

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