何穗智 吳偉康 卓潛潛 劉素芳 歐順云鄧卓 曾百樂 淦楚明 吳以嶺

對(duì)絡(luò)氣郁滯(束縛)型動(dòng)脈粥樣硬化模型的綜合評(píng)價(jià)＊

何穗智1吳偉康2△卓潛潛3劉素芳1歐順云1鄧卓1曾百樂1淦楚明1吳以嶺4

目的對(duì)9組絡(luò)氣郁滯(束縛)型動(dòng)脈粥樣硬化模型(正常組、動(dòng)脈粥樣硬化組、單純束縛組、束縛加動(dòng)脈粥樣硬化組、辛伐他汀組、通心絡(luò)大劑量組、通心絡(luò)小劑量組、薤白四味組、薤白組)進(jìn)行療效綜合評(píng)價(jià)。方法分別應(yīng)用TOPSIS法、灰色關(guān)聯(lián)分析法、密切值法、優(yōu)序法對(duì)一氧化氮、內(nèi)皮素等20項(xiàng)指標(biāo)作綜合評(píng)價(jià)，并對(duì)評(píng)價(jià)排序結(jié)果采用KENDALL－W協(xié)和系數(shù)法進(jìn)行一致性檢驗(yàn)。結(jié)果TOPSIS法、灰色關(guān)聯(lián)分析法、密切值法和優(yōu)序法的評(píng)價(jià)結(jié)果具有一致性，從優(yōu)到劣排序:正常組＞通心絡(luò)大劑量組＞動(dòng)脈粥樣硬化組＞通心絡(luò)小劑量組＞辛伐他汀組＞薤白四味組＞薤白組 ＞單純束縛組＞束縛加動(dòng)脈粥樣硬化組。結(jié)論通心絡(luò)對(duì)束縛加動(dòng)脈粥樣硬化Wistar雄性大鼠的療效優(yōu)于辛伐他汀、薤白四味、薤白。

動(dòng)脈粥樣硬化 通心絡(luò) 辛伐他汀 綜合評(píng)價(jià)

1中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院(廣州510080)

2中山大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究所(廣州510080)

3廣東省佛山市南海區(qū)九江醫(yī)院(佛山528000)

4河北醫(yī)科大學(xué)醫(yī)藥研究院(石家莊050017)

＊國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(國(guó)家973計(jì)劃)項(xiàng)目(No.2005CB523305)

△通信作者

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)隨著生活水平提高和飲食習(xí)慣的改變，也成為我國(guó)主要死亡原因[1]。AS是一種累及全身動(dòng)脈血管，特別是彈力型動(dòng)脈的非炎癥性、退行性和增生性病變，對(duì)絡(luò)氣郁滯動(dòng)脈粥樣硬化的治療尤為困難?，F(xiàn)將有關(guān)絡(luò)氣郁滯動(dòng)脈粥樣硬化療效的多項(xiàng)指標(biāo)作綜合評(píng)價(jià)并進(jìn)行一致性檢驗(yàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar雄性大鼠，體質(zhì)量180～200g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào):SCXK(京)2007－0001。

1.2 試藥 血清同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司;小鼠α－actin單克隆抗體，美國(guó)Santa Cruz公司;Envision免疫組化試劑盒，丹麥Dako公司;膽固醇，北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司;膽酸鈉，北京奧博星生物技術(shù)有限公司;丙基硫尿嘧啶，上海復(fù)星朝暈藥業(yè)有限公司;維生素D3，巴斯夫維生素有限公司;通心絡(luò)，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司;辛伐他汀(舒降之)，杭州默沙東制藥有限公司;蛋氨酸，美國(guó)Sigma公司。

1.3 造模 (1)大鼠AS模型:參照文獻(xiàn)[2]并加以改進(jìn):按70萬U/kg計(jì)算大鼠維生素D3灌胃總量，3d內(nèi)用完，然后蛋氨酸灌胃2周，蛋氨酸灌胃的同時(shí)給予高脂飼料(4%膽固醇、1%膽酸鈉、0.5%丙基硫尿嘧啶、10%豬油、84.5%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng)4周。AS模型評(píng)價(jià)采用檢測(cè)血脂、主動(dòng)脈HE染色、MASSON染色、α－actin免疫組化、透射電鏡與掃描電鏡等指標(biāo)評(píng)價(jià)。(2)絡(luò)氣郁滯動(dòng)物模型:參照文獻(xiàn)[3]，將大鼠放入束縛盒內(nèi)，調(diào)節(jié)前端活動(dòng)部位至合適的位置，使大鼠不產(chǎn)生強(qiáng)烈反抗的緊張程度，每日6h(9:00－15:00)，連續(xù)6周，正常飼料飲食。(3)復(fù)合模型(絡(luò)氣郁滯型AS模型):先按70萬U/kg計(jì)算大鼠維生素D3灌胃總量，3d內(nèi)用完，以束縛盒每日束縛6h，連續(xù)6周，同時(shí)蛋氨酸灌胃2周，給予高脂飼料喂養(yǎng)4周。

1.4 分組與給藥 108只Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，隨機(jī)分為以下9組:(1)正常組;(2)AS組;(3)單純束縛組;(4)束縛加AS組;(5)辛伐他汀組;(6)通心絡(luò)大劑量組;(7)通心絡(luò)小劑量組;(8)薤白四味組;(9)薤白組。正常組給予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，各用藥組均于復(fù)合模型動(dòng)物造模第3周灌胃(不計(jì)維生素D3灌胃時(shí)間)，1次/d，連續(xù)4周。正常組、AS模型組和束縛加AS組于同期灌服等量生理鹽水。通心絡(luò)大劑量組以通心絡(luò)加生理鹽水配制成0.08g/mL混懸液，按0.82g干粉 (相當(dāng)于1.2g生藥)/(kg·d)(相當(dāng)于人臨床用量的16倍)灌胃。通心絡(luò)小劑量組以通心絡(luò)加生理鹽水配制成0.04g/mL混懸液，按0.41g干粉(相當(dāng)于0.6g生藥)/(kg·d)(相當(dāng)于人臨床用量的8倍)灌胃。薤白四味組以生理鹽水配制成含人參1.03g干粉 (相當(dāng)于0.12g生藥)/mL、薤白0.05g干粉 (相當(dāng)于0.12g生藥)/mL、水蛭0.64(ATU)/mL、蜈蚣 1.21g干粉(相當(dāng)于 0.067g生藥)/mL 的混懸液，按人參 10.2864g干粉(相當(dāng)于 1.2g 生藥)/(kg·d)、薤白 0.504g干粉(1.2g生藥)/(kg·d)、蜈蚣 12.06g干粉(相當(dāng)于0.67g 生藥)/(kg·d)、水蛭 6.4ATU/(kg·d)。薤白組按 0.504g干粉(1.2g生藥)/(kg·d)給藥。辛伐他汀組以辛伐他汀片加生理鹽水配制成0.5mg/mL混懸液，按5mg/(kg·d)(相當(dāng)于人臨床用量的8倍)灌胃。

1.4 指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后麻醉大鼠經(jīng)頸動(dòng)脈插管采集血液標(biāo)本，分離血漿或血清，檢測(cè)下列指標(biāo)。下丘腦－垂體－腎上腺軸指標(biāo)(HPAA):血漿促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和血清皮質(zhì)酮(CORT)。交感腎上腺髓質(zhì):血清去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)。腎素－血管緊張素－醛固酮系統(tǒng)(RAAS):血漿腎素活性(PRA)、醛固酮(ALD)、血漿血管生成素Ⅱ(AngⅡ)。細(xì)胞因子:血清白介素－6(IL－6)(放射免疫分析法)、干擾素γ(IFN－γ)。內(nèi)皮功能指標(biāo):一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 分別應(yīng)用TOPSIS法、灰色關(guān)聯(lián)分析法、密切值法、優(yōu)序法對(duì)NO、ET等指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，再對(duì)評(píng)價(jià)排序結(jié)果采用KENDALL－W協(xié)和系數(shù)法進(jìn)行一致性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 原始數(shù)據(jù)處理 將20個(gè)評(píng)價(jià)指司法按9個(gè)評(píng)價(jià)對(duì)象分組，均服從正態(tài)分布，故采用算術(shù)均數(shù)作為原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。見表 1，表 2。

2.2 對(duì)評(píng)價(jià)排序結(jié)果采用KENDALL－W協(xié)和系數(shù)法進(jìn)行一致性檢驗(yàn) 該檢驗(yàn)通過協(xié)和系數(shù)W顯示出樣本數(shù)據(jù)中的實(shí)際符合與最大可能符合之間的分歧程度，計(jì)算得W=0.96875，統(tǒng)計(jì)量 χ2=31.0000 ＞ 21.95，P ＜ 0.005，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可認(rèn)為這4種方法的評(píng)價(jià)結(jié)果具有一致性。將每一種評(píng)價(jià)方法所得的各樣本評(píng)分值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并匯總各評(píng)價(jià)方法的評(píng)分值重新排序即得最后評(píng)價(jià)結(jié)果。從優(yōu)到劣排序:正常組＞通心絡(luò)大劑量組＞AS組＞通心絡(luò)小劑量組＞辛伐他汀組＞薤白四味組＞薤白組＞單純束縛組＞束縛加AS組。見表3。

表1 原始數(shù)據(jù)

表2 原始數(shù)據(jù)

表3 各組數(shù)據(jù)一致性檢驗(yàn)結(jié)果

3 討論

劇烈或慢性心理和情緒應(yīng)激是AS和血栓性疾病的重要致病因子。血管內(nèi)皮是血管內(nèi)源性NO產(chǎn)生的主要部位。給予一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)抑制劑或敲除NOS基因的小鼠可出現(xiàn)明顯的高血壓[4]，而束縛應(yīng)激可降低NO供體引起的舒血管反應(yīng)。血小板產(chǎn)生的NO可抑制血小板的活化、黏附和聚集;而束縛應(yīng)激可導(dǎo)致血小板聚集功能增加[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:束縛加AS模型最劣，即使分別采用薤白四味、辛伐他汀、薤白干預(yù)，均未恢復(fù)到單純AS模型組的水平。

采用辛伐他汀、薤白、通心絡(luò)治療AS已有文獻(xiàn)報(bào)道[6－8]，但是以往的研究?jī)H限于分別作單一指標(biāo)或單一的方法的比較。本文提出綜合多種方法對(duì)藥物試驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)綜合評(píng)價(jià)，并對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果序列作一致性檢驗(yàn)，以盡可能減少單一方法評(píng)價(jià)產(chǎn)生的片面性，充分、準(zhǔn)確地利用各種方法所揭示的評(píng)價(jià)信息，使評(píng)價(jià)結(jié)果更為客觀、可靠和符合實(shí)際。本實(shí)驗(yàn)說明，對(duì)束縛加AS模型大鼠進(jìn)行藥物治療后，通心絡(luò)組最接近正常組，提示通心絡(luò)對(duì)束縛加動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠的療效優(yōu)于辛伐他汀、薤白四味、薤白。

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Synthetic Evaluation of the Animal Model of Atherosclerotic Origin with the Syndrome of Stagnancy of Collateral-Qi in a Depressed Condition(Astriction)

HE Sui-zhi1， WU Wei-kang2， ZHUO Qian-qian3， et al
1 School of Public Health，SUN Yat-sen University(Guangzhou 510080)
2 Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，SUN Yat-sen University(Guangzhou 510080)
3 Jiujiang Hospital of Nanhai District， Foshan City， Guangdong Province(Foshan 528000)

Objective:To evaluate synthetically effects of animal models in nine groups including the normal group， the AS group， the pure astriction group， the AS plus astriction group， the simvastatin group， the large dose Tongxinluo group，the small dose Tongxinluo group，the Xiebaisiwei Decoction group and the Xiebai group.MethodsThere were 20 in dices to be evaluated such as the TOPSIS method，the gray relative analysis method，the osculating method， the order method.These ranking evaluationResultswere used to be consistency test by KENDALL－W coefficient of concordance.ResultsTheResultswere consistent from the TOPSIS method， the gray relative analysis method， the osculating method and the order method.The order was the normal group ＞ the large dose Tongxinluo group＞the AS group＞the small dose Tongxinluo group＞the simvastatin group＞the Xiebaisiwei Decoction group＞the Xiebai group＞the pure astriction group＞the simvastatin group＞the Xiebaisiwei Decoction group＞the Xiebai group＞ the pure astriction group＞ the AS plus astriction group.ConclusionThese effects of the Tongxinluo group on Wistar male rats with AS plus astriction is better than that of the simvastatin，the Xiebaisiwei Decoction and Xibai.

Atherosclerosis;Tongxinluo;Simvastatin;Synthetic evaluation

R543.5

A

1004－745X(2010)09－1548－03

2010－05－28)