丁隆,楊宇,董家鴻

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外二科,佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院局部解剖教研室,佳木斯 154007; 3.中國人民解放軍總醫(yī)院肝膽外科,北京 100853)

研究報(bào)告

大鼠肝移植術(shù)后腹腔細(xì)菌感染模型的建立與評(píng)價(jià)

丁隆1,楊宇2,董家鴻3

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外二科,佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院局部解剖教研室,佳木斯 154007; 3.中國人民解放軍總醫(yī)院肝膽外科,北京 100853)

目的 建立大鼠肝移植術(shù)后腹腔感染的模型。方法構(gòu)建DA大鼠到LEW大鼠的肝移植模型,采用腹腔內(nèi)細(xì)菌注射的方法建立感染模型,通過對(duì)大鼠肝功、血?dú)?、血?xì)胞計(jì)數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)模型進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果肝移植術(shù)后5 d注射細(xì)菌,大鼠死亡率高,不利后續(xù)研究;術(shù)后3 d注射細(xì)菌,并選定5×105cfu/mL為最終注射濃度,感染后大鼠的7d存活率累計(jì)可達(dá)到37.5%左右,隨之感染的加重,大鼠狀態(tài)逐漸變差,直腸溫度不斷升高,WBC計(jì)數(shù)也隨之增加,pH下降,大鼠出現(xiàn)代謝性酸中毒,肝功能損害進(jìn)行性加重,肝實(shí)質(zhì)的損害重于膽道的損傷,大約在感染5 d左右相繼死亡,多器官病理分析表明,大鼠死亡原因?yàn)楦螕p害,不并發(fā)肺臟、腎臟損害。結(jié)論采用的腹腔內(nèi)大腸埃希菌注射建立肝移植術(shù)后腹腔細(xì)菌感染的模型是比較成功的,可用于相關(guān)領(lǐng)域的研究。

肝移植;細(xì)菌感染,腹腔;免疫抑制;大鼠

大鼠原位肝臟移植(orthotop ic liver transp lantation in rat,ROLT)是研究肝移植免疫的理想模型。細(xì)菌感染是肝移植術(shù)后常見的并發(fā)癥,發(fā)病率較高,受到臨床廣泛關(guān)注。但目前針對(duì)這方面的基礎(chǔ)研究有限,考慮與技術(shù)原因有較大關(guān)系,肝移植模型的建立要求有較為成熟的技術(shù),另外在器官移植排斥的基礎(chǔ)上建立細(xì)菌感染模型有一定的困難,動(dòng)物死亡率高,模型的重復(fù)性差。本研究中我們以DA大鼠為供體,LEW大鼠為受體,在改良的Kam ada“二袖套”基礎(chǔ)上[2],以腹腔內(nèi)注菌的方法建立大鼠肝移植術(shù)后腹腔細(xì)菌感染的模型。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的建立

成年雄性近交系DA和LEW大鼠,各174只,體質(zhì)量200～220 g,分別購于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心【SCXK(黑)2002-0002】和北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司【SCXK(京)2006-0009】,并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。供、受體體重差≤10 g。手術(shù)以DA大鼠為供體,LEW大鼠為受體,采用改良的Kam ada雙袖套法建立大鼠肝移植動(dòng)物模型,共174只。細(xì)菌購于第三軍醫(yī)大學(xué)軍流教研室,為國標(biāo)大腸埃希菌(Escherichia co li)8099。

行原位肝移植術(shù),術(shù)后隨機(jī)分為2個(gè)注射時(shí)間點(diǎn):術(shù)后3d和5d給予腹腔注射細(xì)菌,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)依據(jù)注射濃度不同,隨機(jī)分成5個(gè)感染組,1個(gè)對(duì)照組(生理鹽水注射組):G1組:注射濃度為105cfu/mL,注射量為5 m L;G2組:注射濃度為105cfu/mL,注射量為2 mL;G3組:術(shù)后3 d或5 d,腹腔內(nèi)生理鹽水注射2 mL;G4組:注射濃度為108cfu/mL,注射量為2 mL;G5組:注射濃度為107cfu/mL,注射量為2 mL;G6組:注射濃度為106cfu/mL,注射量為2 mL。

設(shè)菌液注射前1 d,注射后1 d、3 d、5 d、7 d共5個(gè)時(shí)相點(diǎn),每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只動(dòng)物,進(jìn)行感染嚴(yán)重程度的判定;另外設(shè)8只大鼠觀察感染后一般情況和受體的存活時(shí)間。

1.2 主要檢測(cè)指標(biāo)

1.2.1 一般情況:實(shí)驗(yàn)對(duì)每個(gè)自然存活組的8只受體大鼠進(jìn)行一般狀態(tài)觀察,主要是精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食狀況、體重增減、尿液顏色及鞏膜有無黃染等現(xiàn)象的觀察,同時(shí)記錄每只大鼠的生存時(shí)間。

1.2.2 感染嚴(yán)重程度的判定:①直腸溫度測(cè)定:大鼠處死前使其處于自然狀態(tài)下測(cè)體溫。將室內(nèi)溫度應(yīng)控制在18～20℃,用膠皮管套在溫度計(jì)上方約2.0 cm處,在同一時(shí)間點(diǎn)將體溫計(jì)插入大鼠直腸內(nèi),深度為1.5～2.0 cm,3 m in后讀數(shù),連續(xù)測(cè)量3次,取平均值。②生化指標(biāo)的檢測(cè):按上述采動(dòng)脈血2 mL,用生化自動(dòng)分析儀、血常規(guī)計(jì)數(shù)儀、血?dú)夥治鰞x分別檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC);TCO2、HCO、 pH;ALT、TB等指標(biāo)。③組織器官的病理學(xué)檢測(cè):各組織塊以中性福爾馬林溶液中固定24 h,常規(guī)石蠟包埋切片,HE染色,觀察實(shí)質(zhì)細(xì)胞的變化,炎性細(xì)胞的浸潤。光鏡下閱片。

1.2.3 感染的鑒定:動(dòng)物處死后分別取腹腔沾液做細(xì)菌培養(yǎng)。

1.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)分析均通過SAS 6.0軟件進(jìn)行。各組間均數(shù)的比較采用雙因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn),P< 0.05為相差顯著,P<0.01為相差十分顯著。生存時(shí)間采用軟件繪制成Kap lan-M eier曲線,比較采用對(duì)數(shù)秩和檢驗(yàn)(Log-rank)。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察

肝移植術(shù)后5 m in左右大鼠即清醒、站立,30 m in后能飲水;第2天各組大鼠的精神較差,有少量飲食,活動(dòng)較少;第3天精神狀態(tài)、活動(dòng)等有所好轉(zhuǎn)。

2.1.1 術(shù)后3 d注菌組:各組大鼠注菌后,精神狀態(tài)明顯變差,體重有不同程度下降,體溫升高,被毛雜亂,無光澤,食欲差;G1組5 d左右部分鼠可出現(xiàn)口鼻少量出血,呈嗜睡狀態(tài),并有死亡鼠;感染后7 d大鼠生存率為37.5%(3/8),最長生存時(shí)間為感染后8 d,平均生存時(shí)間(9.25±1.24)d;G2組大鼠鞏膜黃染、尿黃呈進(jìn)行性加重,多于術(shù)后12 d(感染后9 d)死亡,平均生存時(shí)間(12.88±1.61)d,與G1組比差異存在顯著性;G4組、G5組和G6組大鼠在細(xì)菌注射后12～48 h之內(nèi)相繼死亡,死亡組解剖見:腹腔內(nèi)無明顯腹水,肝脾腫大顯著,與周圍組織粘連較重,部分肝葉壞死,雙肺出血。

2.1.2 術(shù)后5 d注射細(xì)菌組:G1組大鼠在術(shù)后鞏膜漸進(jìn)性黃染,口鼻眼角不同程度的出血,體重明顯下降,體溫升高,呼吸急促,活動(dòng)減少,聚集成團(tuán),飲水量增加,48 h后相繼死亡,平均生存時(shí)間(8.00 ±1.33)d;G2組注菌后精神差,皮毛雜亂、無光澤,眼睛周圍明顯充血,尿色逐漸加深,注菌72 h后,大鼠相繼進(jìn)入嗜睡狀態(tài),最長生存時(shí)間為術(shù)后10 d,感染后5 d,平均生存時(shí)間(8.63±1.48)d,與G1組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01。G4組、G5組和G6組大鼠在細(xì)菌注射后12～24 h之內(nèi)相繼死亡,存活時(shí)限較短。見圖1。

G3組于術(shù)后精神狀態(tài)尚可,6 d左右出現(xiàn)鞏膜黃染,體重逐漸下降,食欲、活動(dòng)均下降,多于術(shù)后13 d左右死亡,平均生存時(shí)間為(12.75±1.5)d。

從上面結(jié)果觀察到:術(shù)后5 d腹腔注射組感染后大鼠存活時(shí)間較短,不利于進(jìn)一步研究,因此在后續(xù)的研究中舍去。

Log-Rank卡方值=11.566;P=0.005,G1與G3組的生存時(shí)間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 體溫觀察

圖1 術(shù)后3 d注菌組大鼠術(shù)后(感染后)生存曲線F ig.1 Survival curves of the groups w ith in jection of bacteria on day 3 after transp lantation

G1、G2組大鼠感染后體溫逐漸升高,直至死亡,兩組相比在術(shù)后第4天、第8天和第10天相比差異顯著;G3組術(shù)后第2天,體溫略有升高(與G1組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異),隨后逐漸下降,至術(shù)后第6天左右再次升高,與G1、G2組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在組內(nèi)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組的各時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 術(shù)后3d腹腔細(xì)菌注射大鼠直腸溫度變化比較(±s,n=8,℃)Tab.1 Comparison of the changes of rectal temperature in the ratswith injection of bacteria on day 3 after transplantation(±s,n=8,℃)

表1 術(shù)后3d腹腔細(xì)菌注射大鼠直腸溫度變化比較(±s,n=8,℃)Tab.1 Comparison of the changes of rectal temperature in the ratswith injection of bacteria on day 3 after transplantation(±s,n=8,℃)

注:a:P<0.05;c:P<0.01,組內(nèi)與感染前相比;b:P<0.01;d:P>0.05,組間相比(與G1比較)。Note:a:P<0.05;c:P<0.01,Compared w ith that before infection in the same group;b:P<0.01,d:P>0.05,Compared between groups(w ith group G1).

組別Group術(shù)后(感染后)時(shí)間Postoperative(post-infection)time 10(7)d Day 10(7) 2 d Day 2 4(1)d Day 4(1) 6(3)d Day 6(3) 8(5)d Day 8(5)d G1 G2 G3 37.21±0.14 37.21±0.35 37.23±0.18 37.73±0.15a37.11±0.14b36.65±0.18b38.63±0.13c38.93±0.25cd37.43±0.57bc39.26±0.18c38.64±0.22cb38.12±0.33bc40.16±0.67c39.03±0.25cb38.92±0.22bc

2.3 血常規(guī)檢查

G1組大鼠術(shù)后WBC持續(xù)升高,感染后各時(shí)間點(diǎn)與G3組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與G2組相比在感染3 d后各時(shí)間點(diǎn)相比有差異;G2組WBC在感染后先升高,感染后5 d下降,但與前一時(shí)間點(diǎn)及G3組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;G3組則表現(xiàn)出先下降后升高的變化,與前一時(shí)間點(diǎn)相比雖無意義,但術(shù)后6、8、10 d與術(shù)后4 d相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2)。

表2 大鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(±s,n=8,×109/L)Tab.2 Comparison of peripheralw hite b lood cell counts in the rats(±s,n=8,×109/L)

表2 大鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(±s,n=8,×109/L)Tab.2 Comparison of peripheralw hite b lood cell counts in the rats(±s,n=8,×109/L)

注:a:P<0.05,組間相比(與G1比較);b:P<0.05;c:P>0.05組內(nèi)相比(前一時(shí)間點(diǎn))。No te:a:P<0.05,Compared betw een groups(w ith group G1);b:P<0.05,c:P>0.05 Compared w ith that of p revious tim e pointw ithin the sam e group.

組別Group術(shù)后(感染后)時(shí)間Postoperative(post infection)time 2 d Day 2 4(1)d Day 4(1) 6(3)d Day 6(3) 8(5)d Day 8(5)d 10(7)d Day 10(7) G1 G2 G3 9.33±3.31 8.46±3.29 8.55±2.33 16.95±8.64b13.93±3.20b6.57±2.73a28.23±7.99b19.44±6.92ac15.32±5.88ab33.16±9.94c15.93±5.93ac20.69±7.68a40.58±11.90c15.16±7.23ac22.75±8.13a

2.4 血?dú)饨Y(jié)果

G1組大鼠在感染后的前3 d pH值有顯著升高,隨后下降,組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; TCO2及HCO始終呈下降趨勢(shì),提示感染后因過度通氣而導(dǎo)致呼吸性堿中毒,隨著感染加重,出現(xiàn)代謝性酸中毒。HCO在組內(nèi)每一時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)相比無差異,但與感染前相比均有意義(P< 0.01);TCO2與前一時(shí)間點(diǎn)相比均有意義。

G3組三種指標(biāo)在組內(nèi)任一時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)相比均無意義(P>0.05),但術(shù)后8、10 d各指標(biāo)與術(shù)后2 d比較有差異,與G1相比在術(shù)后第6天各指標(biāo)均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表3)。

2.5 肝功結(jié)果

G1組ALT、TB在術(shù)后和感染后持續(xù)上升,組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)相比均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;G2組變化趨勢(shì)類似于G1組,與G1組相比,ALT的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TB高于G1組,術(shù)后8、10 d有差異;G3組ALT、TB在術(shù)后先下降后上升,ALT的變化值低于G1組,與之相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TB值則表現(xiàn)出高于G1組,并有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P <0.05),(見表4)。

表3 大鼠主動(dòng)脈血血?dú)獾淖兓?±s,n=8)Tab.3 The changes of arterial b lood gas concen tration(±s,n=8)

表3 大鼠主動(dòng)脈血血?dú)獾淖兓?±s,n=8)Tab.3 The changes of arterial b lood gas concen tration(±s,n=8)

注:a:P<0.01;c:P<0.05,組間比較(與G1組比較);b:P<0.05;d:P>0.05組內(nèi)相比,(前一時(shí)間點(diǎn));e:P<0.05,組間比較(與G3組比較)。Note:P<0.01,c:P<0.05,Compared between two groups,(compared w ith group G1);b:P<0.05,d:P>0.05,Compared w ith that of p revious time point in the same group;e:P<0.05,Compared between two group s(compared w ith group G3).

表4 各組肝功能變化比較(±s,n=8,U/L,m g/mL)Tab.4 Comparison of the changes of liver function(±s,n=8,U/L,m g/mL)

表4 各組肝功能變化比較(±s,n=8,U/L,m g/mL)Tab.4 Comparison of the changes of liver function(±s,n=8,U/L,m g/mL)

注:a:P<0.05,b:P>0.05組間比較(與G1相比);c:P<0.05,組內(nèi)比較(前一時(shí)間點(diǎn))。Note:a:P<0.05,b:P>0.05,Compared between two groups(comparedw ith group G1);c:P<0.05,Comparedw ith thatofp revious time pointw ithin the same group.

組別Group術(shù)后(感染后)時(shí)間Postoperative(post-infection)time 2 d Day 2 4(1)d Day 4(1) 6(3)d Day 6(3) 8(5)d Day 8(5) 10(7)d Day 10(7) G1 ALT 203.75±58.59 279.75±93.33c413.62±137.16c864.00±173.17c1077.25±296.46cTB 37.55±6.13 65.58±12.26b96.63±10.15 147.26±16.51 203.18±22.97 G2 ALT 197.00±24.73 239.38±39.58bc390.5±53.18bc776.62±121.22bc967.62±89.94cTB 37.13±17.03 48.43±14.26a103.08±33.75 189.36±26.83a274.98±50.47aG3 ALT 247.8±33.92 105.67±42.18a352.43±98.36b693.55±137.29a826.15±105.74bTB 30.29±11.38 27.46±5.77a98.25±26.81 213.94±47.53a368.35±21.32a

2.6 多器官病理學(xué)改變

G1肺臟和腎臟未見明顯的組織病理學(xué)改變。G1組隨著感染逐漸加重,大鼠肝臟匯管區(qū)部分受累、擴(kuò)大,炎性細(xì)胞浸潤逐漸增多,膽管細(xì)胞水腫,排列紊亂,極性消失;無明顯的中央靜脈炎,肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞水腫壞死,間質(zhì)水腫(見圖2,彩插7);G2組在感染后第5天除匯管區(qū)有炎細(xì)胞浸潤,中央靜脈周圍有明顯的淋巴細(xì)胞浸潤;G3組隨著術(shù)后3d匯管區(qū)僅有少量的淋巴細(xì)胞浸潤,隨著術(shù)后時(shí)間的延長,匯管區(qū)和中央靜脈周圍的淋巴細(xì)胞浸潤顯著增多(見圖3,彩插7)。

2.7 感染的鑒定

G1組各時(shí)間點(diǎn)腹水沾洗液培養(yǎng)24 h后均可見培養(yǎng)皿上散布的單克隆菌落生長,與我們復(fù)蘇培養(yǎng)的菌落形態(tài)一致;G2組在感染后第3天培養(yǎng)單克隆菌落數(shù)明顯減少,5 d后培養(yǎng)不再有菌落生長;G3組各時(shí)間點(diǎn)培養(yǎng)均未見有明顯的菌落生長。

3 討論

目前國際上通用的大鼠肝移植急性排斥研究的動(dòng)物是近交系DA→LEW大鼠,平均術(shù)后5 d左右出現(xiàn)黃疸,表現(xiàn)出免疫排斥的病理改變。本研究以DA大鼠為供體,LEW大鼠為受體,采用改良的Kam ada“雙袖套”法建立肝移植模型[2]。

據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道[3-5],腹腔感染的方法有多種,所致的感染嚴(yán)重程度也不一樣。目前常用的方法主要有盲腸結(jié)扎(CL)、盲腸結(jié)扎加穿孔(CLP)、腹腔內(nèi)自身糞便注射或活菌注射等。采用前二種方法建立的動(dòng)物模型感染較重,往往需要在感染后行腸道手術(shù)和營養(yǎng)支持,而且72 h死亡率較高,感染嚴(yán)重程度不易控制,很難行二次干預(yù)。肝移植術(shù)后在臨床感染發(fā)生中,感染部位主要是腹腔、膽道、外科傷口、肺和血流等[1]。因我們研究的感染模型是建立在免疫排斥反應(yīng)的基礎(chǔ)上,為盡可能的接近臨床感染,并使感染的嚴(yán)重程度便于控制,提高模型制作的可重復(fù)性,減少創(chuàng)傷,降低死亡率,我們最終選擇用活細(xì)菌注射的方法,建立肝移植術(shù)后腹腔感染模型,并選取臨床上相對(duì)比較常見的大腸埃希菌作為誘導(dǎo)感染菌[6]。

細(xì)菌濃度注射及術(shù)后何時(shí)注射細(xì)菌是本模型制作的又一難點(diǎn)。臨床上細(xì)菌感染的發(fā)生時(shí)間大多在術(shù)后2周內(nèi),從2 d到90 d不等,而移植排斥反應(yīng)則發(fā)生在術(shù)后5～30 d[6]。為盡量模擬臨床感染特點(diǎn),實(shí)驗(yàn)中采用術(shù)后5 d注射細(xì)菌,但由于免疫排斥反應(yīng)和急性感染的雙重作用,此時(shí)間點(diǎn)注射細(xì)菌大鼠的存活率低,僅為25%,故無法達(dá)到我們預(yù)期的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)。根據(jù)大鼠術(shù)后的恢復(fù)情況及上述相關(guān)的因素,我們選擇了術(shù)后3 d腹腔內(nèi)細(xì)菌注射,經(jīng)觀察,感染后大鼠的7 d存活率累計(jì)可達(dá)到37.5%左右,因此我們最終選擇在術(shù)后3 d給予腹腔細(xì)菌注射。

在實(shí)驗(yàn)過程中我們摸索了4個(gè)細(xì)菌濃度,5個(gè)注射量,結(jié)果顯示:過高的細(xì)菌濃度動(dòng)物早期死亡率(12～48 h)較高,無法完成后續(xù)的實(shí)驗(yàn);在G2組(即2×105cfu/mL),感染后1～3d大鼠的精神較差,體溫和WBC計(jì)數(shù)逐漸升高,呈現(xiàn)出感染的狀態(tài),同時(shí)腹腔沾液細(xì)菌培養(yǎng)陽性,也證實(shí)了感染的存在,但隨著病情的發(fā)展,大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)接近于G3組,尤其是在肝功方面,表現(xiàn)為TB的升高加快, ALT的變化與G1組比較雖然沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的值均低于G1組,并且腹腔細(xì)菌培養(yǎng)呈現(xiàn)陰性。這些提示我們:低濃度雖然可提高大鼠的生存時(shí)間,但機(jī)體可依賴于自身的免疫反應(yīng)而抗感染,因而為了達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求,在免疫排斥模型上,最終選定了5×105cfu/m L這個(gè)濃度,該濃度在不給予其他人為干預(yù)的情況下,感染可逐漸加重,并能達(dá)到較為理想的存活時(shí)間。

G1組大鼠在感染制模后第1天,表現(xiàn)出呼吸急促,易驚、行動(dòng)遲緩;直腸溫度、動(dòng)脈血WBC和pH值輕度的升高,TCO2和HCO3-下降,提示我們感染模型已成功建立,并因過度通氣出現(xiàn)呼吸性堿中毒;隨著感染天數(shù)的延長,大鼠狀態(tài)逐漸變差,直腸溫度不斷升高,WBC計(jì)數(shù)也隨之增加,pH下降,大鼠出現(xiàn)代謝性酸中毒;G1組大鼠的肝功能損害進(jìn)行性加重,且肝實(shí)質(zhì)的損害重于膽道的損傷(與G2、G3組比較)。大約在感染5 d左右部分大鼠出現(xiàn)口鼻或眼角出血,毛無光澤,蓬亂,并相繼死亡。解剖大鼠可見:無明顯腹水,肝脾明顯腫大,質(zhì)地較硬;胃腸充血水腫,顯著脹氣;雙腎及肺臟未見明顯改變。人為處死大鼠的腹腔沾液培養(yǎng)可見有散在的單克隆菌落生長。從組織病理切片中我們觀察到,感染后第1天,肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤,匯管區(qū)擴(kuò)大不明顯,但隨著感染的加重,上述改變逐漸加重,并有肝實(shí)質(zhì)的壞死,淋巴細(xì)胞浸潤,膽管細(xì)胞水腫,但始終未見明顯的中心靜脈炎。肺臟及腎臟未見有病理損害。這些結(jié)果提示我們:該模型未造成其他臟器的損害,大鼠的死亡原因系由于肝功能異常及重癥感染所致,在進(jìn)行相關(guān)研究時(shí)可排除非實(shí)驗(yàn)因素的干擾。

本模型具有以下幾個(gè)特點(diǎn):①可重復(fù)性強(qiáng),無需二次手術(shù),減少了動(dòng)物創(chuàng)傷,提高了存活率;②無多器官臟器的損害,便于排除其他器官因素的作用,受損因素單一,有利于目的研究;③模型的建立尚有不足之處,因模型建立在免疫排斥反應(yīng)的基礎(chǔ)上,動(dòng)物死亡率較高,存活時(shí)間相對(duì)較短,不利于長期觀察。

(本文圖2,3見彩插7。)

[1] Toniutto P,Fumo,Caldato M,et al.Favourab le ou tcom e of adefovir-d ip ivoxil treatm ent in acute de novo hepatitisB after liver transp lantation[J].Transp lantation,2004,77:472-473.

[2] Kam adaN,Calne RY.O rthotop ic liver transp lantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage[J].Transp lantation,1979,28(1):47-50

[3] W ittman DH.Intra-abdom inal infection-introduction[J].W orld J Surg,1990,14:145-147.

[4] Ryan NT,B lackburn Gl,C lowes HA,et al.D ifferential tissue sensitivity to elevated endogenous insu lin levels during experimental peritonitis in rats[J].M etabolism,1974,23(11): 1081.

[5] Nakatani T,Sato T,M arzella L,et al.Hepatic and system ic metabo lic responses to aerobic and anaerobic intra-abdom inal abscesses in a highly rep roducib le chronic rat model[J]. Circu lator Shock,1984,13(3):271.

[6] 張棟,張忠濤,劉建,等.肝移植術(shù)后的細(xì)菌感染[J].中華肝膽外科雜志,2004,10(5):297-300.

Estab lishm en t and Eva lua tion of a Ra tM odel of Per itonea l Bacter ia l In fection a fter L iver Tran sp lan ta tion

D INGLong1,YANG Yu2,DONG Jia-hong3
(1.Depar tm ent of General Surgery,The FirstA ffiliated Hosp ital of Jiam usiUniversity,Jiam usi 154000,China; 2.Departm ent of RegionalAnatom y,Co llege ofBasicM edicine of Jiam usiUniversity,Jiam usi 154002; 3.Departm ent of Hepato-B iliary Surgery,A ffiliated Hosp ital of General Hosp ital of the Chinese Peop le’s L iberation A rm y,Beijing 100853)

O b jective To establish a rat model of peritoneal bacterial infection after liver transp lantation. M ethod s To construct a dark Agou ti rat-to-Lew is(DA-to-LEW)rat model of liver transp lan tation.Peritoneal bacterial infection in the ratswas induced by intraperitoneal in jection of bacterial suspension.The liver function,b lood gas,b lood cell count and other indicators of the rat models were detected.ResultsThere was a high mortality rate in rats w ith bacterial injection at day 5 after liver transp lantation,therefore unfavorable for the fo llow ing study.It was better to inject the bacteria in an amountof 5×105cfu/m L at day 3 after liver transp lantation.The cum ulative 7-day survival rate of those rats after infection reached up to 37.5%.The infection becam e increasingly severe,the general conditionswereworsening, the rectal temperaturewas rising,theWBC countwas increased,the pH was decreased,liver dysfunctionwasp rogressively increased,and m etabo lic acidosis occurred in the rats.L iver parenchym al dam age was mo re p ronounced than that of bile ductal in juries,and the rats died one after another at about 5 days after infection.Patho logical exam ination of m u ltip le o rgans showed that the m ain cause of death of the ratswas liver dam age,w ithout accompanying lung and kidney dam ages. Conc lusion The resu lts of this study suggest that it is a successful m ethod to estab lish a rat model of peritoneal bacterial infection after liver transp lantation,and thismodel can be used in related experim ental researches.

L iver transp lantation; Imm uno logical sensitization;Bacterial infection,peritoneal;Rat

R-33

A

1005-4847(2010)01-0069-05

2009-07-21

丁隆(1978--),女,博士,主治醫(yī)師。E-m ail:d inglongjm s@126.com

董家鴻