白瑞娜,于 婧,衷敬柏

基因多態(tài)性決定了個(gè)體對(duì)疾病的易感性和臨床表現(xiàn),同時(shí)影響到疾病的發(fā)展轉(zhuǎn)歸,從基因多態(tài)性角度探討不同基因型在證候易感性方面的差異,是后基因組時(shí)代研究的熱點(diǎn)內(nèi)容。目前有不少學(xué)者從基因水平對(duì)高血壓病(EH)證候與基因多態(tài)性及中藥干預(yù)效應(yīng)相關(guān)性進(jìn)行了研究。

1 高血壓病相關(guān)基因研究概況

Tanira等[1]認(rèn)為,血壓變異的30%～50%與基因變異有關(guān),現(xiàn)今研究表明,高血壓病是一種多基因遺傳性疾病,確定高血壓病的易感基因有助于明確高血壓病的病理生理機(jī)制,也為制定高血壓防治策略提供理論依據(jù)。迄今為止被研究過的EH候選基因多存在于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)、交感神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)皮系統(tǒng)和某些信號(hào)通路等系統(tǒng)中[2],其相應(yīng)的基因位點(diǎn)及基因型見表1～表4。

表1 RAAS系統(tǒng)相關(guān)基因位點(diǎn)及基因型

表2 交感神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)基因位點(diǎn)及基因型

表3 高血壓病其他相關(guān)基因位點(diǎn)及基因型

表4 血管內(nèi)皮系統(tǒng)相關(guān)基因位點(diǎn)及基因型

到目前為止,尚未確定EH的候選基因,其原因可能是:①EH是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果,因此,人種、性別、生活環(huán)境等成為重要的混雜因素,而環(huán)境因素與EH的關(guān)系尚未得到深入的研究;②基因變異的性質(zhì)和等位基因頻率在不同人群間存在較大差異;③由于對(duì)候選基因多態(tài)性研究大多局限于單個(gè)基因,基因-基因間相互作用的研究未能深入開展,而與高血壓病有關(guān)的單個(gè)基因變異可能只是微效基因,其影響不足以引起EH,只有多個(gè)微效基因(有害的和保護(hù)性的)的綜合作用達(dá)到某一個(gè)閾值時(shí),在環(huán)境因素的參與下才導(dǎo)致高血壓病。

2 病證結(jié)合高血壓病證候與基因多態(tài)性

2.1 高血壓病陽亢證與基因多態(tài)性 中醫(yī)認(rèn)為,陰虛陽亢是高血壓病的主要病機(jī),肝陽上亢證是高血壓病常見的證候之一。據(jù)統(tǒng)計(jì),高血壓病中肝陽上亢證約占87.33%[3]。因此,研究該證型對(duì)于高血壓病的防治有著重要意義。

王光平等[4]為探討高血壓病肝陽上亢證、中風(fēng)肝陽化風(fēng)證的分子機(jī)制,應(yīng)用信使核糖核酸(mRNA)差異顯示技術(shù),研究了兩證患者與正常受試者的基因表達(dá)情況。結(jié)果顯示:使用15種不同的引物組合、聚丙烯酰胺凝膠電泳、放射自顯影后,有 28條區(qū)帶呈現(xiàn)不同的表達(dá)。其中,肝陽上亢證患者與正常受試者之間有14條區(qū)帶表現(xiàn)不同的表達(dá),肝陽化風(fēng)患者與正常受試者之間有11條區(qū)帶表達(dá)具有差異,而肝陽上亢患者與肝陽化風(fēng)患者有6條區(qū)帶表現(xiàn)不同的基因表達(dá)。在肝陽上亢患者、肝陽化風(fēng)患者與正常受試者之間,大部分不同表達(dá)的基因其表達(dá)為降低。這些結(jié)果初步表明,肝陽上亢患者、肝陽化風(fēng)患者與正常受試者之間存在基因表達(dá)的改變;肝陽上亢患者與肝陽化風(fēng)患者之間也存在基因表達(dá)的差別。

金益強(qiáng)等[5-7]采用西醫(yī)辨病和中醫(yī)辨證方法選擇研究對(duì)象,采用高效液相色譜(HPLC)方法檢測(cè)健康人30名、高血壓病肝陽上亢證70例及肝腎陰虛證患者30例血漿去甲腎上腺素(NE)和腎上腺素(E)含量,并采用Southern Blot方法分析上述3組間酪氨酸羥化酶(TH)基因多態(tài)性;用 PCR-SSCP方法分析高血壓病肝陽上亢證TH及單胺氧化酶A和B基因相關(guān)微衛(wèi)星多態(tài)性改變,結(jié)果顯示高血壓病肝陽上亢證患者血漿NE、E含量明顯高于健康人組及肝腎陰虛組,其TH基因有顯著擴(kuò)增,且TH微衛(wèi)星D11S4046中A1型明顯增高。同時(shí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)36只加灌附子湯方法制備高血壓病肝陽上亢證動(dòng)物模型,用免疫組織化學(xué)方法和原位雜交法分別測(cè)定該模型腎上腺組織T H蛋白質(zhì)及mRNA表達(dá)水平,結(jié)果顯示SHR肝陽上亢證模型腎上腺組織T H蛋白質(zhì)及mRNA表達(dá)增強(qiáng)。以上研究表明高血壓病肝陽上亢證具有TH基因顯著擴(kuò)增、T HmRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)增強(qiáng)的特點(diǎn)。高血壓病肝陽上亢證患者基因表達(dá)與正常受試者間有著一定的差異,存在其分子生物學(xué)基礎(chǔ),現(xiàn)今的研究多集中在交感神經(jīng)系統(tǒng)的部分基因上,其中酪氨酸羥化酶基因的過度表達(dá)可能是高血壓肝陽上亢證的分子機(jī)制,但仍有待進(jìn)一步深入研究驗(yàn)證。

2.2 高血壓病血瘀證與基因多態(tài)性 血瘀證在老年高血壓病患者中普遍存在,且有血瘀證的老年高血壓病患者發(fā)生心臟事件的概率也隨年齡增長(zhǎng)而增加[8]。深入研究高血壓病血瘀證的形成機(jī)制,可為指導(dǎo)老年高血壓病患者的治療用藥提供理論基礎(chǔ)。

馬民[9]通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)原發(fā)性高血壓病血瘀證患者熱休克蛋白(HSP70)與C-fos基因表達(dá)水平,并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)兩者基因表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析,表明在高血壓病血瘀證中,HSP70和C-fos基因均有較高的表達(dá),并有明顯的相關(guān)性,提示HSP70基因與C-fos基因表達(dá)可能與高血壓病血瘀證相關(guān)。

駱杰偉等[10,11]采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測(cè)ACE基因插入或缺失(I/D)多態(tài)性,并探討其與高血壓血瘀證的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D多態(tài)性與血瘀證(BSS)具有相關(guān)性,D等位基因可能是血瘀證的易感基因之一;攜帶ACE-DD基因型是患EH-BSS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,尤其在 EH病史前15年發(fā)生BSS心腦血管事件風(fēng)險(xiǎn)明顯增高。

魏世超等[12]采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)檢測(cè)醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344T/C多態(tài)性類型以探討CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性與高血壓病血瘀證(EH-BSS)的關(guān)系,研究提示攜帶CYP11B2 TC/CC基因型可能是重度EH-BSS易患因素之一。

在典型血瘀證的研究中,如腦梗死、心肌梗死與M THFR基因多態(tài)性和高同型半胱氨酸(Hcy)血癥有關(guān)[13,14],提示M THFR基因多態(tài)性與血瘀證有著密切關(guān)系。

駱杰偉等[15]為探討亞甲基四氫葉酸還原酶(MT HFR)基因C677T多態(tài)性與福建漢族人群高血壓病血瘀證易感性的關(guān)系,采用PCR-RFLP檢測(cè)MT HFR基因C677T多態(tài)性,研究提示M THFR基因CT/T T類型可能是漢族人群高血壓病血瘀證發(fā)病的易感危險(xiǎn)因素之一。

以上研究表明:病證結(jié)合高血壓病血瘀證與基因多態(tài)性有著密切關(guān)系,但尚未明確其相關(guān)后續(xù)基因,有關(guān)于血瘀證證候?qū)嵸|(zhì)的研究也有待于進(jìn)一步探討。

3 中醫(yī)藥干預(yù)相關(guān)性研究

近年來隨著藥物基因組學(xué)的發(fā)展,基因?qū)蛐陀盟幠Ｊ綉?yīng)運(yùn)而生,即依據(jù)個(gè)體基因型為患者選擇療效最佳的藥物和劑量,實(shí)現(xiàn)給藥個(gè)體化。

經(jīng)研究表明:依據(jù)基因?qū)虻那罢靶悦劳新鍫柖唐趥€(gè)體化降壓治療較傳統(tǒng)給藥模式更為安全、有效、經(jīng)濟(jì)[16];氨氯地平的抗頸動(dòng)脈粥樣硬化作用在不同ACE基因型的老年高血壓病患者間存在差異,Ⅱ基因型患者獲益最大[17]。長(zhǎng)期服用苯那普利可以明顯降低血壓、逆轉(zhuǎn)左室肥厚(LVH);其中ACE基因?yàn)镈D型的患者較其他基因型患者更易于LVH逆轉(zhuǎn),而Chymase(CM A)基因多態(tài)性與LVH逆轉(zhuǎn)不相關(guān);兩種基因間不存在交互作用[18]。不同ACE基因型患者對(duì)氫氯噻嗪(HCTZ)的療效存在差異,DD基因型患者降壓療效好于II、ID兩型患者,治療前血壓水平、醛固酮濃度與HCTZ的降壓療效有關(guān)[19]。但也有結(jié)論相反的研究,張曹進(jìn)等[20]研究未發(fā)現(xiàn)ACE2基因G9570A多態(tài)性與厄貝沙坦降壓療效有相關(guān)性。

中醫(yī)藥治療高血壓病即是針對(duì)不同個(gè)體進(jìn)行辨證論治,根據(jù)不同證型,其用藥也不一致,藥物基因組學(xué)雖為中醫(yī)藥治療高血壓病提供了客觀依據(jù),但是尚未有效的開展,其研究重點(diǎn)在于調(diào)節(jié)基因和基因產(chǎn)物的異常表達(dá)以及基因產(chǎn)物的功能方面。

盧全生等[21]通過觀察國(guó)人原發(fā)性高血壓患者血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)1型受體(AT1R)基因A1166C多態(tài)性的分布,及其與高血壓中醫(yī)辨證分型和降壓藥物療效的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)在中國(guó)漢族人群中,血管緊張素Ⅱ的1型受體AC基因型的C等位基因可能是高血壓的一個(gè)易感基因;而高血壓病中醫(yī)辨證分型可能與是否攜帶C等位基因無關(guān),清心膠囊和卡托普利的降壓效應(yīng)與是否攜帶C等位基因無關(guān);且在不同基因型的EH患者中,其血壓、血糖、血脂及血漿AngⅡ、內(nèi)皮素(ET)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)未見明顯差異,提示基因型對(duì)高血壓的影響可能未通過糖脂代謝及血漿ET、CGRP、AngⅡ系統(tǒng)。

鄢東紅等[22]為研究自發(fā)性高血壓大鼠肝陽上亢證模型的TH基因表達(dá)水平及潛陽方對(duì)其影響,選擇Wistar大鼠品系,將其分為正常對(duì)照組、自發(fā)性高血壓組、肝陽上亢組、潛陽方治療組,采用免疫組織化學(xué)方法和原位雜交法分別對(duì)各組測(cè)定其模型腎上腺組織 TH蛋白質(zhì)及 mRNA表達(dá),探討所復(fù)制的SHR肝陽上亢證模型TH基因表達(dá)特點(diǎn),以期從分子水平探討自發(fā)性高血壓大鼠肝陽上亢證的病理基礎(chǔ)。發(fā)現(xiàn)SHR肝陽上亢證模型T H蛋白質(zhì)及mRNA表達(dá)均明顯增強(qiáng),經(jīng)用具有平肝熄風(fēng)作用的潛陽方治療后,其表達(dá)水平下降。

徐樹楠等[23]采用自發(fā)性高血壓大鼠加灌附子湯的方法制備肝陽上亢模型,觀察潛陽通絡(luò)方對(duì)肝陽上亢型高血壓大鼠血壓及血漿ET、CGRP的影響,發(fā)現(xiàn)與正常大鼠相比,潛陽通絡(luò)方能明顯降低肝陽上亢型高血壓大鼠血壓、血漿中CGRP含量升高、降低血漿中ET含量,提示潛陽通絡(luò)方可通過改善血管的舒縮功能而達(dá)到較好的降壓效果。對(duì)高血壓模型大鼠的降壓作用與升高CGRP含量,降低ET含量密切相關(guān)。中醫(yī)藥辨證論治高血壓病有其獨(dú)到之處,深入分析某一方劑作用于相應(yīng)證型患者前及取效后兩種狀態(tài)下靶基因的表達(dá)差異來探尋證的相關(guān)基因[24],有助于闡明證候和辨證論治的分子機(jī)制,而藥物基因組學(xué)的發(fā)展也給中醫(yī)現(xiàn)代化提供了客觀的手段。

4 證候(表型)與候選基因多態(tài)性的研究思考

人類基因組學(xué)后基因組時(shí)代研究的方法學(xué)內(nèi)容與中醫(yī)學(xué)的整體觀、辨證觀有很多相似之處,為全面認(rèn)識(shí)證候?qū)嵸|(zhì)提供了可能的突破口[25],也給中醫(yī)現(xiàn)代化帶來了新的機(jī)遇。上述學(xué)者的前瞻性研究為今后探討證候與候選基因多態(tài)性的研究有很大的借鑒意義,但不可否認(rèn)的是當(dāng)今這方面的研究還處于初始的探索階段,由此引起了諸多值得探討和思考的問題。

分子遺傳機(jī)制是高血壓病證候?qū)嵸|(zhì)研究的重要切入點(diǎn)之一,在多基因遺傳性疾病中,基因和環(huán)境因素共同起著重要作用,基因變異而產(chǎn)生的多態(tài)性既是中醫(yī)證候產(chǎn)生的基礎(chǔ),亦是中藥可能通過多途徑、多環(huán)節(jié)而影響表型,改善臨床癥狀,取得療效的生物學(xué)基礎(chǔ)。但這種突變常常出現(xiàn)在多個(gè)基因,或一個(gè)基因的多個(gè)位點(diǎn),常常是多位點(diǎn)突變才產(chǎn)生表型的變化,同時(shí)研究多個(gè)基因變異及其相互影響將更有意義[26]。

根據(jù)“有是證,用是方”的原則,以病證結(jié)合、方證相應(yīng)為主線研究高血壓病證候與候選基因相關(guān)性是新的思路和方法,有助于進(jìn)一步明確高血壓病證候的相關(guān)候選基因和方藥治療的優(yōu)勢(shì)基因型。此外,從方證結(jié)合的思路來干預(yù)臨床試驗(yàn)可克服動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的不足,也不失為一種可取的途徑。

中醫(yī)藥治療高血壓病在某些方面或環(huán)節(jié)有著西醫(yī)無法比擬的優(yōu)勢(shì),深入探討EH相關(guān)基因的基因多態(tài)性,對(duì)降壓藥物的選擇有著積極的意義,從而使治療更有效,副反應(yīng)更少,也為開發(fā)和研制新一代降壓中藥提供理論依據(jù)[21]。藥效基因組學(xué)的發(fā)展更有利于明確高血壓病的優(yōu)勢(shì)基因型,為進(jìn)一步闡明病證結(jié)合高血壓病證候的相關(guān)候選基因及用藥個(gè)體化提供客觀依據(jù)。

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