林 玳，鄭懷宇

(浙江省舟山醫(yī)院城北院區(qū)藥劑科，浙江 舟山 316000)

多索茶堿是一種新型的甲基黃嘌呤衍生物，具有平喘、抗炎和鎮(zhèn)咳作用，療效較茶堿強，不良反應(yīng)較茶堿少。其血藥濃度測定多采用高效液相色譜法，但條件各異。筆者參照有關(guān)文獻(xiàn)[1-4]，并經(jīng)多次試驗，最終確定用反相高效液相色譜法，以苯巴比妥作內(nèi)標(biāo)，乙腈-水為流動相，采用梯度洗脫方法對血清中多索茶堿濃度的測定方法進(jìn)行改進(jìn)研究，并對用藥患者進(jìn)行多索茶堿血濃度的測定，效果很好，報道如下。

1 儀器與試藥

Beckman Coulter高效液相色譜儀，包括125泵、166檢測器。乙醚(分析純，上?；瘜W(xué)試劑總廠，批號為070901);乙腈為高效液相色譜淋洗液(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為20090413);多索茶堿(浙江北生藥業(yè)有限公司，批號為070901，純度大于99%);苯巴比妥(上海新亞藥業(yè)有限公司，批號為081003，純度大于98.5%);水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Ultrasphere C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Ultrasphere C18保護(hù)柱(45 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-水，0～8 min為17%乙腈，8～9 min為17%乙腈-45%乙腈，9～15 min為 45%乙腈，15～18 min為45%乙腈-17%乙腈;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:210 nm;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 血樣處理

取血清100 μL置具塞試管中，加內(nèi)標(biāo)液 20 μL，混勻，加乙醚 5 mL，旋渦混合2 min，放置 15 min，以 4 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心15 min，取乙醚提取液4 mL，置離心管中，氮吹揮干乙醚，用50%乙腈100 μL復(fù)溶，進(jìn)樣測定，高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密稱取苯巴比妥適量，配成質(zhì)量濃度為40 mg/L的溶液，作為內(nèi)標(biāo)液;精密稱取多索茶堿適量，用甲醇配成質(zhì)量濃度為500 mg/L的溶液，吸取0.15 mL至試管中，用氮氣吹干甲醇，加3 mL空白血漿超聲復(fù)溶，再用空白血漿依次稀釋成 25.00，12.50，6.25，3.125，1.56，0.78，0.39 mg/L的多索茶堿標(biāo)準(zhǔn)血樣，按血樣處理方法處理含多索茶堿的標(biāo)準(zhǔn)血樣。結(jié)果多索茶堿質(zhì)量濃度在0.39～25.00 mg/L范圍內(nèi)，與多索茶堿跟內(nèi)標(biāo)峰面積比值的線性關(guān)系良好，回歸方程為 Y=7.509 8 X-0.130 0，r=0.999 8(n=7)。多索茶堿的最低檢測濃度為0.2 mg/L(S/N≥3)。

回收率與精密度試驗:選用0.78，6.25，25.00 mg/L不同質(zhì)量濃度的對照品溶液進(jìn)行回收率與精密度測定(n=5)。結(jié)果見表1。

2.4 樣品檢測

對臨床靜脈滴注多索茶堿注射液0.2 g+0.9%氯化鈉注射液100 mL的6例患者，于滴注完畢后15 min取靜脈血進(jìn)行測定，測得質(zhì)量濃度分別為 5.54，4.67，4.40，3.40，0.78，0.59 mg/L，平均3.23 mg/L，與有效質(zhì)量濃度5～20 mg/L有一定的差距，與文獻(xiàn)[2，4]報道的基本一致。1例患者靜脈滴注多索茶堿注射液0.2 g，20 h后取血測定，測得血藥濃度為0.64 mg/L。這些均提示臨床用藥劑量與方法有待改進(jìn)。可以確定的是，患者合用的茶堿、二羥丙茶堿、甲強龍、氫化潑尼松、地塞米松、氨溴索、多潘立酮、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢唑肟、阿奇霉素、卡巴克洛、非洛地平、維生素C、維生素B6對測定均無干擾。

表1 多索茶堿的回收率、日內(nèi)和日間精密度試驗結(jié)果(n=5)

3 討論

反相高效液相色譜法能很好地分離多索茶堿、內(nèi)標(biāo)、血漿雜質(zhì)及茶堿，其線性范圍、回歸系數(shù)、回收率和日內(nèi)、日間精密度的 RSD均符合生物樣本分析方法的要求，可用于多索茶堿血濃度的測定。

文獻(xiàn)報道的內(nèi)標(biāo)有咖啡因、茶堿、苯巴比妥，有些食物含咖啡因。茶堿為多索茶堿的微量代謝物，作為內(nèi)標(biāo)不合適，因此選用與多索茶堿合用幾率很小的苯巴比妥作為內(nèi)標(biāo)。選用乙腈-水作為流動相，在乙腈-水的體積比為17∶83時多索茶堿與血漿雜質(zhì)、茶堿分離較好，保留時間適宜，但與巴比妥的保留時間相差大。在多索茶堿出峰后提高流動相中乙腈的比例，可使苯巴比妥出峰時間提前并縮短分析時間。

致謝:衷心感謝舟山醫(yī)院呼吸內(nèi)科李略副主任醫(yī)師對多索茶堿血濃度測定工作的支持！

[1]陳錦珊，杜青云，黃惠麗，等.反相高效液相色譜法測定血清中多索茶堿濃度[J].海峽藥學(xué)，2003，15(4):28.

[2]王淑群，吳歷峰，熊建華，等.HPLC法測定血清中多索茶堿濃度[J].中國臨床藥學(xué)雜志，2003，12(6):347.

[3]付世江，霍寶方，孫吉臻，等.口服多索茶堿片Ⅰ期臨床試驗研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，1998，14(4):222.

[4]孔秋芹，楊水新.茶堿類藥物的血藥濃度監(jiān)測方法與應(yīng)用[J].福建醫(yī)藥雜志，2005，27(6):149.