鄔蘇曉,肖正中

(廣東省韶關(guān)學院農(nóng)業(yè)科學系,廣東韶關(guān) 512005)

豬大腸埃希菌病是由致病性大腸埃希菌感染引起豬的一種腸道傳染病,臨床主要引起仔豬黃、白痢和水腫病的發(fā)生,是豬場的常見病和多發(fā)病。隨著我國養(yǎng)豬業(yè)集約化程度的不斷提高,病原性大腸埃希菌對養(yǎng)豬業(yè)造成的損失日超嚴重,嚴重影響著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展?？咕幬锖拓i大腸埃希菌疫苗在養(yǎng)豬業(yè)上的廣泛使用,極大地促進了現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。但在養(yǎng)豬生產(chǎn)中對抗菌藥的廣泛使用及不規(guī)范用藥不僅導致了大腸埃希菌多重耐藥性的產(chǎn)生,同時也造成了畜產(chǎn)品藥物殘留而嚴重危害人類健康及公共衛(wèi)生[1-2]。

我國中草藥資源豐富,許多中草藥已經(jīng)被證實具有抗菌作用,并被廣泛使用[3]。中草藥以成本低廉、效果持久、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等特點日益受到人們的青睞。因此,使用中草藥代替抗菌藥物對促進畜禽生長及抗病都具有重要的意義[4-5]。馬齒莧為馬齒莧屬植物的全草,其性味酸、寒,具有清熱解毒、散血消腫、抑菌消炎、潤腸止痢等作用[6-7]。馬齒莧煎劑對各種類型的痢疾桿菌、傷寒桿菌、金黃色葡萄球菌有抑制作用,對某些致病性真菌也有抑制作用。近年來的多項試驗也證明,馬齒莧對提高畜禽生產(chǎn)力,減少和預(yù)防畜禽疾病起著重要作用[8-11]。本試驗以豬大腸埃希菌為試驗對象,以馬齒莧為受試藥物,通過對其體內(nèi)外抗菌作用的觀察和分析,旨在為豬大腸埃希菌病的臨床防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 馬齒莧,購自韶關(guān)市美康大藥房。

1.1.2 培養(yǎng)基 普通瓊脂培養(yǎng)基、牛肉膏湯培養(yǎng)基均按常規(guī)方法制備,高壓滅菌,置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試驗菌株 豬大腸埃希菌,由本實驗室分離保存。

1.1.4 實驗動物 清潔級ICR小鼠55只,購自中山大學實驗動物中心,雌雄各半,體重18 g～22 g,3周齡～4周齡。

1.2 方法

1.2.1 馬齒莧水提取物的制備 馬齒莧50 g,水煎法制備水提物,經(jīng)離心、過濾、濃縮使其濃度相當于1 g/mL生藥,調(diào) pH 至7.4左右,高壓蒸汽滅菌,-20℃保存待用。

1.2.2 受試菌株的培養(yǎng) 將豬大腸埃希菌接種于牛肉膏湯培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)16 h～18 h,連續(xù)培養(yǎng)3代,以恢復其活力。用滅菌生理鹽水稀釋培養(yǎng)液,使其濁度分別達到1×107cfu/mL和1×109cfu/mL,備用。

1.2.3 馬齒莧體對豬大腸埃希菌體外最小抑菌濃度測定 采用試管兩倍稀釋法測定馬齒莧對豬大腸埃希菌的體外最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)。取6支滅菌試管,分別加培養(yǎng)基2 mL,第1管加2 mL滅菌中藥水提物,混勻后吸取2 mL加至第2管,依次類推,直至第4管,第4管吸取2 mL棄去,使之成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16的濃度梯度,然后在1號～4號試管內(nèi)各加入1×107cfu/mL 菌液50 μ L,第5管、6管分別作培養(yǎng)基對照和中藥對照。將6支試管置于37℃溫箱培養(yǎng)24 h觀察細菌生長情況,以無菌生長的最低稀釋濃度為最小抑菌濃度(MIC)。

1.2.4 豬大腸埃希菌對小鼠最小致死量測定 小鼠20只,分為4組,每組5只;分別腹腔注射1×109cfu/mL大腸埃希菌新鮮培養(yǎng)液 0.1、0.2、0.3、0.4 mL,隔離飼養(yǎng),連續(xù)觀察72 h,記錄小鼠死亡情況。

1.2.5 小鼠體內(nèi)抗菌作用 小鼠35只,隨機分為7組,每組5只。其中試驗預(yù)防組在注射菌液前1 h先腹腔注射一定劑量的1 g/mL中藥水提物,1 h后再注射最小致死量菌液;試驗治療組在注射最小致死量菌液后1 h用1 g/mL的中藥水提物適量給以治療,8 h后用同樣劑量重復給藥1次;感染對照組小鼠注射最小致死菌量,空白對照組注射蒸餾水。24 h～48 h后觀察小鼠死亡情況。

2 結(jié)果

2.1 馬齒莧對豬大腸埃希菌MIC測定

用試管二倍稀釋法測定馬齒莧對豬大腸埃希菌體外抑菌作用。結(jié)果表明,馬齒莧對豬大腸埃希菌具有較強的體外抑菌作用,其最小抑菌濃度(MIC)為 0.125 g/mL(表 1)。

表1 馬齒莧對豬大腸埃希菌體外最小抑菌濃度(MIC)Table 1 M IC of Portulaca on E.coli in v itro

2.2 豬大腸埃希菌對小鼠最小致死量測定

通過小鼠腹腔注射不同劑量豬大腸埃希菌新鮮培養(yǎng)菌液觀察小鼠死亡情況,結(jié)果顯示豬大腸埃希菌對小鼠最小致死量為0.3×109cfu(表2)。

表2 豬大腸埃希菌對小鼠最小致死量Table 2 Minimum lethal dose of E.coli in mice

2.3 馬齒莧對感染豬大腸埃希菌小鼠的體內(nèi)抗菌試驗

以小鼠為試驗動物進行馬齒莧對豬大腸埃希菌的預(yù)防性和治療性試驗,結(jié)果表明,馬齒莧在小劑量時對豬大腸埃希菌無抗菌作用,增大劑量藥物本身的毒副作用會致死小鼠,剖檢可見小鼠腸道脹氣(表3)。

3 討論

本試驗表明,馬齒莧對豬大腸埃希菌具有較強的體外抑菌作用,但體內(nèi)抗菌作用顯示無效,其中小劑量藥物對豬大腸埃希菌無抗菌作用,增大劑量藥物本身的毒副作用又會致死小鼠。

馬齒莧在我國分布廣泛,其諸多的生理功能及臨床應(yīng)用多見報導。張昆仲等[12]報導馬齒莧對貓心收縮力有加強作用并使血壓降低,伴隨呼吸興奮及腸管張力降低、腸蠕動減弱的作用;劉霞[13]報道,馬齒莧對小鼠小腸運動具有抑制作用;李洋[14]報道,馬齒莧提取物對離體大鼠的小腸平滑肌具有興奮作用,但當馬齒莧提取物超過一定量時,小腸平滑肌活動由興奮轉(zhuǎn)為抑制。本試驗中馬齒莧水提物1 500 mg/kg腹腔注射造成小鼠腸道脹氣可能和馬齒莧劑量過大導致小鼠腸道蠕動過慢有關(guān)。

表3 馬齒莧對豬大腸埃希菌的預(yù)防性和治療性試驗Table 3 Prevention and therapy experiments of Portulaca against E.coli

馬齒莧具有良好的清熱解毒、抗菌消炎、散血消腫之功效,其能提高畜禽生產(chǎn)力,減少和預(yù)防畜禽疫病,且無藥物殘留,具有較高的開發(fā)利用價值,但獸醫(yī)臨床使用須注意選擇合適的用藥途徑,適當?shù)膭┬图皠┝?以提高其療效,減少其毒副作用。

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[14]李 洋.馬齒莧提取物對大白鼠離體子宮平滑肌的影響[EB].http://dwslx.nefu.edu.cn/html/syjxq/kclwzs/MaChiXian-TiQuWuDuiDaBaiShuLiTiZiGongPingHuaJiDeYingXiang/2009-03-28.