楊軍文,張軼清,張 嵐

(皖南醫(yī)學院附屬弋磯山醫(yī)院婦產(chǎn)科,安徽 蕪湖 241001)

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤,淋巴道轉(zhuǎn)移是主要的轉(zhuǎn)移途徑,也是影響患者生存的重要因素之一,臨床多以有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移來評估預后及指導治療。筆者采用免疫組化的方法檢測宮頸癌組織中的微淋巴管密度(LMVD),旨在探討微淋巴管生成特點及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集皖南醫(yī)學院附屬弋磯山醫(yī)院2000年9月至2006年5月經(jīng)根治性手術治療的50例宮頸癌標本,標本入選標準:①組織學已確診為鱗狀細胞癌;②患者術前無化療或放療史。入選患者年齡25～70歲,中位年齡47歲。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期標準:Ⅰa2-Ⅰb期27例、Ⅱa期23例;癌組織按細胞分化程度分為:I級10例,Ⅱ級29例,Ⅲ級11例;50例標本中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例。另選取同期因子宮脫垂行全子宮切除的15例宮頸組織作對照組,年齡44～62歲,中位年齡51歲,病理報告均未提示癌變。

1.2 研究方法

取宮頸癌及宮頸組織組織蠟塊,4 μ m層厚連續(xù)切片,采用免疫組化法,按照試劑盒提供步驟嚴格操作。所有試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 結(jié)果判定方法

按照Straume O.等[1]報道的方法。先在4倍物鏡下掃描腫瘤邊緣區(qū)、腫瘤中心區(qū),選擇其中高淋巴管密度區(qū)。然后在20倍物鏡下計數(shù)被podoplanin抗體染成棕黃色的淋巴管數(shù)目,結(jié)果以5個20倍物鏡視野下微淋巴管數(shù)目的均數(shù)表示。分別測定腫瘤邊緣區(qū)、中心區(qū)及正常宮頸組織的LMVD。

1.4 統(tǒng)計學方法

用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件,對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。依據(jù)資料性質(zhì)進行卡方檢驗和兩獨立樣本t檢驗,顯著性水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織微淋巴管的生成特點

正常宮頸組織Podoplanin陽性染色微淋巴管多呈擴張狀,形態(tài)大小不一,壁較薄,其 LMVD為3.2±2.5。但宮頸癌組織中見有明顯的Podoplanin染色陽性微淋巴管,其 LMVD為9.1±4.8。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌中可在微淋巴管內(nèi)發(fā)現(xiàn)癌栓,甚至在部分淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的宮頸癌微淋巴管內(nèi)也發(fā)現(xiàn)癌栓。在宮頸癌組織中,腫瘤邊緣和中心均可見微淋巴管(表1),但其分布和形態(tài)具有明顯的異質(zhì)性:①分布差異。腫瘤邊緣區(qū)微淋巴管數(shù)目多,其LMVD為12.5±4.6,而腫瘤中心區(qū)微淋巴管數(shù)目少,其LMVD為 5.9±2.1,2者差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。②形態(tài)差異。腫瘤邊緣區(qū)微淋巴管多為管腔較大,為中空橢圓形呈擴張的功能淋巴管,而腫瘤中心區(qū)微淋巴管多為閉鎖的條索狀,或呈狹長的裂隙狀,為無功能淋巴管。

表1 正常宮頸和宮頸癌組織Podoplanin標記LMVD比較()

表1 正常宮頸和宮頸癌組織Podoplanin標記LMVD比較()

與正常宮頸組織、宮頸癌組織中心區(qū)相比,△P＜0.01;與正常宮頸組織相比,△△P＜0.05

組別 n LMVD正常宮頸組織 15 3.2±2.5宮頸癌組織 50腫瘤邊緣區(qū) 50 12.5±4.6△腫瘤中心區(qū) 50 5.9±2.1△△

2.2 宮頸癌LMVD與盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關系

宮頸癌中心區(qū)LMVD與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無明顯相關性。但在宮頸癌邊緣區(qū)非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組淋巴管密度為8.5±4.7,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組淋巴管密度為19.9±3.2,2組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),宮頸癌邊緣區(qū)淋巴管密度與是否有淋巴轉(zhuǎn)移有顯著相關(P＜0.01)。

3 討論

探索惡性腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機制,以及檢測與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關的因素來判斷腫瘤預后己經(jīng)成為近十年來廣大學者的重要研究課題。隨著血管內(nèi)皮生長因子C和D(VEG C和VEGF D)的克隆成功及淋巴管內(nèi)皮細胞特異性標記物(Podoplanin,LYVE1)的相繼發(fā)現(xiàn),為腫瘤淋巴管生成研究提供了較為可靠的手段,但有關腫瘤是否有新生淋巴管及淋巴管在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用一直存在爭論[2-3],傳統(tǒng)觀點認為腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移是一個被動過程,腫瘤細胞通過已有的局部淋巴管轉(zhuǎn)移到區(qū)域淋巴結(jié),其中淋巴管內(nèi)皮細胞只是起到被動的作用。本研究采用Podoplanin這種特異性抗體,通過免疫組化方法標記宮頸癌組織中微淋巴管,探討其生成特點以及在淋巴轉(zhuǎn)移結(jié)中的作用。

許多研究提示多種惡性腫瘤組織中具有新生淋巴管[4],本研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌組織內(nèi)部及癌邊緣區(qū)組織內(nèi)均存在有微淋巴管,但其微淋巴管主要分布在腫瘤邊緣區(qū),同時形態(tài)具有異質(zhì)性,腫瘤邊緣區(qū)的微淋巴管分布較密集,呈不同程度的擴張狀態(tài),而腫瘤中心區(qū)淋巴管分布較稀疏,多呈條索狀,甚至完全缺乏管腔。癌栓多見于邊緣區(qū)擴張的微淋巴管內(nèi)。分析其原因可能為腫瘤細胞生長對周圍淋巴管產(chǎn)生壓力或直接侵入管腔,致其萎陷甚至潰破。而腫瘤邊緣區(qū)微淋巴管呈不同程度的擴張狀態(tài),并有不同程度的破壞現(xiàn)象,致使管壁通透性增高,且癌邊緣區(qū)淋巴管低壓、低張、大流量,適合腫瘤細胞的外滲和播散,為癌轉(zhuǎn)移提供了有利的條件。提示宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能機制是通過癌組織邊緣區(qū)微淋巴管引起的腫瘤的轉(zhuǎn)移,是一個多階段、多步驟并涉及到多因素的過程。此過程中,多種因素相互作用導致腫瘤的轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學特征。筆者認為腫瘤邊緣區(qū)微淋巴管,可能是宮頸癌淋巴管生成的形態(tài)學特征和淋巴道轉(zhuǎn)移的解剖學基礎。

近來多數(shù)研究表明腫瘤微淋巴管生成能促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,但是也有不一致的報道,Brimer P.等[4]在卵巢癌的研究中就認為MLD與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關,Williams C.S.等[5]在乳腺癌的研究中認為MLD與腫瘤的侵襲性呈相反關系,腫瘤主要是破壞淋巴管而不是促進淋巴管形成。本實驗結(jié)果顯示宮頸癌組織中非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組微淋巴管密度為8.5±4.7,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組微淋巴管密度為19.9±3.2,2組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。宮頸癌邊緣區(qū)淋巴管密度與是否有淋巴轉(zhuǎn)移有顯著相關(P＜0.01)。提示癌周微淋巴管密度升高,癌周微淋巴管越豐富,與腫瘤細胞接觸的機會就越多,形成淋巴管道轉(zhuǎn)移的機會就越多一些。因此淋巴管生成在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中具有重要作用。

綜上所述,宮頸癌中微淋巴管分布存在區(qū)域異質(zhì)性,以邊緣區(qū)分布最為密集,且該區(qū)微淋巴管密度增高與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲性生物學行為相關。對腫瘤微淋巴管生成的啟動及機制進行深入研究,將有助于進一步了解腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移過程,從而找到抑制腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的靶點或預測腫瘤患者預后的指標,為腫瘤生物學治療提供依據(jù)。

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