劉加元 周偉

(1.湖北省中山醫(yī)院藥學(xué)部中藥房 武漢 430033; 2.湖北省藥品檢驗所 武漢 430028)

雞血藤片質(zhì)量控制研究①

劉加元1周偉2

(1.湖北省中山醫(yī)院藥學(xué)部中藥房 武漢 430033; 2.湖北省藥品檢驗所 武漢 430028)

目的 對雞血藤片進行質(zhì)量控制。方法 采用薄層色譜法(TLC)鑒別雞血藤片中的芒柄花素,用高效液相色譜法測定其中芒柄花素的含量;以十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑,乙腈:水(33:67)為流動相,檢測波長250nm,柱溫30℃,流速1.0mL/min。結(jié)果 TLC鑒定方法專屬性強,芒柄花素在進樣量為0.01025ug～0.5125ug／mL(r=1.000)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。測得回收率平均值為99.10%,RSD為0.79%(n=6);供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論 該法簡便、迅速、結(jié)果準確可靠、重復(fù)性好,可用于雞血藤片的質(zhì)量控制。

芒柄花素 質(zhì)量控制 薄層色譜法 高效液相色譜法

雞血藤片主要用于補血活血,舒筋活絡(luò),可治療腰膝酸痛、肢體麻木、風(fēng)濕麻痹、經(jīng)閉、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等[1]。本研究采用高效液相色譜法測定雞血藤片中其中一個有效成分芒柄花素的含量,且用薄層色譜法鑒定芒柄花素,建立簡便、迅速、準確、專屬性強的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

DIONEX高效液相色譜儀;ULTIMAT3000;分析天平AG135和BS210S(梅特勒-托利多儀器有限公司);UV-500紫外分光度計 (英國熱電公司);芒柄花素對照品(批號:111703-200501)均由中國藥品生物制品檢定所提供;利川香連藥業(yè)(批號:090601、090701、090801);洛陽天生藥業(yè)(090109);江西中興漢方藥業(yè)(090102);乙腈為色譜純,水為重蒸水;其它試劑均為分析純。

2 質(zhì)量控制

2.1 性狀

本品為包糖衣型的片劑。

2.2 鑒別

取本品,除去糖衣,研細,取約2g,加甲醇30mL,超聲處理30min,濾過,液蒸干,殘渣加水20mL使溶解,用乙醚振搖提取3次,每次50mL,合并乙醚提取液,蒸干,殘渣加無水乙醇5mL使溶解,作為供試品溶液;另取雞血藤對照藥材1g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗,吸取上述二種溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷∶乙酸乙酯(2∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105℃加熱5min,置紫外燈下(365nm)檢視。檢驗結(jié)果:供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

色譜柱:HypersilODSC18(150mm×4.6mm,5um);流動相:乙腈∶水(33∶67);檢測波長250nm;流速:1.0mL/min;柱溫為30℃。取“3.2”、“3.3”、“3.4”項下供試品、標準品、空白輔料溶液進樣測定,結(jié)果空白輔料對主藥無干擾。

3.2 供試品的溶液制備。

取本品20片,除去包衣,精密稱定,研細,取約2g,精密稱定,精密加入甲醇50mL,稱定重量,加熱回流提取1h,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液25mL于蒸發(fā)皿,揮干溶劑,殘渣加水20mL分次溶解并轉(zhuǎn)移到分液漏斗,用乙酸乙酯振搖提取5次,每次30mL,合并乙酸乙酯提取液,揮干溶劑,殘渣加甲醇使溶解,轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得

3.3 標準品溶液制備

取芒柄花素對照品適量,精密稱定,用甲醇制成5.125μg/mL的溶液,即得。

3.4 空白輔料溶液的制備

取缺雞血藤提取物的陰性對照樣品,照供試品溶液制備方法制備,即得。分別吸取上述3種溶液各10uL,按含量測定方法進行測定,結(jié)果在陰性對照溶液色譜圖中,在芒柄花素峰位置處無干擾色譜峰。

表1 芒柄花素回收率試驗結(jié)果

3.5 線性關(guān)系考察

取芒柄花素對照品適量,加甲醇制成系列濃度的標準品溶液(μg/mL:1.025、2.05、5.125、10.25、20.5、25.625、51.25)。照含量測定項下測定峰面積。以芒柄花素濃度對峰面積進行線性回歸,得回歸方程Y=1.04X-0.401r=1.000,芒柄花素在進樣量為0.01025 μ g～0.5125 μ g(進樣量10μL)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

3.6 穩(wěn)定性試驗

取雞血藤片(批號:090102),照含量測定項下制備供試品溶液。按含量測定項下方法在0、1、2、3、4、5、6h進樣進行峰面積測定,結(jié)果:RSD為0.7%,表明供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗

取同一批雞血藤片共稱取6份(批號:090102),按“3.2”項下方法制備供試品溶液,并按“3.1”項下色譜條件進行測定,以芒柄花素的含量計算。結(jié)果,芒柄花素的RSD為0.87%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。

3.8 回收率試驗

取已知芒柄花素含量的雞血藤片(批號:090102含量為74.01ug/g)6份,每份約1g,分別加入芒柄花素對照品85.2ug,按含量測定項下測定。結(jié)果測得回收率平均值為99.10%,RSD為0.79%,表明方法回收率符合相關(guān)規(guī)定(表1所示)。

3.9 樣品含量測定

分別取3個廠家的雞血藤各20片,按“3.2”項下方法制備供試品液,精密吸取10uL進樣分析,記錄色譜;另取“3.4”項下標準品溶液,同法測定,按外標法以峰面積計算供試品的含量,結(jié)果見表2

4 討論

我們對標準品溶液在200～300nm內(nèi)進行紫外光掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn)在250nm處有最大的吸收,在試驗中我們選擇甲醇∶水(65∶35);乙腈∶水(33∶67)作為流動相,比較發(fā)現(xiàn)乙腈∶水為流動相的色譜分離度效果最佳,故采用。本方法檢測有效成分芒柄花素簡便,迅速、準確、專屬性強、可檢測雞血藤片中的有效成分芒柄花素的含量,從而用于對雞血藤片進行質(zhì)量控制。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:212～213.

[2]陳蕙芳.植物活性成分辭典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2001.

[3]海力茜,徐建軍.高效液相色譜法測定新疆紅芪中芒柄花素的含量[J].華西藥學(xué)雜志,2005:20(5):433.

R286.0

A

1674-0742(2011)05(c)-0150-02

劉加元(1974～):男,湖北武漢人,湖北省中山醫(yī)院藥學(xué)部中藥房,主管藥師,研究方向為醫(yī)院藥學(xué)。周偉(1976～):男,湖北武漢人,湖北省藥品檢驗所中藥室,副主任藥師,研究方向為藥品檢驗。

2011-02-16