張娟

Bcl-2，Bax在反復(fù)自然流產(chǎn)的表達及意義

張娟

目的探討B(tài)cl-2與Bax的表達與反復(fù)自然流產(chǎn)的關(guān)系。方法隨機選取反復(fù)自然流產(chǎn)的患者50例作為實驗組，正常妊娠流產(chǎn)患者30例作為對照組，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測絨毛細胞滋養(yǎng)細胞和合體滋養(yǎng)細胞中Bcl-2和Bax的表達。結(jié)果實驗組妊娠組織中Bcl-2的表達明顯低于對照組，而Bax的表達明顯高于對照組。并且Bax及Bcl-2表達呈負相關(guān)。結(jié)論Bcl-2低表達，Bax高表達，二者表達失衡可能是發(fā)生反復(fù)自然流產(chǎn)的重要因素。

反復(fù)自然流產(chǎn);Bcl-2;Bax

反復(fù)自然流產(chǎn)(RSA)的病因十分復(fù)雜，它的病因除有染色體、內(nèi)分泌、感染、內(nèi)生殖器官解剖異常、環(huán)境因素及精神壓力外，目前RSA的凋亡蛋白的相關(guān)機制的研究越來越受到重視，成為當(dāng)今研究的熱點。通過對凋亡相關(guān)蛋白的研究，希望在臨床方面的治療有新的突破。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機選取2008年2月至2009年11月在我院婦科確診并住院的反復(fù)自然流產(chǎn)患者50例作為實驗組，統(tǒng)計患者年齡20～40歲，平均年齡(28.74±0.69)歲，孕齡41～59 d，平均(45.31±1.25)d。選擇同期同期在我院計劃生育手術(shù)室正常妊娠的要求行人工流產(chǎn)手術(shù)者30例作為對照組，年齡19～42歲，平均年齡(27.31±0.54)歲，孕齡39～60 d，平均(50.46±1.48)d。兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 實驗方法兩組確診后行人工流產(chǎn)術(shù)，取出絨毛組織，反復(fù)用生理鹽水連續(xù)漂洗，取出絨毛組織0.5 cm×0.5 cm× 0.5 cm固定完全后石蠟包埋切片，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測絨毛細胞滋養(yǎng)細胞和合體滋養(yǎng)細胞Bcl-2及Bax的表達。免疫組化采用試劑盒內(nèi)提供的組織標(biāo)本作陽性對照，每例隨機選取5個400倍視野，細胞內(nèi)有棕黃色點狀或顆粒狀物質(zhì)為陽性，按照平均陽性細胞染色強度分為4級:陰性(-):無陽性細胞;弱陽性(+):淺棕黃色;陽性(++):介于(+)與(+++)之間;強陽性(+++):深棕黃色。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。兩組間均數(shù)比較采用兩獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。假設(shè)檢驗水準定為雙側(cè)，以P＜0.0 5為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Bcl-2及Bax在絨毛滋養(yǎng)細胞的表達及相關(guān)性。

Bcl-2在正常妊娠組織中呈高表達，RSA組織中呈低表達見表1。Bax則相反，在正常妊娠組呈低表達，在RSA中呈高表達見表2。二者都有顯著性的差異。Bcl-2與Bax的相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2與Bax呈負相關(guān)r=-0.53，P＜0.01。

表1 Bcl-2在絨毛表達

表2 Bax在絨毛中的表達

圖1 Bcl-2在正常妊娠組織中表達(S-P 400)

圖2 Bcl-2在RSA組織中表達(S-P 400)

圖3 Bax在RSA組織中表達(S-P 400)

圖4 Bax在正常妊娠組織表達(S-P 400)

3 討論

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指臨床上連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)，妊娠不足20周或者胎兒體重＜500 g而終止者，是妊娠期最常見的并發(fā)癥之一，流產(chǎn)是因母胎之間免疫狀態(tài)失衡，發(fā)生免疫排斥所致。反復(fù)自然流產(chǎn)可分為原發(fā)性的反復(fù)自然流產(chǎn)和繼發(fā)性的反復(fù)自然流產(chǎn)，而繼發(fā)性的反復(fù)自然流產(chǎn)被認為是一個婦女無論有多少次的流產(chǎn)，至少又一次是成功的妊娠。流行病學(xué)調(diào)查一個婦女如果連續(xù)發(fā)生兩次的流產(chǎn)，下一次妊娠流產(chǎn)的發(fā)生率大約為24%。連續(xù)三次流產(chǎn)下次妊娠流產(chǎn)發(fā)生率大約為30%，四次以上連續(xù)流產(chǎn)的發(fā)生率可能40%［1］。病因是多種多樣的，RSA不單單是一種疾病，更是一種綜合征［2］。Bcl-2蛋白家族分為三個亞家族:①Bcl-2亞家族:抑制細胞凋亡的發(fā)生，結(jié)構(gòu)上擁有保守的BH1～BH4的結(jié)構(gòu)域或跨膜區(qū)。BH1和BH2結(jié)構(gòu)域是抗凋亡蛋白必備的結(jié)構(gòu)域;②Bax亞家族:促進細胞凋亡，結(jié)構(gòu)上缺BH4結(jié)構(gòu)域;③BH3亞家族:結(jié)構(gòu)上僅有BH3結(jié)構(gòu)域，促進細胞凋亡。Bcl-2基因是細胞凋亡調(diào)控基因，Bcl-2蛋白是Bcl-2基因功能活動的外在表現(xiàn)形式。定位于染色體18q213，編碼229個氨基酸，是Bcl-2亞家族中一個被發(fā)現(xiàn)的凋亡蛋白。Bcl-2蛋白可以通過維護線粒體膜的穩(wěn)定，阻止其釋放凋亡因子發(fā)揮抗凋亡作用［3］。Bax是與Bcl-2同源的類似物，由192個氨基酸殘基組成，分子量為21KDa，定位于人類第19號染色體q13.3～13.4上，Bax的主要作用是抗Bcl-2的生物活性，主要作用是加速細胞死亡，并與Bcl-2一起調(diào)節(jié)細胞凋亡。

實驗中發(fā)現(xiàn)Bcl-2及Bax在正常妊娠流產(chǎn)組及反復(fù)發(fā)作自然流產(chǎn)組都有陽性表達，無論在細胞滋養(yǎng)細胞還是合體滋養(yǎng)細胞中，Bcl-2在正常流產(chǎn)組呈高表達，而在RSA組織中呈低表達，二組中的表達有顯著性的統(tǒng)計學(xué)意義。這與李威等［4］研究相符。Bcl-2蛋白不僅通過對胚胎細胞自身的調(diào)節(jié)，還可以通過對絨毛組織、免疫器官等支持組織的調(diào)節(jié)來實現(xiàn)對胚胎的保護作用。Bax的表達則正好相反，在正常流產(chǎn)組低表達，而在RSA則是高表達，也具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。Bax通過抑制Bcl-2的生物活性，Bax一起調(diào)節(jié)細胞凋亡。在相關(guān)性分析中二者呈負相關(guān)，r=-0.53，P＜0.01，具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義?？赡蹷cl-2對Bax生物活性有抑制作用，使Bax無法發(fā)揮蛋白水解作用，從而使細胞凋亡無法進行。反復(fù)發(fā)作自然流產(chǎn)中Bcl-2的表達下降，Bax生物活性抑制因素解除，Bax表達逐漸升高，從而促進細胞凋亡的發(fā)生，影響了絨毛的發(fā)生、發(fā)育，從而導(dǎo)致了RSA的發(fā)生。張金萍等［5］在孕5周～7周絨毛及蛻膜中發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白于孕5周表達于絨毛合體滋養(yǎng)細胞的細胞質(zhì)和細胞核中，一直持續(xù)到孕7周。促凋亡的Bax蛋白在孕5～7周絨毛細胞滋養(yǎng)層細胞、合體滋養(yǎng)層細胞中均未見明顯陽性表達，孕6周Bax蛋白表達于極少部分蛻膜細胞的細胞質(zhì)。早孕期的Bcl-2蛋白的表達能有效地使蛻膜組織增殖、分化、蛻膜化，為胎盤形成做準備。Bc1-2和Bax蛋白在人早孕過程中參與了絨毛滋養(yǎng)層細胞的增殖和分化，子宮內(nèi)膜蛻膜化的過程，在絨毛的發(fā)生、發(fā)育、胎盤形成和組織結(jié)構(gòu)改建及功能完善等方面發(fā)揮著重要作用。米亞英等［6］觀察Bcl-2和Bax在孕13 d自然流產(chǎn)與正常妊娠模型小鼠蛻膜組織中的表達，發(fā)現(xiàn)自然流產(chǎn)模型小鼠蛻膜細胞及子宮腺體上皮細胞Bcl-2的表達低于正常妊娠模型。可見Bcl-2的低表達和Bax的高表達可能參與了自然流產(chǎn)的發(fā)生?？梢夿cl-2及Bax在妊娠絨毛組織中一旦表達發(fā)生異常，Bcl-2表達降低，Bax表達升高，則會造成二者表達失衡，從而誘發(fā)凋亡過度，影響絨毛的生長發(fā)育，使正常妊娠無法維持，便造成了RSA的發(fā)生。所以，Bcl-2/Bax平衡對妊娠的維持是很重要的，我們能否通過對這方面的研究，在臨床治療方面提供新的治療方式，從而為RSA患者解除疾苦，是值得我們繼續(xù)更深入的研究。

［1］Manoj kumar Panfey，Seema Thakur，Suraksha Agrawal．Lymphocyte immunotherapy and its probable mechanism in the maintenance of pregnancy in women with recurrent spontaneous abortion．Arh Gynecol Obstet，2004，269(6):161-172．

［2］Choi YK，Kwak-Kim J.Cytokine gene polymorphisms in recurrent spontaneous abortions:a comprehensive review.Am J Reprod Immunol，2008，60(3):91-110．

［3］倪永林．Bcl-2蛋白家族對卵泡和早期胚胎生長發(fā)育的調(diào)節(jié)．癌變畸變突變，2008，20(2):166-168．

［4］李威，王連卿．小鼠早期胚胎發(fā)育過程中的細胞凋亡及凋亡基因的表達的監(jiān)測．細胞生物學(xué)雜志，2006，28(4):592-602．

［5］張金萍，劉學(xué)紅．Bcl-2和Bax蛋白在人早孕胎盤絨毛和蛻膜組織中的表達．解剖學(xué)報，2008，39(4):590-593．

［6］米亞英，張列轉(zhuǎn)．自然流產(chǎn)模型小鼠蛻膜細胞凋亡及Bcl-2、Bax表達的研究．中國免疫學(xué)雜志，2008，24(7):737-739．

The expression and significance of Bcl-2，Bax in the recurrent spontaneous abortion

ZHANG Juan．Ma-ternal and Child Health Hospital of Zibo City，zibo，Shandong，255000

ObjectiveTo explore the expression and relationship of Bcl-2，Bax in trophoblast cells in recurrent spontaneous abortion.Methods50 cases of recurrent spontaneous abortion as the study group，30 cases of normal pregnancy as the control group，detected Bcl-2，Bax expression on villous cytotrophoblast and syncytial trophoblast cells by Immunohistochemistry SP method.Resultsthe expression of Bcl-2 in the experimental group was significantly lower than the control group，while the expression of Bax in the experimental group was significantly higher than the control group.And negative correlation between the expression of Bax and Bcl-2.ConclusionLow expression of Bcl-2，high expression of Bax，expression imbalance between them may an important factor in recurrent spontaneous abortion．

Recurrent spontaneous abortion;Bcl-2;Bax

255000山東省淄博市婦幼保健院婦科