尹 峰，王 超，薛會(huì)明*，韓春生

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林 吉林 132101；2.長(zhǎng)春動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，長(zhǎng)春 130401）

雞新城疫（ND）是由副粘病毒引起的禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，又稱亞州雞瘟或偽雞瘟。主要特征是高熱、呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血。具有很高的發(fā)病率和死亡率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種重要傳染病，已被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類疫病。且尚無有效治療藥物，只能依靠嚴(yán)格消毒、隔離和疫苗接種加以預(yù)防。新城疫弱毒疫苗的免疫方法有滴鼻、點(diǎn)眼和飲水等方法，而飲水免疫時(shí)，不同免疫劑量的免疫效果也不同，本文就7日齡雛雞采用新城疫Ⅳ系活疫苗不同飲水劑量免疫，通過第7、14、21、28、35、42天采血，監(jiān)測(cè)新城疫血清抗體效價(jià)消長(zhǎng)規(guī)律，探求最佳免疫劑量[1]。

1 試驗(yàn)材料

健康海藍(lán)褐雛雞210羽購(gòu)自無新城疫疫情孵化場(chǎng)。NDL弱毒活疫苗、法氏囊B87弱毒疫苗由吉林正業(yè)生物制品廠生產(chǎn)。ND標(biāo)準(zhǔn)抗原及陽(yáng)性血清、0.5%雞紅細(xì)胞懸液、96V孔型微量血清反應(yīng)板、微量振蕩器、微量移液器和恒溫培養(yǎng)箱均由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院傳染病實(shí)驗(yàn)室提供。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)分組

將健康的海蘭褐雛雞210只雞隨機(jī)分為5個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組，每組35只。于7日齡進(jìn)行NDL弱毒活疫苗免疫，自由采食和飲水，14日齡進(jìn)行法氏囊弱毒疫苗2倍量飲水免疫[2-3]。每天記錄雞群死淘情況、精神狀況、糞便性狀及采食飲水情況。具體試驗(yàn)雞分組及處理方法見表1。

表1 試驗(yàn)雞分組及處理方法

2.2 免疫方法

免疫前對(duì)雞群停水2～3 h，疫苗采用涼開水稀釋，并加入脫脂奶粉0.2%～0.3%，飲水免疫的用水量以7日齡每1 000羽雞約10 000 mL水量計(jì)[4]。按此比例將脫脂奶粉先溶于水中，再將涼開水稀釋的NDL弱毒活疫苗加入水中并輕輕混勻，于1～2h內(nèi)飲完，滴鼻免疫時(shí)將1000羽疫苗用33mL專用稀釋液稀釋，每只雞滴鼻1滴[5]。免疫時(shí)舍內(nèi)溫度要比正常提高1～2℃。

2.3 采血方法

第7天接種疫苗前采血1次，供測(cè)定母源抗體水平用。第14、21、28、35、42天每組隨機(jī)抽取5只雞，采用心臟或翅靜脈采血1.5 mL，置于37℃恒溫箱中4 h，待血清析出后，以3 000 rpm離心15 min，無菌分離血清，裝瓶待用[6]。

2.4 0.5%紅細(xì)胞的制備

先用滅菌注射器吸取3.8%枸櫞酸鈉溶液（其量為所需血量的1/5），從雞翅靜脈或心臟采血至需要血量，置滅菌離心管內(nèi)，加滅菌生理鹽水為抗凝血的2倍，2 000 rpm離心10 min，棄上清液，再加生理鹽水懸浮血球，同上法離心沉淀，洗滌3次，最后根據(jù)所需用量，用滅菌生理鹽水配成0.5%雞紅細(xì)胞懸液[7]。

2.5 血凝抑制試驗(yàn)

試驗(yàn)在96V孔型微量血清反應(yīng)板上進(jìn)行，用固定病毒稀釋血清的方法，自第1～11孔各加25 mL生理鹽水[8-9]。第1孔加被檢雞血清25 mL，吹吸混合均勻，吸25 mL至第2孔，依此連續(xù)倍比稀釋至1 024倍，倍比稀釋至第10孔，吸棄25 mL，第12孔加新城疫陽(yáng)性血清25 mL，作為血清對(duì)照。

自第1～12孔各加25 mL 4個(gè)血凝單位的新城疫病毒液，其中第11孔為4單位新城疫病毒液對(duì)照，振蕩混合均勻，置室溫中作用20 min。自第1～12孔各加0.5%雞紅細(xì)胞懸液25 mL，振蕩混合均勻，恒溫培養(yǎng)箱作用20 min后觀察結(jié)果。

2.6 判定方法

待病毒對(duì)照孔（第11孔）出現(xiàn)紅細(xì)胞100%完全凝集（++++），而血清對(duì)照孔（第12孔）為完全不凝集（-）時(shí)，即可進(jìn)行結(jié)果觀察，將反應(yīng)板傾斜45°，沉于管底的紅細(xì)胞沿著傾斜面向下呈流線狀流動(dòng)者為沉淀，表明紅細(xì)胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的紅細(xì)胞鋪平孔底，凝成均勻薄層，傾斜后紅細(xì)胞不流動(dòng)，說明紅細(xì)胞被病毒所凝集。能完全抑制4單位病毒物質(zhì)凝集紅細(xì)胞作用的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集效價(jià)，用被檢血清的稀釋倍數(shù)或以2為底的對(duì)數(shù)（log2）表示。100%抑制凝集（完全不凝集）的被檢血清最大稀釋度為該血清的血凝抑制效價(jià)，即HI效價(jià)[10]。

3 試驗(yàn)結(jié)果

雞新城疫疫苗不同劑量免疫試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 雞新城疫疫苗不同劑量免疫試驗(yàn)結(jié)果平均值 log2

由表2可知，不同劑量的新城疫疫苗進(jìn)行飲水免疫均能引起雞體免疫反應(yīng)的產(chǎn)生和免疫保護(hù)，4倍量飲水免疫比3倍量飲水免疫抗體水平高，和5倍量免疫抗體水平相比差異不顯著，綜合成本和產(chǎn)生的抗體水平，實(shí)際生產(chǎn)中以4倍量飲水免疫較適宜。但飲水免疫無論2、3、4、5倍，其產(chǎn)生的抗體水平都不如滴鼻法產(chǎn)生的抗體水平高。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在7日齡前雛雞母源抗體能夠起到保護(hù)作用，隨著日齡的增長(zhǎng)，母源抗體有下降的趨勢(shì)，在7～14日齡之間母源抗體雖然能維持2.3以上，但此時(shí)的母源抗體已不能抵御強(qiáng)毒入侵。用2、3、4、5倍不同劑量的疫苗進(jìn)行飲水免疫均能引起雞體免疫反應(yīng)的產(chǎn)生和免疫保護(hù)。綜合免疫效果和成本考慮，在進(jìn)行飲水免疫時(shí)4倍量效果最佳，而滴鼻法免疫后第21天抗體效價(jià)達(dá)12.6，明顯高于不同劑量飲水方法而產(chǎn)生的抗體水平，因此飲水和滴鼻方法比較，以滴鼻法為最佳。

[1]趙瑞宏,張丹俊,潘孝成,等.不同新城疫疫苗和免疫途徑對(duì)雞新城疫HI抗體的影響[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009（19）:303-304.

[2]楊新年.家禽疫苗的正確使用[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),2005,11（3）:58.

[3]劉華,涂健,祈克宗,等.雞新城疫首次免疫采用飲水法的可行性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,34（16）:3 999-4 000.

[4]孔祥軍,崔世寧.蛋雞免疫接種應(yīng)注意的問題[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問,2008（04）:103.

[5]Douglas G.蛋雞免疫程序及免疫技術(shù)[J].中國(guó)家禽,2006,28（17）:38-44.

[6]高源.肉雞和蛋雞的免疫程序[J].農(nóng)村科技開發(fā),2003（12）:24.

[7]辛朝安.禽病學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2003.

[8]薛會(huì)明,孟巖,王振輝.預(yù)防獸醫(yī)學(xué)（第二版）[M].長(zhǎng)春:吉林人民出版社,2009.

[9]靖寧,羅國(guó)喜.雞新城疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律和免疫保護(hù)抗體臨界值的測(cè)定[J].當(dāng)代畜牧,2007（3）:9-10.

[10]孟凡生,魏壽元,密家自,等.雞新城疫抗體監(jiān)測(cè)技術(shù)的應(yīng)用與回顧[J].中國(guó)畜禽傳染病,1994（5）:43-44.