范 倩，汪 泓，朱雄峰，王 萍

(皖南醫(yī)學(xué)院 1.醫(yī)學(xué)一系;2.微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，安徽 蕪湖 241002)

妊娠過(guò)程中，胎兒對(duì)于母體來(lái)說(shuō)作為一種特殊的同種異體移植物，妊娠成功與否主要取決于母體對(duì)胎兒產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答即母胎免疫耐受。有研究顯示，sHLA-G分子在抑制胎兒同種異體排斥過(guò)程中可能有決定性的作用，被認(rèn)為可能是妊娠期一種特異性免疫抑制分子［1］，在維持正常妊娠中起著重要的免疫調(diào)節(jié)作用［2］。鑒于此，我們通過(guò)定量測(cè)定正常妊娠與自然流產(chǎn)患者血清中sHLA-G的水平，比較并探討血清中sHLA-G的表達(dá)水平與正常妊娠的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 研究資料 隨機(jī)選擇2010年3～6月在皖南醫(yī)學(xué)院門(mén)診部體檢并確診為妊娠的正常妊娠婦女16 例，平均年齡為(28.1 ±4.1)歲，平均孕周為(8.9±7.1)周;自然流產(chǎn)患者 16 例，平均年齡為(29.1±5.8)歲，平均孕周為(8.3 ±3.0)周。所有研究對(duì)象經(jīng)超聲以及婦科檢查顯示子宮增大符合孕周，夫妻雙方染色體正常，內(nèi)分泌檢查無(wú)異常，排除全身或感染性疾病，排除遺傳疾病，同時(shí)經(jīng)抗心磷脂抗體(ACL)等自身抗體篩查，均為陰性者，雙方免疫狀態(tài)檢查正常。

1.2 方法 正常妊娠婦女與自然流產(chǎn)患者于體檢時(shí)抽取肘靜脈血3～5 ml，經(jīng)離心(4 000 r/min，10 min)，留取血清，置于－20℃凍存。采用雙抗夾心ELISA法(試劑盒購(gòu)自史瑞可公司)，檢測(cè)可溶性HLA-G(sHLA-G)的水平，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的為總的sHLA-G水平。選用酶標(biāo)儀(Anthos Lucy 2)測(cè)定吸光度(A)值，波長(zhǎng)為450 nm。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用ELISA Calc回歸/擬合計(jì)算程序V 0.1和SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)16例正常妊娠婦女血清sHLA-G的水平為(1.37±1.44)IU ∕ ml，16 例自然流產(chǎn)患者血清 sHLA-G 的水平為(0.57 ±0.27)IU/ml，后者血清中的sHLA-G水平明顯低于前者，兩組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.166，P ＜0.05)，表明血清中的sHLA-G水平與妊娠的成功與否相關(guān)。

3 討論

人類白細(xì)胞G抗原(HLA-G)作為一種新發(fā)現(xiàn)的非經(jīng)典HLA-I類分子，在母-胎免疫耐受及維持正常妊娠中起重要的免疫調(diào)節(jié)作用［2］。HLA-G分子主要存在于絨毛遠(yuǎn)端的細(xì)胞滋養(yǎng)層。其通過(guò)與免疫活性細(xì)胞(如殺傷性T細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和有關(guān)因子如IL-2等發(fā)生作用，阻斷母體對(duì)胎兒的免疫應(yīng)答，保護(hù)妊娠順利進(jìn)行。

最早發(fā)現(xiàn)HLA-G在體內(nèi)的分布僅限于母胎界面的絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞上，但隨著有效檢測(cè)水平的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)如血清、血漿、羊水等體液和培養(yǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞上清液中均可檢測(cè)到sHLA-G［3］。sHLA-G主要由胎盤(pán)組織分泌，通過(guò)母-胎屏障而進(jìn)入母體血液循環(huán)，有3種形式存在，即 sHLA-G1、G2、G3。其通過(guò)體液循環(huán)遍布全身各組織器官，對(duì)機(jī)體起系統(tǒng)化免疫調(diào)節(jié)作用，保護(hù)胎兒免受母體免疫系統(tǒng)的攻擊而維持正常的妊娠［4］。

在胚胎著床期間，子宮蛻膜有大量浸潤(rùn)的免疫活性細(xì)胞，其中70% ～80%是NK細(xì)胞，sHLA-G能抑制NK細(xì)胞的殺傷活性。其通過(guò)與多種NK細(xì)胞抑制性受體結(jié)合，下調(diào)蛻膜NK細(xì)胞對(duì)胎兒的殺傷，此外，sHLA-G還可促使CD8+T細(xì)胞表達(dá)并分泌Fas配體，導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞發(fā)生Fas/FasL程序性死亡，從而殺傷同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞，抑制其對(duì)胎兒的細(xì)胞毒作用［5］;又可誘導(dǎo)Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10等的產(chǎn)生，抑制 TNF-α的分泌，使Th1/Th2平衡向Th2型方向移動(dòng)，減少了Th1介導(dǎo)的母體對(duì)胎兒的免疫排斥［6］，因此，HLA-G的減少可能使滋養(yǎng)細(xì)胞易受母體免疫系統(tǒng)攻擊，影響著床和妊娠維持，從而導(dǎo)致妊娠的失敗。

本組通過(guò)定量測(cè)定顯示，正常妊娠組血清中sHLA-G水平顯著高于自然流產(chǎn)組，提示sHLA-G對(duì)妊娠成功有重要影響。Fuzzi等［4］通過(guò)檢測(cè)285份體外受精(IVF)早期胚胎期培養(yǎng)液中的sHLA-G，發(fā)現(xiàn)胚胎植入成功的僅見(jiàn)于培養(yǎng)液中有sHLA-G表達(dá)者，提示HLA-G在早期胚胎的表達(dá)是獲得妊娠成功的基本和必要條件。Yie等［7］回顧性研究亦發(fā)現(xiàn)分泌sHLA-G的胚胎卵裂率活產(chǎn)率顯著高于sHLA-G缺乏者，并指出sHLA-G不足使得胚胎植入過(guò)程中容易被母體的免疫細(xì)胞攻擊，血液中sHLA-G是胚胎早期成功植入的重要因素，此外還認(rèn)為胚胎sHLA-G水平和卵裂率對(duì)妊娠結(jié)局具一定預(yù)測(cè)價(jià)值。Athanassakis等［8］也發(fā)現(xiàn)，反復(fù)自然流產(chǎn)(RSA)患者血清中，sHLA-G水平較同期正常妊娠下降42%，而可溶性人類白細(xì)胞DR抗原(sHLA-DR)則上升63%，提示排斥反應(yīng)增強(qiáng)。綜上所述，sHLA-G對(duì)維持正常妊娠可能有重要作用，sHLA-G不足可能使得胚胎在發(fā)育過(guò)程中受母體的免疫細(xì)胞攻擊，而導(dǎo)致妊娠失敗和流產(chǎn)的發(fā)生。但關(guān)于sHLA-G的生物學(xué)作用及其機(jī)制在很多方面還存在眾多疑問(wèn)，仍需要進(jìn)一步地研究探討。

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