江蘇省蘇州市立醫(yī)院(215001) 席與斌 徐 蓉 吳允孚

本文觀察復(fù)方降脂膠囊對實(shí)驗性血栓形成的影響。

1 實(shí)驗試劑和儀器

1.1 受試藥物 復(fù)方降脂膠囊浸膏粉,由南京中醫(yī)藥大學(xué)提供,每克含生藥 8.9g,為棕褐色粉末。

1.2 試劑 ADP:美國 sigma公司;曲克蘆丁:天津藥業(yè)焦作有限公司;鹽酸腎上腺素注射液:天津金耀氨基酸有限公司。

1.3 實(shí)驗動物 SD大鼠 40只,體重 200～250g。浙江省實(shí)驗動物中心提供。ICR小鼠50只,體重 18～22g,揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗動物中心。

1.4 實(shí)驗儀器 實(shí)驗性體內(nèi)血栓形成測定儀:包頭醫(yī)學(xué)院心血管研究室 型號:BT8723;普力菲爾超純水機(jī):上海富詩特儀器設(shè)備有限公司 型號:FS7-LH-20;電子天平(體重)電子計重秤 :中國-凱豐集團(tuán)型號:ACS-H 1;分析天平 :SHIMADZU CORPORATION JAPAN型號:AY120。

2 實(shí)驗方法

2.1 復(fù)方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸總動脈后混合血栓形成的影響[1-2]。2.1.1取雄性 SD大鼠 10只,體重 200～250g,按體重隨機(jī)分為 5組,每組 10只,即空白對照組(生理鹽水),陽性組 (曲克蘆丁48mg/kg),復(fù)方降脂膠囊高(40.00g/kg)、中劑量組(26.67g/kg)、低劑量組(13.33g/kg)。灌胃給藥 5天,給藥體積為 10mL/kg,于末次給藥后 30分鐘開始刺激。空白對照組給予等體積生理鹽水。

2.1.2 方法 受試藥物臨用前用蒸餾水配成所需濃度,各組均灌胃給藥(空白對照組給予等體積生理鹽水),容積為 10mL/kg。

2.1.3 模型制備 造模時,大鼠經(jīng)腹腔注射 10%水合氯醛(350mg/kg,靜注)麻醉后,仰臥位固定。頸部正中線切口,分離右側(cè)頸總動脈,近心端放置BT87-3型實(shí)驗性體內(nèi)血栓形成測定儀的刺激電極,遠(yuǎn)心端放置溫度探頭,于末次給藥后 30分鐘開始刺激。刺激的電流強(qiáng)度為 2 mA,連續(xù)刺激 7分鐘。當(dāng)刺激電極接通電流后,由于電流的熱效應(yīng)引起血管損傷,激活凝血系統(tǒng)及血小板,管腔內(nèi)逐漸形成混合血栓。由于血栓的形成,管腔內(nèi)血流逐漸被阻斷,當(dāng)血流被完全阻斷時,遠(yuǎn)心端溫度驟降。此時溫度探頭能測定其溫度驟降,故儀器報警,此即為血管栓閉時間。從開始刺激到溫度驟降所需的時間作為動脈血栓形成時間 OT(s)。

2.2 復(fù)方降脂膠囊對 ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞的影響[3-4]

2.2.1 混合致栓劑的配制 取 0.2mLADP(濃度為0.731mg/mL),0.67m L(1mL∶1mg)腎上腺素 ,用生理鹽水定容至 10mL,配制成混合致栓劑。

2.2.2 小鼠肺栓塞模型的復(fù)制 取雄性 ICR小鼠 50只,體重 18～22g,按照體重隨機(jī)分為 5組,即空白對照組(生理鹽水),陽性組(曲克蘆丁 48mg/kg),復(fù)方降脂膠囊高劑量組(40.00g/kg)、中劑量組(26.67g/kg)、低劑量組(13.33g/kg)。灌胃給藥 5天,給藥體積為 10mL/kg,空白對照組給予等體積生理鹽水。末次給藥后 30分鐘,按 0.075m/10g尾靜脈注射 ADP混合致栓劑,形成小鼠肺栓塞(即呼吸急促,無法自主活動),記錄小鼠自注射 ADP混合致栓劑后至恢復(fù)自主活動的時間。

3 測量指標(biāo)

3.1 血栓形成時間(OT)的測定 記錄從開始刺激至動脈遠(yuǎn)端溫度驟降的時間,此時間段即作為動脈血栓形成時間。

3.2 小鼠自主活動時間 記錄注射 ADP混合致栓劑后至小鼠恢復(fù)自主活動時間。

4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用 SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計,以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差表示,方差齊性使用單因數(shù)方差分析,方差不齊性使用秩和檢驗。P＜0.05為差異有顯著性。

5 結(jié) 果

5.1 復(fù)方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸動脈內(nèi)膜血栓形成的影響 實(shí)驗結(jié)果表明,復(fù)方降脂膠囊低、中、高劑量組和陽性組均能顯著延長電流損傷大鼠頸動脈內(nèi)膜血栓形成的時間,與空白對照組比較,具有顯著性差異(P＜0.05或 P＜0.01)。結(jié)果見表 1。

表1 復(fù)方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸動脈內(nèi)膜血栓形成的影響

表1 復(fù)方降脂膠囊對電流損傷大鼠頸動脈內(nèi)膜血栓形成的影響

與空白組對比,**P＜0.01,*P＜0.05。

動物數(shù)(n)給藥劑量(g/kg)OT(s)空白對照組 10 0 576.56±90.81陽性組 10 48mg 766.11±142.41**低劑量組 10 13.33 682.78±118.97*中劑量組 10 26.67 718.60±167.67*高劑量組 10 40.00 747.6±203.03*

5.2 復(fù)方降脂膠囊對 ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞模型的影響 實(shí)驗結(jié)果表明,復(fù)方降脂高劑量組和陽性組對小鼠急性肺血栓有抑制作用,能顯著縮短 ADP混合致栓劑致肺栓塞模型小鼠的喘促持續(xù)時間,與空白對照組組比較具有顯著性差異(P＜0.05或 P＜0.01)。結(jié)果見表 2。

表2 復(fù)方降脂膠囊對ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞模型的影響

表2 復(fù)方降脂膠囊對ADP混合致栓劑致小鼠肺栓塞模型的影響

與空白組對比,**P＜0.01,*P＜0.05。

動物數(shù)(n)給藥劑量(g/kg)喘促持續(xù)時間(s)空白對照組 10 0 219.3±40.31陽性組 10 48mg 170.28±27.22**低劑量組 10 13.33 204.85±42.85中劑量組 10 26.67 190.25±24.45高劑量組 10 40.00 180.89±35.71*

6 討 論

大多數(shù)心腦血管疾病發(fā)生的前提都是動脈粥樣硬化血栓的形成,而血小板的活化在血栓形成過程中起著重要的作用[5]。血栓的形成主要取決于血管內(nèi)膜受損、血流異常以及血液成分改變 3個因素。脂質(zhì)增加、血脂比例改變或(和)脂質(zhì)質(zhì)量異常都可能引起血管內(nèi)皮的損傷。脂質(zhì)沉積在血管內(nèi)膜,同時單核-巨噬細(xì)胞在病變部位移行堆積,大量吞噬脂質(zhì)后轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞,最后形成動脈粥樣硬化(AS)斑塊。另一方面,血脂異常也可引起血管內(nèi)皮細(xì)胞以及血白細(xì)胞、血小板功能的異常,增強(qiáng)凝血活性。故血脂異?？赏ㄟ^多種途徑促進(jìn)血栓的形成,并進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮,進(jìn)而釋放生長因子,促進(jìn)血管平滑肌增殖,從而加重 AS過程。血栓按照其發(fā)生的部位可分為動脈血栓和靜脈血栓[6]。靜脈血栓主要是由于血流緩慢或者瘀滯,導(dǎo)致凝血因子聚集而引起血液凝固,此種血栓因富含纖維蛋白和紅細(xì)胞,故又被稱為紅血栓。本實(shí)驗通過電流損傷動脈內(nèi)膜所致的血栓主要是混合血栓,紅白血栓兼有之。實(shí)驗結(jié)果顯示,復(fù)方降脂膠囊能延長內(nèi)膜損傷后混合血栓引起的血管堵塞時間(OT),縮短 ADP混合致栓劑誘發(fā)急性肺栓塞后小鼠恢復(fù)自主活動的時間,表明其抗血栓的作用可能與抑制血小板聚集有關(guān)。ADP混合致栓劑使纖維蛋白原與相應(yīng)位點(diǎn)結(jié)合,釋放血小板內(nèi)儲存的鈣,進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)源性花生四烯酸(AA)釋放,使血小板聚集。本實(shí)驗表明,復(fù)方降脂膠囊能減弱血小板聚集,降低血漿黏度,增強(qiáng)纖溶系統(tǒng),使血小板處于解聚狀態(tài),而達(dá)到抑制血栓形成的作用。

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