劉 艷，徐玉文，李玉梅

(1.山東省淄博市婦幼保健院，山東 淄博 255029;2.山東省藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250101;3.山東博士倫福瑞達(dá)制藥有限公司，山東 濟(jì)南 250101)

氨酪酸(aminobutyric acid)又稱(chēng) γ-氨酪酸、γ-氨基丁酸，能增強(qiáng)葡萄糖磷酸酯酶的活性，促進(jìn)腦細(xì)胞的代謝，用于腦血管障礙引起的偏癱、記憶障礙、語(yǔ)言障礙、兒童智力發(fā)育遲緩等，亦能降低血氨，用于治療各種類(lèi)型的肝昏迷等。此外也可用于尿毒癥、催眠藥及一氧化碳中毒等所致昏迷［1］。氨酪酸氯化鈉注射液是氨酪酸在臨床上使用的一種主要?jiǎng)┬?國(guó) 家 藥 品 標(biāo) 準(zhǔn) YBH24232005、YBH40692005、YBH02622006、YBH33742005 和 YBH13242006)，而美國(guó)藥典、歐洲藥典等均未收載該品種。為了更好的控制氨酪酸氯化鈉注射液的質(zhì)量，減少不良反應(yīng)的發(fā)生，國(guó)家藥典委員會(huì)國(guó)藥典化發(fā)［2010］84號(hào)文要求提高氨酪酸氯化鈉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加有關(guān)物質(zhì)檢查。目前在國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)有關(guān)氨酪酸中α-吡咯烷酮高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)方法的報(bào)道，為有效的控制氨酪酸氯化鈉注射液的質(zhì)量，本文建立了氨酪酸氯化鈉注射液中α-吡咯烷酮檢查的HPLC法。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀(包括紫外檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、Agilent色譜工作站、柱溫箱)。

氨酪酸氯化鈉注射液(濰坊市仁康藥業(yè)有限公司，批號(hào):30909036、30909037、30909038;朝陽(yáng)凌橋制藥有限公司，批號(hào):08101501);α-吡咯烷酮(東北制藥總廠提供);甲醇(色譜純，天津科密歐試劑公司);水為超純水;己烷磺酸鈉等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:CAPCELL PAK C18柱，流動(dòng)相:磷酸二氫鉀溶液(磷酸二氫鉀10.0 g與己烷磺酸鈉1.1 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.1)-甲醇(90∶10);流速:1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm，柱溫:30 ℃，進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液的制備及色譜圖

2.2.1 對(duì)照品溶液 取α-吡咯烷酮對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每1 mL約含4 μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取氨酪酸氯化鈉注射液10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 取0.9%氯化鈉溶液作為陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 色譜圖 分別取各溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見(jiàn)圖1)。供試品中α-吡咯烷酮與對(duì)照品峰的保留時(shí)間基本一致，分離良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 Chromatograms of HPLC

2.3 線性關(guān)系試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液 1，3，5，8，10 和 12 μL，分別注入液相色譜儀，以α-吡咯烷酮的濃度(X)和峰面積(Y)作線性回歸，得線性回歸方程:Y=7.049 X-0.152，r=1.000 0，α-吡咯烷酮在0.4 ～4.8 mg/L 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，以主成分的峰面積計(jì)算RSD為0.89%。

2.5 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在 0，1，2，4，8，12 h，取 10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以α-吡咯烷酮的峰面積計(jì)算RSD為0.34%，說(shuō)明氨酪酸溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批供試品，連續(xù)取6份，每份10 mL，加0.9%的氯化鈉溶液分別稀釋至50 mL，測(cè)定α-吡咯烷酮含量，結(jié)果分別為0.138%，0.140%，0.141%，0.139%，0.137%和0.143%，平均含量為0.140%，RSD為1.5%。

2.7 回收率試驗(yàn)

已知α-吡咯烷酮濃度的氨酪酸氯化鈉溶液3批，第1批取46 mL，第2批取45 mL，第3批取44 mL，每批各取3份。分別向第1～3批溶液中加入40.225 μg/mL α-吡咯烷酮溶液 4，5 和 6 mL，混勻，分別取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計(jì)算平均回收率為100.9%，RSD為1.39%。見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests

2.8 檢出限

取對(duì)照品溶液，加水稀釋制成每1 mL含α-吡咯烷酮0.4 μg的溶液，作為檢出限測(cè)定溶液，取1 μL注入液相色譜儀，以S/N=3計(jì)算，α-吡咯烷酮的檢出限為0.4 ng。

2.9 樣品測(cè)定

取供試品溶液，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中的α-吡咯烷酮的含量，濰坊市仁康藥業(yè)有限公司3批樣品的含量均為0.14%，朝陽(yáng)凌橋制藥有限公司1批樣品的含量為0.07%。

3 討論

氨酪酸是一種小分子兩性氨基酸，據(jù)文獻(xiàn)檢索和生產(chǎn)企業(yè)提供的生產(chǎn)工藝，氨酪酸有兩種制備工藝:一是化學(xué)水解法，以α-吡咯烷酮為起始原料，在138～142℃高溫下經(jīng)氫氧化鈣水解制得;二是生物酶解法，以α-吡咯烷酮為起始原料，以4-丁內(nèi)酰胺水解酶為菌株水解制得。分析兩種工藝條件，都可能含有未轉(zhuǎn)化的α-吡咯烷酮，而α-吡咯烷酮又是毒性較高的一種化學(xué)物質(zhì)，因此，在氨酪酸氯化鈉注射液中控制α-吡咯烷酮的限量是非常必要的。

用流動(dòng)相溶液配制成 4 μg/mL α-吡咯烷酮對(duì)照品溶液，在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，α-吡咯烷酮沒(méi)有明顯的特征吸收，僅在紫外末端區(qū)存在末端吸收，而陰性樣品在末端區(qū)也不形成干擾，故選擇210 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。在流動(dòng)相的選擇中，曾試用現(xiàn)行氨酪酸氯化鈉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的多種流動(dòng)相體系，但用于本品分離效果較差，現(xiàn)用的流動(dòng)相保留時(shí)間適中，分離度良好，線性關(guān)系及及回收率等均能達(dá)到試驗(yàn)要求。本研究為氨酪酸氯化鈉注射液的質(zhì)量控制提出了一種新的方法，同時(shí)也為國(guó)家今后進(jìn)一步提高氨酪酸相關(guān)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)工作提供了翔實(shí)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。

［1］ 《中國(guó)藥物大全》編委會(huì).中國(guó)藥物大全:西藥卷［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:256-260.