胡方林，劉仙菊，龍 玲

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410208）

糖尿病屬中醫(yī)“消渴”病范疇，是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的三大非傳染性疾病之一，其中2型糖尿?。═2DM）占糖尿病總數(shù)的90%以上，且發(fā)病率逐年上升?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)明確，胰島素抵抗（Insulin resistance，IR）是T2DM發(fā)病的重要因素和顯著特征。T2DM中有85%以上伴有肥胖，肥胖者伴有脂代謝紊亂，其中甘油三酯和游離脂肪酸既能造成IR，又能造成β細(xì)胞功能損害，是導(dǎo)致T2DM的重要環(huán)境因素，故又稱T2DM為糖脂病［1］。瘦素（Leptin，LEP）是肥胖基因（ob）在脂肪細(xì)胞表達(dá)的產(chǎn)物，LEP、肥胖、糖尿病之間有復(fù)雜的內(nèi)在聯(lián)系。腎氣丸具有補(bǔ)腎助陽(yáng)之功，是治療消渴的經(jīng)典方劑。本實(shí)驗(yàn)通過觀察腎氣丸對(duì)2型糖尿病模型大鼠空腹血糖（FBG）、血清胰島水平（FINS）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、LEP的影響，探討腎氣丸治療2型糖尿病的可能機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半，體重（200±10）g。由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-0004。

1.1.2 藥物與試劑 腎氣丸方：附子、肉桂、熟地、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、丹皮按原方 1∶1∶8∶4∶4∶3∶3∶3 比例分別加水浸泡后煎煮2次，合并煎液，過濾濃縮至含生藥2 g/mL（低劑量）和3 g/mL（高劑量），冰箱貯存?zhèn)溆茫幉馁?gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)杏林藥號(hào)，經(jīng)鑒定為正品；二甲雙胍：湘雅制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)：990508，配制成每片0.5 g/10mL的懸混液。鏈脲佐菌素（STZ）美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品；C-P、INS藥盒由北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號(hào)：20090910；安穩(wěn)血糖測(cè)試條由長(zhǎng)沙市三諾生物傳感技術(shù)有限公司提供。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 放免儀：γ-911全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀，中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司生產(chǎn)。安穩(wěn)血糖測(cè)試儀：長(zhǎng)沙市三諾生物傳感技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

50只SD大鼠隨機(jī)分為正常組（10只），糖尿病造模組（40只），正常組飼以普通飼料。造模組參照文獻(xiàn)［2］并加以改進(jìn)，高脂飲食誘導(dǎo)加小劑量鏈脲佐菌素（STZ）。造模前喂以高脂（高糖）飼料（其中含5%蔗糖，7%精煉豬油，7%雞蛋，其余為普通飼料）3 w，誘發(fā)胰島素抵抗。喂養(yǎng)第3周以STZ按30 mg/kg腹腔注射（按1%的濃度用PBS緩沖液稀釋，pH4.5）制備糖尿病大鼠模型。當(dāng)造模組大鼠腹腔注射STZ 72 h后，分別測(cè)定空腹血糖，將空腹血糖≥4.5 mmol/L的大鼠納入實(shí)驗(yàn)，并按性別、空腹血糖值，隨機(jī)分為模型組、二甲雙胍組、腎氣丸高劑量組、腎氣丸低劑量組4組，每組10只。按《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》［2］計(jì)算給藥劑量，腎氣丸低劑量組以1.21 mL/100 g灌胃，腎氣丸高劑量組以1.21 mL/100 g灌胃，二甲雙胍組以1 mL/100 g劑量灌胃，正常組與模型組則以等量蒸餾水灌胃，容量1 mL/100 g，每日1次，給藥6 w，除正常組大鼠每日飼以普通飼料外，其余各組均每日飼以高熱量飼料。實(shí)驗(yàn)過程中因灌胃操作造成二甲雙胍組、腎氣丸低劑量組、腎氣丸高劑量組分別死亡2、3、2只大鼠。末次給藥后禁食12 h，測(cè)體重及體長(zhǎng)，尾靜脈取血測(cè)血糖值，各組大鼠頸動(dòng)脈放血處死，按要求分別取血清、抗凝血漿及各組織臟器。FBG采用安穩(wěn)血糖測(cè)試儀進(jìn)行檢測(cè)，F(xiàn)INS、LEP用放免法檢測(cè)，按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，組間比較用q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

腎氣丸對(duì)2型糖尿病模型大鼠FBG、FINS、HOMAIR、LEP的影響，結(jié)果見表1。

表1 腎氣丸對(duì)2型糖尿病模型大鼠空腹血糖FBG、INS、HOMA-IR、LEP的影響 （±s）

表1 腎氣丸對(duì)2型糖尿病模型大鼠空腹血糖FBG、INS、HOMA-IR、LEP的影響 （±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.05，3）P<0.01

組別 n FBG（mmol/L） FINS（ulU/mL） HOMA-IR LEP（ng/mL）正常組 10 4.060±0.317 13.031±3.102 3.001±0.580 6.906±1.057模型組 10 4.820±0.3191） 17.473±3.1891） 3.885±0.7681） 10.873±1.0081）二甲雙胍組 8 4.288±0.3833） 14.289±2.9772） 2.743±0.7173） 7.443±1.4843）腎氣丸低劑量組 7 4.400±0.3512） 13.991±2.4052） 2.953±0.4283） 8.809±1.0883）腎氣丸高劑量組 8 4.262±0.3813） 13.703±2.6893） 2.663±0.5713） 7.429±0.9503）

由表1可見，與正常組比較，模型組FBG、FINS、HOMAIR、LEP水平均明顯增高（P<0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組、腎氣丸高、低劑量組 FBG、FINS、HOMA-IR、LEP 水平均明顯降低（P<0.05，P<0.01），但組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

瘦素（Leptin，LEP）是脂肪細(xì)胞分泌的一種激素，是肥胖基因的產(chǎn)物，在胰島素抵抗機(jī)制中起著舉足輕重的作用。研究表明，瘦素與胰島素之間有雙向調(diào)節(jié)作用［3］。一方面，胰島素可以促進(jìn)瘦素的表達(dá)，另一方面瘦素可抑制胰島素的分泌和釋放，從而減少脂肪合成和促進(jìn)脂肪分解。肝臟、骨骼肌、脂肪組織是胰島素和瘦素作用的重要靶器官，這些組織瘦素受體表達(dá)減弱，使得外周組織代謝發(fā)生紊亂，造成胰島素抵抗。脂肪組織中瘦素抵抗導(dǎo)致脂肪增加，肝臟、骨骼肌組織中TG增加，糖耐量減低，從而導(dǎo)致高胰島素血癥或胰島素抵抗、血脂紊亂、高血糖等多種代謝異常的發(fā)生［4］。張諾等［5］在測(cè)定2型糖尿病合并肥胖患者、單純性肥胖者、2型糖尿病非肥胖者和正常對(duì)照者的血脂水平、空腹血糖、空腹胰島素、胰島素敏感指數(shù)等的實(shí)驗(yàn)中，糖尿病伴或不伴肥胖組FINS均顯著高于對(duì)照組，而胰島素敏感性指數(shù)（ISI）則顯著低于對(duì)照組，說明糖尿病患者均存在不同程度的胰島素抵抗。而血清瘦素濃度在糖尿病患者中顯著高于對(duì)照組，提示糖尿病患者同時(shí)存在高瘦素血癥。瘦素水平在糖尿病患者中與ISI呈顯著負(fù)相關(guān)，提示高瘦素血癥與胰島素抵抗之間存在相關(guān)性。

目前2型糖尿病大多數(shù)不是“消瘦”而是“肥胖”，其臨床可出現(xiàn)單純血糖尿糖升高而無“三多”癥狀，或僅表現(xiàn)為乏力、消瘦、腰膝酸軟、陽(yáng)痿等消渴本虛之征，亦可出現(xiàn)口渴喜飲、多食善饑等消渴標(biāo)急之象，且滋陰降火療效不佳。肥胖和中等體型糖尿病以陽(yáng)虛證型為主，脾腎陽(yáng)虛始終貫穿于糖尿病IR發(fā)生與發(fā)展過程中［6］。對(duì)此，《素問·奇病論》謂：“此肥美之所發(fā)也，此人必?cái)?shù)食甘美而多肥也。肥者令人內(nèi)熱，甘者令人中滿，其氣上溢，傳為消渴?！蓖鯛c《外臺(tái)秘要》對(duì)此闡發(fā)得更為形象具體：“腰腎即冷，則不能蒸于上，谷氣盡下為小便，故味甘不變……，又肺為五藏之華蓋，若下有暖氣，蒸即肺潤(rùn)。若下冷極，即陽(yáng)氣不能升，……陰無陽(yáng)而不升……譬如釜中有水，以火煖之……則煖氣上騰，故板能潤(rùn)也。若無火力……此板終不可得潤(rùn)也?！边@些論述精辟地解釋了腎陽(yáng)不足致口渴、多尿且尿甜的機(jī)理，說明腎陽(yáng)不足是消渴病重要的病因病機(jī)，因此不可忽視溫陽(yáng)法在治療本病中的重要作用?！督饏T要略》云：“男子消渴，小便反多，以飲一斗，小便一斗，腎氣丸主之”，此為溫腎陽(yáng)法治療消渴病開了先河。金匱腎氣丸由此作為治療消渴病之著名方劑，一直沿用至今。

我們推論，隨著高脂飲食的攝入和運(yùn)動(dòng)減少，T2DM病機(jī)特點(diǎn)為脾腎陽(yáng)虛，水濕不運(yùn)，釀生痰濁，痰脂內(nèi)停，脂代謝紊亂使過量FFA在肌肉、脂肪、肝組織中儲(chǔ)留從而引起IR，IR進(jìn)一步導(dǎo)致脂代謝紊亂加重，形成惡性循環(huán)，因此，脾腎陽(yáng)氣不足可能是T2DM-IR的病機(jī)實(shí)質(zhì)。而腎氣丸能微微生火，鼓舞腎氣，使水濕得運(yùn)，痰濁得化，脂膏得消，脂肪代謝改善，體重減輕，進(jìn)而改善IR。盡管對(duì)腎氣丸通過調(diào)節(jié)脂肪代謝治療糖尿病機(jī)理未見有相關(guān)報(bào)道，但目前的一些研究對(duì)本項(xiàng)目的進(jìn)行也提供了有益的啟示。研究發(fā)現(xiàn)，金匱腎氣丸能夠改善糖尿病大鼠多元醇代謝，可能對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變有一定的作用；并具有抗過氧化損傷的作用［8］。徐潔等［9］觀察到腎氣丸的君藥之一肉桂可以增加2型糖尿病大鼠肝糖原、肌糖原儲(chǔ)存量，從而提高外周組織對(duì)葡萄糖的利用，改善2型糖尿病大鼠的胰島素抵抗。我們觀察到金匱腎氣丸可改善大鼠血脂代謝，降低HOMA-IR，提高ISI，增強(qiáng)胰島素的敏感性［10］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示T2DM模型大鼠血清瘦素水平與空腹血糖、血清胰島素、胰島素抵抗指數(shù)存在正相關(guān)，腎氣丸能降低2型糖尿病模型大鼠的血清瘦素水平，增強(qiáng)胰島素敏感性的作用，改善胰島素抵抗，這可能是腎氣丸治療糖尿病的機(jī)制之一。

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［9］徐潔，鐘麗娟.肉桂對(duì)2型糖尿病大鼠肝糖原、肌糖原的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2007，14（3）：171-172.

［10］劉仙菊，胡方林.金匱腎氣丸對(duì)2型糖尿病模型大鼠脂肪代謝及胰島素抵抗的影響［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，17（11）：22-25.