張鴻

[摘要] 目的 探討AKIP1、PKA在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。 方法 選擇72份卵巢癌組織標(biāo)本，采用免疫組化法檢測(cè)AKIP1、PKA蛋白在卵巢癌組織的表達(dá)情況，同時(shí)選擇30份正常卵巢癌組織進(jìn)行對(duì)照。并對(duì)患者進(jìn)行隨訪，分析AKIP1、PKA的表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果 上皮性卵巢癌組織AKIP1、PKA表達(dá)陽性率低于正常卵巢組織，不同TNM分期及病理分化程度上皮性卵巢癌組織AKIP1、PKA的表達(dá)陽性率存在顯著差異（P ＜ 0.05），AKIP1、PKA陽性表達(dá)的卵巢癌患者兩年生存率高于AKIP1、PKA陰性表達(dá)患者。 結(jié)論 AKIP1、PKA的表達(dá)缺失與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并且能夠?qū)︻A(yù)后進(jìn)行評(píng)估。

[關(guān)鍵詞] 上皮性卵巢癌；AKIP1；PKA；腫瘤分期；分化；預(yù)后

[中圖分類號(hào)] R737.31[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）16-0031-03

Expression and clinical significance of AKIP1 and PKA in epithelial ovarian cancer

ZHANG Hong

Department of Obstetrics and Gynaecology, Staff-worker Hospital of Hangzhou Iron and Steel Group Company, Hangzhou 310022, China

[Abstract] Objective To investigate the expression of AKIP1 and PKA in epithelial ovarian cancer and correlation with prognosis. Methods 72 cases tissue specimen of epithelial ovarian cancer were selected and stained with immunohistochemistry to detect the expression of AKIP1 and PKA, and 30 cases tissue specimen of normal ovary were selected as control groups, and all patients were follow-up visited, correlation between expression of with AKIP1 and PKA with prognosis were analyzed. Results Expressive positive rate of AKIP1 and PKA was lower in epithelial ovarian cancer than in normal ovary, expressive positive rate of AKIP1 and PKA was discrepant in different TNM stage and differentiation of epithelial ovarian cancer, survival rate in two years was higher in patients with positive expression of AKIP1 and PKA than in patients with negative expression of AKIP1 and PKA. Conclusion Expression deletion of AKIP1 and PKA was correlative with genesis and progression of epithelial ovarian cancer, and could appraisal to prognosis.

[Key words] Epithelial ovarian cancer; AKIP1; PKA; Tumor stage; Differentiation; Prognosis

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤，卵巢癌的惡性程度高，極富侵襲力，早期診斷十分困難，預(yù)后差，臨床治療多難以取得滿意的效果。卵巢癌的發(fā)生與細(xì)胞的異常增殖及凋亡機(jī)制的失調(diào)有關(guān)[1]，在惡性腫瘤發(fā)生時(shí)，與腫瘤相關(guān)的標(biāo)志性細(xì)胞因子多表達(dá)異常，并能夠?yàn)槟[瘤的定性診斷提供具有價(jià)值的線索。AKIP1、PKA是近年研究發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)的細(xì)胞因子，本文就其在上皮性卵巢癌的表達(dá)及其價(jià)值進(jìn)行研究，為卵巢癌的診斷及預(yù)后評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇我院2007年1月～2009年1月手術(shù)切除的上皮性卵巢癌組織標(biāo)本72份，患者年齡36～71歲，平均（47.0±11.6）歲；患者腫瘤TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期27例。選擇同期手術(shù)切除的正常卵巢組織標(biāo)本30例作為對(duì)照組，患者年齡35～69歲，平均（48.0±13.4）歲，排除合并其他器官系統(tǒng)惡性腫瘤患者、術(shù)前接受放射治療或化療患者、合并免疫系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤患者。所有患者均具有完整的隨訪資料。兩組間患者年齡無顯著差異（P ＞ 0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器及試劑

M330792型切片機(jī)（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司），CX21型顯微鏡（日本奧林巴斯公司），JWL型微波修復(fù)儀、HH-601型恒溫水浴箱（常州普森電子儀器廠），鼠抗人AKIP1單克隆抗體、鼠抗人PKA單克隆抗體（美國AU公司）、PBS緩沖液、枸櫞酸緩沖液、固定液等試劑由本院病理科提供。

1.3 AKIP1、PKA蛋白檢測(cè)方法

組織標(biāo)本免疫組化染色采用SP法，組織標(biāo)本切除后常規(guī)固定、石蠟包埋，2 μm厚度連續(xù)切片，脫蠟水化，枸櫞酸溶液浸泡，微波修復(fù)暴露抗原，PBS緩沖液沖洗，滴加過氧化氫溶液消除內(nèi)源性過氧化氫酶活性，PBS緩沖液沖洗，滴加工作濃度一抗，低溫孵育過夜后PBS緩沖液沖洗，滴加二抗，充分反應(yīng)后滴加反應(yīng)終止液終止反應(yīng)，采用DAB顯色，蘇木素染色返蘭，酒精固定、二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4 切片觀察及評(píng)價(jià)

組織標(biāo)本評(píng)價(jià)采用積分法，參照有關(guān)文獻(xiàn)觀察組織染色程度[2]。AKIP1、PKA蛋白陽性染色表現(xiàn)為在淡藍(lán)色背景下棕黃色或者棕褐色顆粒狀染色，染色強(qiáng)度積分采用400倍光鏡下選擇5個(gè)不重疊的視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及核陽性細(xì)胞數(shù)，按陽性細(xì)胞所占的百分比計(jì)分：陽性細(xì)胞率1%～25%計(jì)1分；26%～50%計(jì)2分；51%～80%計(jì)3分；＞80%計(jì)4分。染色強(qiáng)弱程度計(jì)分：不著色計(jì)0分；著色弱計(jì)1分；中等著色計(jì)2分；胞漿強(qiáng)陽或者胞核著色計(jì)3分。根據(jù)兩者的乘積判斷結(jié)果：0分為陰性（-，無表達(dá)）；1～3分為弱陽性（+，低度表達(dá)）；4～6分為中度陽性（++，中度表達(dá)）；8～12分為強(qiáng)陽性（+++，高度表達(dá)）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，采用Log-Rank檢驗(yàn)比較生存曲線的差異，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 上皮性卵巢癌組織AKIP1、PKA蛋白表達(dá)情況

上皮性卵巢癌組織及正常卵巢組織均有AKIP1、PKA蛋白表達(dá)，AKIP1在正常卵巢組織及卵巢癌組織陽性染色表現(xiàn)為細(xì)胞核棕黃色或淡黃色顆粒樣染色；PKA在正常卵巢組織及卵巢癌組織陽性染色表現(xiàn)為細(xì)胞核及細(xì)胞膜的棕黃色及淡黃色顆粒樣染色。在上皮性卵巢癌組織，AKIP1、PKA蛋白的表達(dá)陽性率低于正常卵巢組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1、圖1~4。

2.2 上皮性卵巢癌組織AKIP1、PKA蛋白表達(dá)與臨床及病理特征的關(guān)系

在上皮性卵巢癌組織，不同組織分化程度及不同TNM分期的卵巢癌組織中AKIP1、PKA蛋白的表達(dá)陽性率不同，差異存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 上皮性卵巢癌組織AKIP1、PKA蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

AKIP1陽性患者平均生存時(shí)間21.400個(gè)月，AKIP1陰性患者平均生存時(shí)間12.300個(gè)月，Log-Rank檢驗(yàn)顯示，AKIP1陽性患者生存時(shí)間高于AKIP1陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.29，P = 0.028）；PKA陽性患者平均生存期20.333個(gè)月，PKA陰性患者平均生存時(shí)間12.300個(gè)月，Log-Rank檢驗(yàn)顯示，PKA陽性患者平均生存時(shí)間高于PKA陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.17，P = 0.040）。生存曲線顯示，AKIP1及PKA陽性上皮性卵巢癌患者生存曲線明顯右移。見圖5、6。

3 討論

卵巢癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，臨床診斷多為中晚期，預(yù)后極差，臨床病死率高，是威脅女性生命健康的主要惡性腫瘤之一。卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展同其他器官、系統(tǒng)惡性腫瘤的機(jī)制相似，細(xì)胞凋亡及增殖失平衡導(dǎo)致的細(xì)胞異常分裂、增殖是其主要的發(fā)病原因，其中與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的細(xì)胞因子多是細(xì)胞增殖及凋亡密切相關(guān)的蛋白或基因片段，在細(xì)胞增殖、凋亡或相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程中執(zhí)行關(guān)鍵的功能，當(dāng)其表達(dá)失常時(shí)，能夠引起細(xì)胞的異常增殖，如P53、n23等。

AKIP1、PKA是近年來發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞增殖及凋亡密切相關(guān)的細(xì)胞因子。AKIP1是在真核細(xì)胞廣泛表達(dá)的蛋白質(zhì)，是具有催化功能的酶類調(diào)節(jié)亞基，定位在細(xì)胞核上，AKIP1的編碼基因是高度的保守的序列，在AKIP1編碼基因的第5、6位的外顯子位置，能夠?qū)B接的蛋白及酶類進(jìn)行磷酸化，實(shí)現(xiàn)對(duì)其他蛋白功能的調(diào)節(jié)[3]。PKA屬于AKAPs蛋白家族，是在人體內(nèi)作為最為廣泛的酶類之一，PKA蛋白的肽鏈C端是具有催化功能的亞基，其編碼基因是高度保守的序列，該區(qū)域通過氨基酸殘基的變化引起空間構(gòu)象及功能的變化，AKIP1作為一個(gè)蛋白啟動(dòng)序列引起PKA的氨基末端的A螺旋結(jié)構(gòu)的形成，引起構(gòu)象變化[4]，對(duì)PKA的功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，引起其對(duì)細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的調(diào)節(jié)作用，NF-κB包括5個(gè)蛋白亞基，其中p65與p50組成的異二聚體是最常見的組合形式，近年來的研究結(jié)果顯示，AKIP1能連接到NF-κB的p65亞基，同PKA形成PKAc/AKIP1/p65復(fù)合體，調(diào)節(jié)p65進(jìn)入細(xì)胞核的速率，抑制NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性[5]，從而引起細(xì)胞的增殖活性降低。在研究中發(fā)現(xiàn)，在上皮性卵巢癌組織中，AKIP1、PKA的表達(dá)不同程度缺失，而且在不同TNM分期及分化程度的卵巢癌組織中，AKIP1、PKA的表達(dá)陽性率存在明顯的差異，提示其低表達(dá)引起的細(xì)胞核基因轉(zhuǎn)錄異?？赡苁菍?dǎo)致細(xì)胞異常增殖、癌變的原因之一。在體外的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中也證實(shí)[6，7]，AKIP1表達(dá)降低，抑制NF-κB的p65亞基和PKA的相互作用，是宮頸癌、乳腺癌細(xì)胞異常增殖的原因之一。

進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌組織AKIP1、PKA不同表達(dá)的患者，其預(yù)后表現(xiàn)出明顯的差異，AKIP1、PKA陽性表達(dá)的患者，其生存期明顯長于陰性表達(dá)患者，生存曲線右移，提示AKIP1、PKA低表達(dá)的卵巢癌組織惡性程度更高，其表達(dá)情況能夠初步反映腫瘤的生物學(xué)行為特征和惡性程度，提示對(duì)切除的卵巢癌標(biāo)本進(jìn)行AKIP1及PKA的檢測(cè)能夠?yàn)轭A(yù)后評(píng)估提供有價(jià)值的依據(jù)。

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（收稿日期：2011-12-22）