李杰

[摘要] 目的 檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)，并評(píng)估其預(yù)后價(jià)值。 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)86例非小細(xì)胞肺癌和60例正常肺組織中MMP-9和VEGF的表達(dá)，分析其在不同臨床特征中的價(jià)值，關(guān)注其表達(dá)對(duì)判斷預(yù)后的意義。 結(jié)果 非小細(xì)胞肺癌中MMP-9和VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于正常肺組織，MMP-9和VEGF的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌腫瘤的直徑、胸膜侵犯、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，非小細(xì)胞肺癌中MMP-9和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，生存分析顯示MMP-9和VEGF的表達(dá)與患者的預(yù)后有關(guān)。 結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌中MMP-9和VEGF高表達(dá)，MMP-9可能對(duì)腫瘤的血管形成有促進(jìn)作用，聯(lián)合檢測(cè)MMP-9和VEGF的表達(dá)可能與非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；預(yù)后；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R734.2[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）16-0058-02

Expression and significance of MMP-9 and VEGF in non-small cell lung carcinoma

LI Jie

Department of Thoracic Surgery, the Second Hospital of Ningbo City, Ningbo 315000, China

[Abstract] Objective To investigate the protein expressions of MMP-9 and VEGF, observe their relationship and clinical significance on development and metastasis of non-small cell lung carcinoma. Methods We detected the protein expressions of MMP-9 and VEGF by IHC in the non-small cell lung carcinoma (86 cases) and normal lung tissues (60 cases). Their expression relationship and different pathological characters in the non-small cell lung carcinoma were analyzed. Results The protein expressions of MMP-9 and VEGF were higher in the neoplasm than in normal lung tissues. Their expressions were correlated with diameter, pleura invasion, differentiation and lymph node metastasis. Positive correlation between MMP-9 and VEGF protein were found in neoplasm. The expressions of MMP-9 and VEGF were correlated with prognosis. Conclusion The higher expressions of MMP-9 and VEGF are found in non-small cell lung carcinoma. The combined detection of MMP-9 and VEGF may be helpful for prognosis of neoplasm.

[Key words] Non-small cell lung carcinoma; VEGF; MMP-9; Prognosis; Immunohistochemistry

非小細(xì)胞肺癌在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，常存在著旺盛的血管生成?；|(zhì)金屬蛋白酶家族在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的生物學(xué)作用，而且其相關(guān)成員對(duì)腫瘤的血管生成有一定促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，探討腫瘤中MMP-9和VEGF表達(dá)的關(guān)系及對(duì)判斷預(yù)后的意義，旨在為臨床探討腫瘤的發(fā)生發(fā)展及治療提供理論幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

收集我院2007年1月～2008年10月非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后預(yù)留的蠟塊組織。納入均符合WHO關(guān)于肺腫瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)[1]：術(shù)前行放療、化療的患者；臨床資料不完整的患者。觀察組共86例，其中男46例，女40例，年齡34～76歲，平均55.9歲。同時(shí)選取手術(shù)切緣經(jīng)病理證實(shí)為正常的肺組織60例作為對(duì)照組，其中男30例，女30例，年齡35～74歲，平均55.1歲。兩組患者的一般臨床特征比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

MMP-9和VEGF免疫組化試劑的濃縮液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最佳稀釋比例，所有標(biāo)本均應(yīng)用免疫組化SP法進(jìn)行。具體步聚：脫蠟，水化組織切片，3%H2O2去離子水孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；抗原修復(fù)后分別滴加一抗，室溫37℃孵育1～2 h或過(guò)夜，PBS沖洗，5 min×3次；滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫37℃孵育20 min，PBS沖洗，5 min×3次；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫37℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min×3次；應(yīng)用DAB顯色劑顯色；自來(lái)水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。實(shí)驗(yàn)中的檢測(cè)均由同一病理技師完成，并在顯微鏡下顯色觀察，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)[2]

MMP-9和VEGF免疫組化染色結(jié)果均由兩位病理科主治醫(yī)師得出。將MMP-9和VEGF蛋白在細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色定為陽(yáng)性。切片中找5個(gè)典型的高倍視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均應(yīng)用SAS6.12進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間資料的比較采用t檢驗(yàn)，并行相關(guān)性檢驗(yàn)及生存分析，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組中MMP-9和VEGF表達(dá)量的比較

觀察組與對(duì)照組中MMP-9（58.14±5.42 vs 38.33±5.25，t = 5.434 6，P = 0.015 5）和VEGF（65.12±7.26 vs 30.00±6.74，t = 11.326 3，P = 0.000 3）的表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 觀察組MMP-9和VEGF的表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系

觀察組中MMP-9和VEGF的表達(dá)與腫瘤的直徑（55.46±6.53 vs 60.53±6.03；60.53±7.64 vs 68.54±6.59）、胸膜侵犯（56.52±5.93 vs 62.32±6.57；62.32±5.39 vs 71.64±6.48）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（56.94±6.52 vs 63.25±5.49；62.41±6.49 vs 72.19±5.86）及分化程度（55.14±6.05 vs 61.14±7.64；63.42±7.54 vs 69.75±6.94）密切相關(guān)。見(jiàn)表1。

2.3 觀察組中MMP-9和VEGF表達(dá)的相關(guān)性

線性相關(guān)分析即Pearson法結(jié)果顯示，觀察組中MMP-9和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（r = 0.42，P = 0.015 4），而對(duì)照組中MMP-9和VEGF的表達(dá)未見(jiàn)明顯的相關(guān)性（P = 0.243 6）。

2.4 觀察組中MMP-9和VEGF的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

本組患者隨訪時(shí)間為6～60個(gè)月，平均31.3個(gè)月。MMP-9和VEGF陽(yáng)性患者的生存明顯短于MMP-9（25.45±5.46 vs 41.20±6.53）和VEGF（24.36±6.04 vs 41.95±5.93）陰性患者（P ＜ 0.05），即MMP-9和VEGF高表達(dá)的患者預(yù)后差。

3 討論

腫瘤的生物學(xué)是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)，而腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移是重要的生物學(xué)行為。腫瘤的生長(zhǎng)依靠血管生成，而在侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞必須穿過(guò)由細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜構(gòu)成的屏障，而在此過(guò)程中起作用的是基質(zhì)金屬蛋白酶家族。MMP-9是一種鋅離子依賴的蛋白水解酶，也稱明膠酶B，可由腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞以酶原形式分泌并經(jīng)水解后激活，具有較強(qiáng)的降解基底膜成份功能，被認(rèn)為與腫瘤的惡性進(jìn)程、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3，4]。VEGF是由2條相對(duì)分子量為23 000的單鏈組成的蛋白質(zhì)，是目前公認(rèn)的研究較為深入的促血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學(xué)行為均有重要影響，其表達(dá)與腫瘤的預(yù)后有關(guān)[5]，并能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用對(duì)照觀察的方法，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌及正常肺組織中MMP-9和VEGF的表達(dá)，結(jié)果顯示腫瘤中MMP-9和VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，提示二者在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生及進(jìn)展中具有重要作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示觀察組中MMP-9和VEGF的表達(dá)均與腫瘤的直徑、胸膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度密切相關(guān)，由于腫瘤體積、胸膜侵犯、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與患者的預(yù)后有關(guān)，因此聯(lián)合檢測(cè)腫瘤中MMP-9和VEGF的表達(dá)可能對(duì)判斷預(yù)后有一定意義，而且生存分析直接證實(shí)了此結(jié)論。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示非小細(xì)胞肺癌組織中MMP-9和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，提示MMP-9和VEGF在蛋白水平上具有協(xié)同正向作用。MMP-9可能作為上游基因，調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤中新生血管形成，同時(shí)VEGF表達(dá)增加，可以增加腫瘤間質(zhì)毛細(xì)血管壁的通透性。觀察組中的相關(guān)性結(jié)論也進(jìn)一步說(shuō)明了MMP家族在腫瘤的血管化中發(fā)揮重要作用，而對(duì)照組中MMP-9和VEGF的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性，即MMP-9和VEGF在腫瘤中的協(xié)同作用明顯，對(duì)促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展有重要作用。當(dāng)MMP-9引起VEGF的激活后，通過(guò)與細(xì)胞膜上特異性受體結(jié)合而發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)：特異性地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，改變內(nèi)皮細(xì)胞的基因表達(dá)方式，增加微血管的新生[6，7]。因此，MMP-9和VEGF的協(xié)同作用可能是非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的通路，具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究明確。因此，設(shè)想阻斷MMP-9和VEGF通路的治療，可能成為非小細(xì)胞肺癌治療的新策略。

綜上所述，非小細(xì)胞肺癌中MMP-9和VEGF高表達(dá)，MMP-9和VEGF可能具有協(xié)同作用，二者對(duì)腫瘤的進(jìn)展有促進(jìn)作用，聯(lián)合檢測(cè)MMP-9和VEGF的表達(dá)可能與患者的預(yù)后有關(guān)。

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（收稿日期：2012-01-06）