王鵬

（廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科，廣州510120）

砂半理中湯合小陷胸湯對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎作用機(jī)制初探

王鵬

（廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科，廣州510120）

目的初步探討砂半理中湯合小陷胸湯對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎作用機(jī)制。方法采用賁門成形+幽門結(jié)扎+胃空腸Roux-en-Y吻合術(shù)建立大鼠實(shí)驗(yàn)性食管炎模型。分別隨機(jī)分組設(shè)立中藥組、反流對(duì)照組及無反流對(duì)照組，再分別給予砂半理中湯合小陷胸湯、生理鹽水、生理鹽水灌胃治療后，觀察大鼠胃排空情況，測定食管組織中NO含量及血漿胃動(dòng)素水平，并取食管組織進(jìn)行HE染色行光鏡檢查。結(jié)果中藥組大鼠食管組織中NO含量較反流對(duì)照組低（P＜0.05）、胃排空率高（P＜0.05）；中藥組大鼠血漿胃動(dòng)素含量較反流對(duì)照組高（P＜0.05）；中藥組大鼠黏膜上皮細(xì)胞鱗狀上皮增生與黏膜固有層乳頭延伸均有明顯改善，黏膜層血管充血狀況改善，炎性細(xì)胞浸潤減少且病理積分較反流對(duì)照組明顯增高。結(jié)論砂半理中湯合小陷胸湯可能通過降低食管黏膜NO濃度從而減輕食管炎癥反應(yīng)、改變胃動(dòng)素水平、促進(jìn)胃排空的機(jī)制治療大鼠實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎。

砂半理中湯；小陷胸湯；反流性食管炎；NO；胃動(dòng)素；胃排空

反流性食管炎（reflux esophagitis，RE）是由于胃與食管交界處抗反流屏障功能障礙而導(dǎo)致的胃或十二指腸內(nèi)容物反流入食管，引起食管組織黏膜損害[1]。常并發(fā)于胃食管反流?。℅ERD）。胃與食管交界處的抗反流屏障包括食管下段括約肌的正常功能、食管上皮細(xì)胞增生和修復(fù)能力、賁門括約肌的正常功能、食管酸清除功能、胃的正常排空功能。若以上功能失調(diào)或障礙均可導(dǎo)致反流性食管炎的發(fā)生。該疾病西醫(yī)治療以抑制胃酸，增加上消化道動(dòng)力，加強(qiáng)食管黏膜屏障為主。常用藥物有H2受體拮抗劑、促胃腸動(dòng)力藥、質(zhì)子泵抑制劑、抗酸藥等。但存在療程長，藥物副作用大，停藥易復(fù)發(fā)的缺點(diǎn)。

近年來我們觀察了以砂半理中湯合小陷胸湯為主方隨證加減治療反流性食管炎，取得了較好的效果。為驗(yàn)證砂半理中湯合小陷胸湯對(duì)反流性食管炎治療效果、探討中藥治療的作用機(jī)理，我們進(jìn)行了砂半理中湯合小陷胸湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎大鼠的食管黏膜組織病理、胃排空時(shí)間、胃動(dòng)素和食管組織NO含量的測定的實(shí)驗(yàn)研究?，F(xiàn)報(bào)告結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠240～250g，雌雄各半。SD大鼠由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物砂半理中湯合小陷胸湯為主方。藥物組成：清半夏、制香附、高良姜、炒枳殼（或炒枳實(shí)）、砂仁各9g（打碎），黃連3g，瓜蔞仁18g。藥材煎成生藥濃度為1 g/mL的水煎劑裝瓶，置4℃冰箱備用。安慰劑：生理鹽水（pH=7.01）。

1.2 方法

1.2.1 造模方法行賁門成形十幽門結(jié)扎十胃空腸Rouxen-Y吻合術(shù)[2]大鼠購回后適應(yīng)環(huán)境7d，于手術(shù)前禁食24h，手術(shù)采用4%的水合氯醛0.5mL/100g體重腹腔注射麻醉后將大鼠置于手術(shù)臺(tái)，取上腹部正中切口進(jìn)腹，縱行切開賁門長約0.5cm，兩端分別達(dá)食管和胃，用6～0無創(chuàng)縫線橫向間斷縫合；而后分離幽門血管，結(jié)扎幽門；再于距幽門約8～10cm處切斷空腸，其遠(yuǎn)切端與腺胃的大彎行端側(cè)吻合，近切端吻合于距切斷緣約12～15cm處的小腸側(cè)壁（端側(cè)吻合）。術(shù)后禁食24h，不禁水。

1.2.2 分組于術(shù)后3周將造模大鼠（術(shù)后恢復(fù)較好者）隨機(jī)分為2組，每組10只。造模時(shí)同時(shí)制作一組開腹后不手術(shù)即縫合大鼠。也于術(shù)后3周在恢復(fù)較好者中隨機(jī)抽取10只成為無反流對(duì)照組。

以上各組每日灌胃1次，灌胃體積為1mL?100g-1，連續(xù)給藥3周。中藥組予以砂半理中湯合小陷胸湯水煎劑，反流對(duì)照組和無反流對(duì)照組予以安慰劑—生理鹽水。觀察大鼠的活動(dòng)表現(xiàn)、攝食量、進(jìn)水量。

1.2.3 觀測指標(biāo)及測定方法

1.2.3.1 胃排空情況測定末次給藥后1h，每只大鼠分別灌胃0.2ml的甲基橙（0.1%）溶液。20min后脫臼處死動(dòng)物，剖腹摘取胃。置于小燒杯里，放入適量蒸餾水，用小剪刀剪開胃，將胃內(nèi)容物充分洗于蒸餾水中，倒入刻度離心管，用水補(bǔ)足10ml，以2000r/min，離心10min。取上清液，在波長420nm處比色，測量溶液的光密度，測得的光密度為胃中甲基橙光密度。以0.1%甲基橙0.2ml加入10ml蒸餾水搖勻后測量其光密度，作為基數(shù)甲基橙光密度，按下列公式計(jì)算甲基橙胃殘留率：

甲基橙胃殘留率(%)=胃甲基橙光密度基數(shù)甲基橙光密度×100%

甲基橙胃殘留率的高低可反映胃排空的快慢。

1.2.3.2 食管勻漿NO含量測定取下食管下段，用生理鹽水輕輕沖洗食管腔后，取0.2g新鮮食管下端組織，制備2ml勻漿，4℃中10000轉(zhuǎn)/min，離心10min，取上清1ml置-20℃保存。NO試劑盒購自第三軍醫(yī)大學(xué)臨床微生物研究室。檢測時(shí)應(yīng)用酶標(biāo)儀（540nm波長）比色。

1.2.3.3 胃動(dòng)素含量測定同時(shí)從眼眶靜脈取血約2mL，4℃離心血漿，-20℃冰箱儲(chǔ)存待測胃動(dòng)素，應(yīng)用胃動(dòng)素放免試劑盒及自動(dòng)免疫計(jì)數(shù)器測定。

1.2.3.4 食管黏膜組織觀察處死后從大鼠食道賁門上緣取食管約2cm，將標(biāo)本放入40g/L的甲醛固定后，作HE染色行光鏡檢查。RE病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考現(xiàn)行西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)過程中，動(dòng)物死亡4只（反流對(duì)照組2只，中藥組、無反流對(duì)照組各1只），死亡原因包括內(nèi)臟穿孔1只、出血1只、嚴(yán)重反流致窒息2只。

2.1 食管勻漿NO含量測定結(jié)果見表1。

表1 各組食管勻漿NO含量

經(jīng)t檢驗(yàn)，中藥組較反流對(duì)照組食管勻漿NO含量低（P＜0.05）；反流對(duì)照組較無反流對(duì)照組食管勻漿NO含量高（P＜0.05）。

2.2 各組大鼠胃排空情況見表2。

表2 各組甲基橙胃殘留率(n，%)

經(jīng)t檢驗(yàn)，中藥組較反流對(duì)照組甲基橙胃殘留率低（P＜0.05）；反流對(duì)照組較無反流對(duì)照組甲基橙胃殘留率高（P＜0.05）。

2.3 各組大鼠血液胃動(dòng)素含量測定結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠血液胃動(dòng)素含量

經(jīng)t檢驗(yàn)，中藥組較反流對(duì)照組胃動(dòng)素含量高（P＜0.05）

2.4 HE染色光鏡檢查結(jié)果無反流對(duì)照組部分大鼠食管黏膜上皮細(xì)胞層內(nèi)間存在少量炎細(xì)胞，余無其它異常表現(xiàn)。反流對(duì)照組大鼠食管黏膜上皮細(xì)胞層內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤，鱗狀上皮增生，黏膜固有層乳頭延伸，部分甚至可見黏膜糜爛、潰瘍形成，黏膜層血管充血增生。中藥組大鼠黏膜上皮細(xì)胞鱗狀上皮增生與黏膜固有層乳頭延伸均有明顯改善，黏膜層血管充血狀況改善，炎性細(xì)胞浸潤減少。

表4 各組食道組織病理積分比較(n)

中藥組與反流對(duì)照組相比病理積分有顯著差異（P＜0.05）。

3 討論

目前的研究表明：在人工制備的反流性食管炎動(dòng)物模型中，其食管組織中NO濃度與對(duì)照組比較，其差異有非常顯著性。酸反流后刺激食管組織產(chǎn)生NO，NO一方面充當(dāng)了炎癥介質(zhì)的作用，引起食管炎，而當(dāng)NO達(dá)到一定的濃度時(shí)，將引起毒性作用，造成細(xì)胞和組織的損害，同時(shí)NO作為下食管括約肌松弛（TLESR）的始動(dòng)因子，引起下食管括約?。↙ES）松弛，加重食管炎；另一方面，NO可能對(duì)胃黏膜有保護(hù)作用，引起食管上皮的血管擴(kuò)張，改變血管通透性和增加食管上皮的保護(hù)功能及完整性。并提示二者的作用同時(shí)存在，且以前者為主[4]。本次實(shí)驗(yàn)中，反流對(duì)照組較無反流對(duì)照組食管勻漿NO含量高（P＜0.05），也說明反流性食管炎的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物食管組織中NO含量明顯升高。中藥組較反流對(duì)照組食管勻漿NO含量低（P＜0.05），從而提示砂半理中湯合小陷胸湯可能通過降低食管黏膜NO濃度而減輕食管炎癥反應(yīng)，減少TLESR的發(fā)作時(shí)間和次數(shù)，改善LES松弛，從而治療反流性食管炎。

胃排空時(shí)間延長是導(dǎo)致GERD的重要原因。因此增加上消化道動(dòng)力，促進(jìn)胃排空是GERD基本的治療原則。對(duì)GERD的有效治療是預(yù)防和治療RE的重要途徑。本實(shí)驗(yàn)中反流對(duì)照組較無反流對(duì)照組甲基橙胃殘留率高（P＜0.05），說明反流性食管炎模型動(dòng)物胃排空明顯減緩。中藥組較反流對(duì)照組甲基橙胃殘留率低（P＜0.05）提示砂半理中湯合小陷胸湯可以有效提高胃排空率，從而達(dá)到輔助治療反流性食管炎的目的。

胃動(dòng)素是多肽類胃腸激素，其主要生理作用是調(diào)節(jié)胃腸道的運(yùn)動(dòng)，它可以刺激胃腸道和膽道運(yùn)動(dòng)，對(duì)胃、腸和胰腺的分泌也有影響。實(shí)驗(yàn)顯示：砂半理中湯合小陷胸湯可以提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液內(nèi)的胃動(dòng)素含量，從而達(dá)到增加大鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)胃排空的作用。這對(duì)反流性食管炎的治療也是非常有利的。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)合食道黏膜組織病理學(xué)研究驗(yàn)證了砂半理中湯合小陷胸湯對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性RE食道黏膜皮炎癥的改善作用，其機(jī)理可能是通過降低食管黏膜NO濃度從而減輕食管炎癥反應(yīng)，減少TLESR的發(fā)作時(shí)間和次數(shù)，改善LES松弛；以及改變胃動(dòng)素水平，促進(jìn)胃排空的機(jī)制治療大鼠實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎。

[1]李軍杰,鄭勇.胃腸激素與反流性食管炎[J].世界華人消化雜志,2006,(15)14∶1493-1497.

[2]王雯,李兆申,許國銘.不同方式建成3種反流性食管炎模型[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2000,(3)∶171.

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡學(xué)會(huì).反流性食管病(炎)診斷及治療方案[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,1999,16(6)∶326-327.

[4]胡運(yùn)彪,許樹長,戴軍.一氧化氮在實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎發(fā)病機(jī)制中的作用[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,1999,16(6)∶331-333.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.14.108

：1672-2779（2012）-14-0156-02

：楊燕平

2012-05-11）