陳 蕾 吳 曉 洪超群 張 灝

1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院內(nèi)科，廣東 汕頭 515031；2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究實(shí)驗(yàn)室，廣東 汕頭 515031；3.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院，廣東 汕頭 515031；4.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院腫瘤研究實(shí)驗(yàn)室，廣東 汕頭 515031

在西歐等發(fā)達(dá)地區(qū)乳腺癌發(fā)病率居女性癌瘤首位。近年來我國不論沿海發(fā)達(dá)地區(qū)還是城鄉(xiāng)較落后地區(qū)乳腺癌發(fā)病率均呈快速上升趨勢，甚至于超過西方發(fā)達(dá)國家水平。而復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌既是臨床治療的難點(diǎn)，也是引起乳腺癌死亡的主要原因。隨著乳腺癌基因分型的發(fā)展和個體化治療研究的深入，乳腺癌是一類高度異質(zhì)性的腫瘤已得到了醫(yī)學(xué)界的共識。但基因分型技術(shù)還不夠成熟，還有許多未知問題，還有不斷深入研究的必要。同時乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移也是研究的重點(diǎn)并更具臨床意義。因此，乳腺癌在分子病理水平的研究將越來越深入。乳腺癌擴(kuò)增基因1（amplified in breast cancer 1，AIB1）作為第一個被證實(shí)的共激活因子癌基因（oncogenic coactivator）目前已廣泛應(yīng)用各種腫瘤的研究[1]，探討AIB1在乳腺癌中的表達(dá)及其與腫瘤進(jìn)展與轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，也將帶動乳腺癌新的分子觀測點(diǎn)研究的深入。

1 材料與方法

1.1 材料

收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院送檢的2003年1月～2008年12月乳腺癌活檢或手術(shù)標(biāo)本113例，整理臨床數(shù)據(jù)資料。并對于所取患者資料進(jìn)行電話生存隨訪。入組患者共113例，全部為女性乳腺癌，年齡最大88歲，最小30歲，中位年齡51歲。病灶組織病理類型中浸潤性導(dǎo)管癌92例，占81.4%，浸潤性小葉癌11例，占9.7%，其他10例，占8.8%。113例患者隨訪率為94.7%，其中失訪6例，失訪率為5.3%。死亡46例，占40.7%，生存61例，占54.0%。轉(zhuǎn)移包括腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、顱內(nèi)轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、胸壁轉(zhuǎn)移、胸膜轉(zhuǎn)移等，其中腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移算一個轉(zhuǎn)移區(qū)域。

1.2 免疫組織化學(xué)染色操作方法

兔抗人AIB1單克隆抗體 （試劑批號：0308）購自Santa Cruz公司。采用Dako GTVision兩步法，4 μm石蠟組織切片經(jīng)二甲苯3次逐級脫蠟，每次10 min，無水乙醇2次；梯度乙醇至水；3%H2O2溶液封閉內(nèi)源性過氧化物酶10 min；采用10 mmol/L EDTA（pH 9.0）微波抗原修復(fù)；一抗（1∶450 稀釋）4℃過夜；即用型二抗室溫作用30 min；DAB顯色10 min，蘇木素復(fù)染2 min；1%鹽酸乙醇分色；脫水，透明，中性樹膠封片。

1.3 預(yù)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果判定

本課題正式實(shí)驗(yàn)前，先由我院病理科醫(yī)師抽取10例非乳腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以預(yù)測AIB1在正常乳腺組織的表達(dá)情況，結(jié)果顯示AIB1在正常乳腺導(dǎo)管上是沒有表達(dá)的，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和AIB1的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，做出本次結(jié)果判斷依據(jù)。

結(jié)果判定：由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院病理科醫(yī)師采用單盲法閱片，隨機(jī)選取5個高倍視野計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)。AIB1以細(xì)胞核出現(xiàn)明顯的黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞信號，≥5%視為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，生存分析用Kaplan-meier法，單因素分析采用Log-rank檢驗(yàn)，多因素分析用COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型，確立影響乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AIB1蛋白在乳腺癌的表達(dá)

對于全組患者標(biāo)本進(jìn)行AIB1免疫組化檢測，113例乳腺癌標(biāo)本中，103例為可評價(jià)標(biāo)本，10例為不可評價(jià)標(biāo)本，可用乳腺癌標(biāo)本AIB1表達(dá)的陽性率為55.3%（57/103）。

2.2 AIB1與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

單因素分析顯示，AIB1表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體-2（Her-2）表達(dá)、病理類型、絕經(jīng)狀態(tài)、生存時間之間均有相關(guān)性，Logrank檢驗(yàn)得出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位、是否三陰型無相關(guān)性，Log-rank檢驗(yàn)得出差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1?；颊逜IB1不同表達(dá)與生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。

2.3 COX多因素分析

COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型多因素分析結(jié)果顯示，AIB1不是影響乳腺癌總生存的獨(dú)立預(yù)后因素（OR=0.548，P=0.128），影響乳腺癌總生存的獨(dú)立預(yù)后因素分別是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位的多少（OR=1.526，P=0.002）和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目（OR=1.813，P=0.034）。 見表 2。

3 討論

表1 乳腺癌擴(kuò)增基因1與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系（n=103，例）

乳腺癌擴(kuò)增基因1（AIB1基因）定位于人染色體20q12，最初發(fā)現(xiàn)于人乳腺癌擴(kuò)增的染色體區(qū)，故首次命名為乳腺癌擴(kuò)增性抗原 （amplified in breast cancer 1，AIB1），它與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、內(nèi)分泌治療耐藥及不良預(yù)后關(guān)系密切。AIB1的過度表達(dá)可能通過影響許多重要的信號通路而啟動或抑制腫瘤的發(fā)生[1]。Anzick等[2]的研究表明，AIB1通過與雌激素受體相互作用，能強(qiáng)烈地增強(qiáng)雌激素受體的促進(jìn)靶基因轉(zhuǎn)錄的效應(yīng)，進(jìn)而引起細(xì)胞增殖和腫瘤形成。Bouras等[3]、Xie等[4]的研究表明，AIB1的擴(kuò)增和高表達(dá)也可出現(xiàn)在ER、PR為陰性的乳腺癌和其他實(shí)體瘤上，如食管癌、大腸癌?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的有AIB1、AIB3、AIB4。AIB1作為第一個被證實(shí)的共激活因子癌基因目前已廣泛應(yīng)用各種腫瘤的研究[5-7]。有研究表明AIB1與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性[8-11]。Lee等[12]研究表明AIB1表達(dá)在ER陰性的乳腺癌與較差的預(yù)后相關(guān)。Song等[13]研究認(rèn)為AIB1表達(dá)可以作為肝細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)測預(yù)后的獨(dú)立生物標(biāo)志物。Kefalopoulou等[14]研究認(rèn)為AIB1等表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的預(yù)后相關(guān)。

表2 COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型

本研究通過檢測乳腺癌組織標(biāo)本中的AIB1表達(dá)，探討AIB1與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系，并得出一系列有意義的結(jié)果，這使筆者認(rèn)識到生物標(biāo)志物研究對于臨床實(shí)踐的指導(dǎo)意義。本研究單因素分析顯示，AIB1表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR、Her-2表達(dá)、病理類型、絕經(jīng)狀態(tài)、生存時間均有相關(guān)性，Log-rank檢驗(yàn)得出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）；而與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位、是否三陰型無相關(guān)性，Log-rank檢驗(yàn)得出差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。COX回歸模型多因素分析結(jié)果顯示，AIB1不是影響乳腺癌總生存率的獨(dú)立預(yù)后因素（P=0.128），影響乳腺癌總生存率的獨(dú)立預(yù)后因素分別是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位的多少和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目 （P=0.002、P=0.034）。說明轉(zhuǎn)移部位越多，或者腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目越多，患者生存時間越短。這與臨床實(shí)踐及文獻(xiàn)報(bào)道相符。

綜上所述，本研究認(rèn)為AIB1表達(dá)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR、生存時間等臨床病理特征密切相關(guān)，檢測AIB1蛋白表達(dá)情況有助于判斷乳腺癌的預(yù)后，可以作為乳腺癌生物標(biāo)志物進(jìn)行進(jìn)一步臨床對比研究。

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