蘇紅 譚愛玲 許少英 胡文娟 車胡毓

冷沉淀是新鮮冰凍血漿在1 ℃～4 ℃條件下不溶解的白色沉淀物，其中主要含有五種成分：纖維蛋白原(Fg)、FⅧ、血管性假血友病因子(vWF)、凝血因子XⅢ、纖維結(jié)合蛋白(Fn)等多種成分。冷沉淀是存在于血液中的一種功能性成分，具有廣泛的生理功能和很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。近年來，冷沉淀的應(yīng)用已突破傳統(tǒng)的用于甲型血友病、纖維蛋白原及凝血因子缺乏所致的出血性疾病的治療，在臨床腫瘤手術(shù)、多發(fā)傷和手術(shù)創(chuàng)傷、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、深度燒傷、黏膜和皮膚疾病、自發(fā)性氣胸、糖尿病足等方面得到廣泛應(yīng)用，并且取得了顯著的效果。冷沉淀中FⅧ 因子極其不穩(wěn)定，F(xiàn)Ⅷ的體內(nèi)生物半衰期變化較大，一般為8～12 h，其活性易喪失[1-2]。新鮮速凍血漿(FFP)融化后，F(xiàn)Ⅷ因子活性隨著時(shí)間的延長而有明顯的降低，其活性衰減了41.17%[3]。從全血采集到新鮮冰凍血漿的制備再到冷沉淀的制備的很多環(huán)節(jié)都會(huì)影響冷沉淀的最終質(zhì)量。因此，筆者通過實(shí)際工作中證明，在制備冷沉淀過程中注意把握關(guān)鍵環(huán)節(jié)，才能制備出優(yōu)質(zhì)的冷沉淀。

1 資料與方法

1.1 一般資料 冷沉淀原料漿來源：本中心流動(dòng)采血車采集的四聯(lián)袋全血，要求在6 h之內(nèi)制備并凍結(jié)成塊的且各項(xiàng)檢測合格的新鮮冰凍血漿。

1.2 儀器設(shè)備 美國 SORVALL RC-12BP大容量冷凍離心機(jī)，費(fèi)森尤斯 Compomat G4血液分離機(jī)，低溫操作臺(tái)，低溫周轉(zhuǎn)冰箱，4 ℃貯血冰箱/恒溫水浴箱，塑料卡子，MBF21血漿速凍機(jī)、熱合機(jī)。

1.3 方法

1.3.1 制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀原料漿 (1)全血(原料)的選擇：制備冷沉淀選擇采血順暢、采集到的全血及時(shí)將資料錄入電腦后即放貯血專用冰箱儲(chǔ)存。目前我國自愿無償獻(xiàn)血已取代計(jì)劃無償獻(xiàn)血，多以街頭采血為主，接血司機(jī)應(yīng)按規(guī)定及時(shí)將血接回中心待檢庫。(2)保持良好的冷鏈系統(tǒng)：街頭采集的血液應(yīng)儲(chǔ)存在2 ℃～6 ℃冰箱中，血液從采血點(diǎn)到待檢庫的運(yùn)輸必須裝入已降溫的血液專用隔熱冷藏箱中，不能放入常溫容器更不能僅用塑料袋包裝。(3)盡快低溫分離成分血：血液從全血到分離成紅細(xì)胞和血漿操作過程，要盡量縮短暴露于室溫下的時(shí)間，因此盡快并保持低溫分離是保證血液質(zhì)量、減少FⅧ 因子衰減的關(guān)鍵。把握好時(shí)間、溫度這兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，能夠最大限度減少血漿中FⅧ等不穩(wěn)定成分的損失，得到優(yōu)質(zhì)的新鮮冰凍血漿，新鮮冰凍血漿中凝血因子Ⅷ含量必須≥0.7 IU/ml[2]。

1.3.2 制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀 (1)設(shè)備的準(zhǔn)備：采用冰箱融化法制備時(shí)，需提前10～14 h將原料漿放在4 ℃貯血冰箱內(nèi)融化，每層擺放200 ml血漿10袋(室溫超過30 ℃進(jìn)擺放13袋)。每部冰箱放5層，血漿之間不能重疊，使其融化成帶小冰碴的糊狀半流質(zhì)。采用恒溫?fù)u擺式水浴融化法制備時(shí)，原料血漿提前放入預(yù)置溫度為2 ℃的融化箱中，制備當(dāng)日解凍期間將離心機(jī)溫度設(shè)定在0 ℃～4 ℃ ，并打開低溫操作臺(tái)及開始預(yù)冷血漿速凍機(jī)使溫度降至-50 ℃。做好設(shè)備預(yù)設(shè)達(dá)到適合該成分血溫度要求是保證產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。(2)融化冷沉淀原料血漿：將血漿輕放入血漿解凍箱，啟動(dòng)解凍程序，在2 ℃循環(huán)水浴中自行融化，隨時(shí)觀察血漿的融化情況，此環(huán)節(jié)可設(shè)定時(shí)鐘。由于血漿融化需99～120 min，定時(shí)鐘可提醒工作人員，避免出現(xiàn)融化過度的情況。選擇恰當(dāng)?shù)娜诨K點(diǎn)很關(guān)鍵，以筆者經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)多數(shù)血漿融化至冰塊直徑4～5 cm、厚度約l cm時(shí)，終止融化最為恰當(dāng)。經(jīng)過配平、離心，待分離時(shí)，冰塊基本融化剩少量冰渣，冷沉淀達(dá)最佳分離狀態(tài)。如果選擇冰渣量很少或基本無冰渣為終點(diǎn)，就會(huì)融化過度，待分離時(shí)，有的會(huì)出現(xiàn)冷沉淀溶解的狀況，造成冷沉淀含量降低；如果選擇終點(diǎn)提前，冰塊過大，會(huì)造成冷沉淀容量超標(biāo)?？焖僭诘蜏夭僮髋_(tái)上配平血漿，在已降溫的離心機(jī)離心。美國 SORVALL RC-12BP大容量冷凍離心機(jī)可設(shè)0 ℃～4 ℃、4036 g、8 min。盡快分離熱合速凍。(3)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：由200 ml FFP制備的冷沉淀：FVⅢ含量≥80 IU/200 ml，F(xiàn)g含量≥(150～200)ml，容量(25±5)ml/袋。符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)則為合格[4]。

2 結(jié)果

筆者所在中心2010年2-5月份冷沉淀質(zhì)量控制結(jié)果顯示，被抽檢16份冷沉淀中有12份合格，4份不合格，每月抽檢的冷沉淀都有一份不合格，不合格率25%。不合格原因均為FⅧ 因子含量達(dá)不到80 IU。通過對(duì)上述各個(gè)環(huán)節(jié)的不斷改進(jìn)和控制，2010年6-9月份冷沉淀質(zhì)量控制科抽檢16份全部合格，合格率為100%。

3 討論

冷沉淀制備的質(zhì)量控制涉及到全血的采集、儲(chǔ)存和運(yùn)輸、分離以及新鮮冰凍血漿的融化、分離、入庫等諸多環(huán)節(jié)，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的失控，都會(huì)影響到冷沉淀的最終質(zhì)量。質(zhì)量控制的關(guān)鍵是減少冷沉淀中的不穩(wěn)定成分FⅧ 因子的損失。在工作量大時(shí)，要先分離用做冷沉淀原料漿的血液，減少FⅧ因子損失。分離出的血漿盡快置-50 ℃血漿速凍機(jī)30 min速凍成型后，移入-18 ℃以下冰箱保存，留作冷沉淀原料漿。冷沉淀原料漿各袋容量差別最好不超30 ml，這樣能保證基本同步融化。若容量差超過40 ml，血漿融化程度差別很大，影響冷沉淀質(zhì)量。本中心已全部采用費(fèi)森尤斯 Compomat G4血液分離機(jī)分離血漿，按照設(shè)定的程序進(jìn)行操作，容量達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化，避免了人為做成的容量差異，為制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀打下良好基礎(chǔ)。密閉式分離在低溫操作臺(tái)上進(jìn)行，所得冷沉淀成品入庫前應(yīng)放在低溫操作臺(tái)上，注意盡量降低環(huán)境溫度。因FⅧ的活性隨溫度的升高破壞很大，所以控制的核心內(nèi)容是保持血液的冷鏈系統(tǒng)，最大限度地減少血液/血制品在常溫下的時(shí)間。盡快放到速凍機(jī)復(fù)凍后將冷沉淀在-18 ℃以下冰箱保存。控制好設(shè)備和環(huán)境溫度、制備的最佳時(shí)間等環(huán)節(jié)，才能保證制備出合格優(yōu)質(zhì)的冷沉淀。要保證各個(gè)環(huán)節(jié)的的嚴(yán)格受控，制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀，除了配備必要的設(shè)備外，還要提高員工的質(zhì)量意識(shí)和效率意識(shí)，提高專業(yè)技能，兩個(gè)方面缺一不可。

[1]田兆嵩.臨床輸血進(jìn)展(何子毅，田兆嵩，冷沉淀的臨床應(yīng)用)[M].成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2010：9.

[2]楊孝順，安梅，阮光萍，等.冷沉淀在臨床外科手術(shù)中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志，2005，18(3)：255-257.

[3]楊江存，李芒會(huì)，于青，等.新鮮冰凍血漿融化后不同放置時(shí)間凝血因子的變化[J].中國輸血雜志，2005，18(3)：2l1-2l2.

[4]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).GB18469-2001.全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002：9-10.