應(yīng)國華 呂明亮 薛振文 李伶俐 吳邦仁 徐 波 張新華

(1.浙江麗水市林業(yè)科學(xué)研究院,浙江 麗水 323000;2.麗水市大山菇業(yè)研究開發(fā)有限公司,浙江 麗水 323000 3.麗水市農(nóng)業(yè)局,浙江 麗水 323000;4.縉云縣食用菌辦公室,浙江 縉云 321400;5.縉云縣食用菌辦蓮都區(qū)食用菌推廣站,浙江 縉云 321400)

麗水是世界人工栽培香菇的發(fā)源地,是國內(nèi)最為集中的香菇生產(chǎn)基地,現(xiàn)從事香菇栽培的農(nóng)民達20多萬,年栽培量5億多袋,產(chǎn)鮮香菇40多萬噸。以香菇為主的食用菌產(chǎn)業(yè)是山區(qū)農(nóng)民最主要的經(jīng)濟來源。近幾年來,隨著生產(chǎn)年數(shù)的增加、氣候異常變化的加劇,香菇生產(chǎn)事故不斷,尤其是使用了帶病毒的香菇菌種引發(fā)的香菇病毒病事件明顯增多。由此引起的生產(chǎn)糾紛嚴重影響香菇產(chǎn)業(yè)、菇農(nóng)收入及社會穩(wěn)定。2009年在浙江省科技廳的資助下,對香菇病毒病機器防控關(guān)鍵技術(shù)進行研究,取得顯著成效。

1 香菇病毒病的概況

1.1 香菇病毒病的概念及國內(nèi)外的研究概況

香菇病毒病是指由于使用了感染有香菇病毒的菌種,在栽培環(huán)境的綜合作用下,導(dǎo)致香菇菌絲內(nèi)的病毒大量復(fù)制增殖,引起香菇菌絲代謝紊亂,導(dǎo)致退菌、爛棒、子實體畸形、產(chǎn)量降低乃至絕收的一種病害。

香菇病毒病的研究起步較晚而且不夠深入,1970年Inouye首次從香菇菌絲中分離出一種病毒。Ushiyama從不正常的香菇子實體中分離出了3種大小分別約為25 nm、30 nm、39 nm的球狀病毒。在我國,1991年上海市農(nóng)科院潘迎捷等從染病的香菇菌絲中分離出一種34 nm的球狀單鏈 RNA病毒顆粒。上世紀90年代,潘迎捷、陳明杰等對香菇病毒病進行了分離和電鏡觀察研究,發(fā)現(xiàn)并報道了我國栽培的香菇中發(fā)現(xiàn)直徑為28 nm、36 nm和40 nm的球形病毒及20×100～200(nm)的桿狀病毒,研究發(fā)現(xiàn),由于多年大規(guī)模的生產(chǎn)以及栽培環(huán)境的原因,菇體與菌種感染病毒的情況非常普遍。

1.2 香菇病毒病的危害

香菇病毒病是近幾年來生產(chǎn)上經(jīng)常發(fā)生的重大病害,危害巨大,輕者減產(chǎn),重者無收,具體表現(xiàn)在以下3個方面。

(1)多發(fā)重大事故和經(jīng)濟損失。在香菇老產(chǎn)區(qū),小型菌種廠、大多數(shù)菇農(nóng)購買母種、原種,自己擴制栽培種,擴繁系數(shù)大,一支母種可擴至1萬袋菌棒,1瓶原種可擴至0.2萬袋菌棒,一旦發(fā)生質(zhì)量事故,涉及的菌棒數(shù)量巨大,經(jīng)濟損失嚴重。如2005年以來僅我們知道的因為典型的病毒病癥狀——退菌爛棒的事故超過6起,涉及菌棒4 350萬袋,損失超過億元;發(fā)生不轉(zhuǎn)色、出菇畸形等癥狀的3起,數(shù)量達2 200多萬棒,損失5 600多萬元。

(2)影響社會和諧穩(wěn)定。一方面香菇病毒病的發(fā)生給菇農(nóng)造成很大的經(jīng)濟損失,導(dǎo)致菌種生產(chǎn)單位與菇農(nóng)發(fā)生糾紛,大量菇農(nóng)上訪;另一方面給菌種生產(chǎn)單位造成巨大的經(jīng)濟損失和精神壓力,有的菌種廠為此賠償數(shù)十萬元,甚至有個體制種戶因菌種質(zhì)量事故傾家蕩產(chǎn)或逃避他鄉(xiāng)。這給社會穩(wěn)定和諧帶來了很大的影響。處理香菇事故糾紛,使政府管理部門耗費大量人力、物力、財力。香菇病毒病防控關(guān)鍵技術(shù)研究已成為菌種生產(chǎn)企業(yè)、個人、行業(yè)管理部門亟待解決的課題。

(3)隱蔽性強,缺乏防控技術(shù)。從生產(chǎn)事故的表現(xiàn)看,應(yīng)用感染病毒的菌種進行生產(chǎn),母種、原種、栽培種階段菌絲不表現(xiàn)癥狀,一旦發(fā)病,都是在香菇菌棒階段,且大多是香菇菌絲發(fā)滿袋后才表現(xiàn)出來,此時已經(jīng)無法補救。

2 香菇病毒病主要癥狀及類型

香菇病毒病營養(yǎng)生長階段和子實體階段的表現(xiàn)癥狀不同,并且在生產(chǎn)上表現(xiàn)出多種癥狀。

2.1 菌種階段癥狀

(1)母種階段癥狀。發(fā)病 (病毒大量增殖、含量大)的母種菌絲會表現(xiàn)出生長緩慢、不整齊,局部伴有缺刻或菌絲紊亂現(xiàn)象的典型癥狀。在大多數(shù)情況下,一般攜帶病毒沒有發(fā)病的香菇母種菌絲生長速度、菌絲菌落形態(tài)等外觀指標(biāo)無異,以潛伏感染為主,一般很難識別。

(2)原種、栽培種階段癥狀。感染發(fā)生病毒病的癥狀主要表現(xiàn)在原種和栽培種的菌絲生長后期,常見的癥狀:一是在原種的某一部位開始,培養(yǎng)料中菌絲退化,現(xiàn)出木屑培養(yǎng)料的原有顏色,隨后退化的培養(yǎng)料感染雜菌,菌種報廢。二是在長滿菌絲的原種栽培種瓶 (袋)中出現(xiàn)不均勻的大小不同的花斑或缺刻。三是長滿菌絲的原種栽培種瓶袋,經(jīng)過長時間培養(yǎng),始終不轉(zhuǎn)色。

2.2 菌棒與出菇階段癥狀

菌棒與出菇階段的癥狀可以分為3類。

(1)一是不轉(zhuǎn)色或轉(zhuǎn)色淺伴隨退菌。菌棒在接種后40～50天,菌絲滿袋時開始出現(xiàn)病狀,即菌棒整體保持白色,局部菌絲白度下降,羽毛狀菌絲消失,變灰,呈現(xiàn)斑塊狀退菌,且菌斑處很快出現(xiàn)雜菌感染 (主要是綠霉)。退菌的斑塊與未退菌交界處有褐色的邊界,酷似地圖,俗稱 “香菇地圖病”。退菌到一定程度會停止,未退菌部分菌棒,往往呈白色,不吐黃水,無瘤狀物突起。在接種口和刺孔口周圍料袋脫壁部分形成褐色圈,范圍0.5～1厘米。這種菌棒脫袋后,會慢慢轉(zhuǎn)色,但色澤淺,菌棒很容易斷裂,排場時要非常小心,遇到不良天氣很容易感染綠霉。表現(xiàn) “香菇地圖病”的菌棒也會出菇,但子實體與正常的差異很大,子實體顏色變淺,由正常的褐色變?yōu)辄S褐色,菇形不圓整,肉質(zhì)松軟,單菇重明顯減輕,市場價格與正常的相差50%以上,出菇產(chǎn)量明顯降低。這是危害最大的一種。

(2)轉(zhuǎn)色正常伴隨退菌。菌棒在接種后40～50天,呈現(xiàn)斑塊狀退菌。退菌到一定程度會停止,退菌斑塊很快出現(xiàn)綠霉等雜菌感染。退菌的部位有的在接種口,有的在接種口之間,而多數(shù)沒有規(guī)律。這種菌棒由于退菌范圍較大,除接種口退菌外,脫袋后均會散斷成幾部分。菌棒除了退菌污染部分,其他部分正常轉(zhuǎn)色出菇,菇形、顏色、出菇量均與正常菌棒相同。

(3)轉(zhuǎn)色正常出菇異常。菌絲階段與正常菌棒相同,看不出有差異。據(jù)被調(diào)查制種戶回憶,菌絲比正常生長稍慢,當(dāng)時沒在意,出菇階段,表現(xiàn)出異常:一是菇體由原來全部是單生的變成多數(shù)叢生;二是菌蓋多于半數(shù)不開傘,在同一叢菇中,開傘和不開傘同時存在,開傘的不夠圓整,菌柄長,略扭曲。

3 香菇病毒病發(fā)生的原因

產(chǎn)生病毒病癥狀的香菇菌絲體內(nèi)有大量的病毒顆粒,菌絲纖維素酶、半纖維素酶、木質(zhì)素酶的活性和對木屑培養(yǎng)料中纖維素、半纖維素、木質(zhì)素的降解能力明顯下降。病毒病癥狀是由于病毒顆粒在香菇菌絲體內(nèi)大量復(fù)制后,菌絲體內(nèi)的代謝活動受到了嚴重的抑制而產(chǎn)生紊亂所造成的。引發(fā)香菇病毒病的原因有以下幾種。

3.1 菌種帶病毒

使用帶有病毒的香菇菌種,是生產(chǎn)上較普遍的現(xiàn)象,是近幾年來引發(fā)香菇病毒病的主要原因。

3.2 菌種菌絲活力因素

帶病毒的香菇菌種生產(chǎn)上比較普遍,而病毒病發(fā)生比使用帶病毒的香菇菌種要少,也就是說不是使用帶有病毒的菌種都會發(fā)生病毒病癥狀。類似乙肝病毒攜帶者,或者說菌絲內(nèi)病毒數(shù)量較少,病毒分裂與香菇菌絲生長處于平衡狀態(tài),不會對香菇菌絲生長與轉(zhuǎn)色、出菇造成影響;而一旦菌絲生長衰弱,原來的平衡被打破,就會導(dǎo)致病毒大量繁殖,數(shù)量迅速增加,引起菌絲代謝紊亂,病毒病發(fā)生。有幾例病毒病就是使用了保存多年的菌種。

3.3 環(huán)境因素

環(huán)境因素是導(dǎo)致病毒病發(fā)生的一個重要原因。病毒病多數(shù)都發(fā)生在秋季,菌種菌棒經(jīng)過夏季,高溫、悶熱天氣等因素降低了菌絲的活力,使病毒的抑制因素受到削弱,導(dǎo)致病毒病的發(fā)生。具體的因子及參數(shù)有待進一步研究。

4 香菇病毒病的傳播途徑

香菇病毒病的傳播途徑有4個:一是菌絲傳播。通過保藏和分離的菌種傳播,是主要的傳播途徑。二是昆蟲傳播。通過帶病毒的昆蟲或害蟲咬噬菌絲或子實體,致使菌絲或子實體感染病毒。三是接種工具傳播,特別是同一接種時間有兩個或兩個以上種源轉(zhuǎn)接試管時,容易通過接種工具發(fā)生交叉感染。四是孢子傳播。

5 香菇病毒病防控方法

5.1 建立健全無病毒良種繁殖體系

一是把病毒檢測列入香菇生產(chǎn)標(biāo)準的重要檢測項目,建立香菇病毒檢測機構(gòu)。二是開展香菇病毒檢測工作,主管部門應(yīng)該將此項工作納入香菇菌種安全的重要標(biāo)準,開展普查。三是建立無病毒香菇種源保藏中心,為生產(chǎn)提供無病毒種源。省級科研院所與大型菌種生產(chǎn)單位,對新分離、引進和保藏的種源要進行病毒檢測,對確認不含病毒的香菇種源,進行專門保藏,并對保留的無病毒種源進行定期病毒檢測復(fù)查,以確保種源庫的安全。四是建立種源集中供應(yīng)制度,母種種源由專業(yè)的保藏機構(gòu)負責(zé)供應(yīng)。

5.2 推廣應(yīng)用種源同步出菇技術(shù)

根據(jù)病毒病發(fā)生的主要癥狀,我們發(fā)明了香菇種源同步出菇技術(shù)。該方法主要是在菌種投入生產(chǎn)前,利用特殊的配方進行發(fā)菌、轉(zhuǎn)色、出菇試驗,一般只需要40天左右就可以判斷使用的種源是否會發(fā)生病毒病癥狀。對于不具備檢測條件的菌種生產(chǎn)單位,采用該技術(shù)判斷能夠取得滿意效果。

5.3 規(guī)范菌種生產(chǎn)

菌種生產(chǎn)單位要充分認識香菇病毒病的危害性,提高責(zé)任意識、安全意識。一是引進和使用無病毒的種源,從有關(guān)單位引進和使用確定無病毒的種源;對不確定的種源,應(yīng)送到具有香菇病毒檢測能力的專業(yè)機構(gòu)進行檢測。二是菌種在投入生產(chǎn)前要做好出菇試驗,并運用種源同步出菇技術(shù),判斷是否可用于大規(guī)模擴繁。三是規(guī)范菌種保藏,包括保藏方法、定期更換基質(zhì)配方、轉(zhuǎn)接等,保證種源菌絲的活力。四是在母種生產(chǎn)過程中,要仔細觀察菌絲生長速度和形態(tài),并設(shè)有其他菌株作參照,一旦發(fā)現(xiàn)菌絲生長緩慢、形態(tài)異常,堅決淘汰。五是菌種生產(chǎn)過程中,注意防止交叉感染,特別在接種環(huán)節(jié)中接種工具要灼燒滅菌,力求一個種源用一套接種工具,接種工具經(jīng)常進行高壓滅菌。

5.4 開展菌種復(fù)壯,保持菌種活力

一是啟用原始保存菌株在經(jīng)過出菇試驗后用于生產(chǎn);二是通過斜面菌絲先端的切割提純,進行較為有效的復(fù)壯;三是更換培養(yǎng)基營養(yǎng)成分,將菌株接回到適宜樹種木塊上培養(yǎng),以增強菌株的生活力及生產(chǎn)性狀;四是重新出菇分離,在種菇培育過程中,盡可能創(chuàng)造近乎自然的環(huán)境,以恢復(fù)其野性。

5.5 開展菌種脫毒復(fù)壯

對在生產(chǎn)中表現(xiàn)良好但帶有病毒的種源,可以通過菌種脫毒獲得無病毒種源。目前主要是通過多次尖端分離達到脫毒。值得注意的是,即使進行多次尖端分離也未必一定能脫毒,脫毒與否還須經(jīng)過病毒檢測確認。