王中全 朱秋紅 宋改芳

尿沉渣檢查在泌尿系統(tǒng)疾病的診斷中具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值，并成為治療及療效觀察的重要指標(biāo)之一。UF-1000i全自動(dòng)尿有形成份分析儀能對(duì)尿液中多種有形成分進(jìn)行定量計(jì)數(shù)分析，定量?jī)?nèi)容主要有:紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型、細(xì)菌、酵母樣菌、結(jié)晶、精子等成分，同時(shí)提供多種有形成分的圖像分析，并能判斷血尿的來(lái)源。但我們?cè)谂R床工作中發(fā)現(xiàn)，UF-1000i在檢測(cè)尿紅細(xì)胞時(shí)，結(jié)晶、酵母樣菌、細(xì)菌、脂肪滴、卵磷脂小體及影紅細(xì)胞可對(duì)其造成干擾;而對(duì)白細(xì)胞造成干擾的因素主要是上皮細(xì)胞、非晶形鹽類結(jié)晶、大量細(xì)菌、小圓上皮細(xì)胞、滴蟲等。尿干化學(xué)分析儀通過(guò)測(cè)定尿液中的化學(xué)物質(zhì)而分析紅細(xì)胞及白細(xì)胞，易受多種化學(xué)因素的影響，有較高的假陰性率。尿沉渣分析儀與干化學(xué)儀器在分析尿液有形成分時(shí)，受到多種因素的影響，兩種儀器的檢測(cè)結(jié)果與尿沉渣鏡檢尚存一定的差異。為此，本文通過(guò)對(duì)2000例尿液標(biāo)本進(jìn)行UF-1000i尿沉渣分析儀分析、URIT-1500尿液干化學(xué)分析儀測(cè)試、尿沉渣鏡檢，探討這兩種儀器測(cè)定尿中紅細(xì)胞、白細(xì)胞的影響因素，分析引起誤判的主要原因，并提出相應(yīng)的解決方案，為臨床提供真實(shí)可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取2012年8月至2012年9月我院2000例門診、住院患者，患者年齡2～81歲，男800例、女1200例。用干凈的一次性尿杯留取新鮮中段晨尿。

1.2 儀器與試劑 UF-1000i尿沉渣分析儀及配套試劑、配套低、高值質(zhì)控品;URIT-1500尿液干化學(xué)分析儀及配套試紙條、專用定標(biāo)條;Olympus顯微鏡;Xiang Yi L500水平離心機(jī);10ml帶刻度離心管。

1.3 檢測(cè)方法 每天檢測(cè)前，用專用定標(biāo)條對(duì)URIT-1500尿液干化學(xué)分析儀進(jìn)行定標(biāo)，UF-1000i用低、高值質(zhì)控品做質(zhì)控，在保證儀器運(yùn)行良好狀況下，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。每例標(biāo)本充分混勻后分3管，各10ml，其中第1管進(jìn)行UF-1000i分析儀檢測(cè);第2管進(jìn)行尿干化學(xué)檢測(cè);第3管用水平離心機(jī)RCF400g 1200～1300r/min離心5min后，棄去上清液，留取沉渣0.2ml混勻，吸取20μl滴在載玻片上，用18 mm×18 mm蓋玻片覆蓋，用10×40鏡頭觀察鑒定紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)量，觀察10個(gè)視野所見(jiàn)最低和最高值，記錄結(jié)果，兩小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.4 參考范圍與判定標(biāo)準(zhǔn) ①UF-1000i分析儀檢測(cè):男性:紅細(xì)胞0～12μl，白細(xì)胞:0～12μl;女性:紅細(xì)胞0～24/μl，白細(xì)胞:0～26/μl[1]。②尿干化學(xué)法:潛血:陰性;LEU:陰性。③顯微鏡鏡檢結(jié)果:紅細(xì)胞:0～3/Hp;白細(xì)胞:0～5/Hp[2]。超過(guò)以上參考范圍為陽(yáng)性，3種方法以尿沉渣鏡檢做為“金標(biāo)準(zhǔn)”，當(dāng)尿沉渣鏡檢陰性而UF-1000i和(或)干化學(xué)陽(yáng)性時(shí)為假陽(yáng)性;當(dāng)尿沉渣鏡檢陽(yáng)性而UF-1000i和/或干化學(xué)陰性時(shí)為假陰性。

2 結(jié)果

2.1 UF-1000i、尿沉渣鏡檢檢測(cè)尿紅細(xì)胞、白細(xì)胞結(jié)果 見(jiàn)表1。

2.2 干化學(xué)、尿沉渣鏡檢檢測(cè)尿紅細(xì)胞、白細(xì)胞結(jié)果 見(jiàn)表2。

2.3 兩種方法檢測(cè)尿紅細(xì)胞、白細(xì)胞的影響因素 見(jiàn)表3。

表1 UF-1000i、尿沉渣鏡檢尿紅細(xì)胞、白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較

表2 干化學(xué)、尿沉渣鏡檢尿紅細(xì)胞、白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較

表3 兩種方法檢測(cè)尿紅細(xì)胞、白細(xì)胞的影響因素

3 討論

UF-1000i尿沉渣分析儀利用流式細(xì)胞技術(shù)和熒光染色的方法，通過(guò)前向側(cè)向散射光及其脈沖寬度、熒光強(qiáng)度及其脈沖寬度以及細(xì)胞電阻抗等參數(shù)，對(duì)尿液中有形成分定量分析，從而區(qū)分尿中各種有形成分。具有操作簡(jiǎn)便、速度快、可報(bào)告多項(xiàng)參數(shù)等優(yōu)點(diǎn)。干化學(xué)測(cè)定尿中隱血是根據(jù)血紅蛋白接觸活性法原理，通過(guò)血紅蛋白具有的類過(guò)氧化物酶樣作用催化分解過(guò)氧化物，使四甲基聯(lián)苯胺氧化呈色;檢測(cè)尿中白細(xì)胞是根據(jù)酯酶法的原理，粒細(xì)胞漿內(nèi)的酯酶能水解3-羥基吲哚酚酯類底物，釋放出酚，再與重氮試劑反應(yīng)生成紫紅色化合物。但由于儀器本身的局限性及尿液中有形成分的復(fù)雜性和多變性，容易對(duì)儀器分析尿液中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞造成干擾。有學(xué)者認(rèn)為用單一尿沉渣分析儀或其他方法分析存在一定數(shù)量的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果[3]。本文通過(guò)對(duì)2000例尿液中有形成分的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，這兩種檢測(cè)方法與沉渣鏡檢相比較有一定的差異。

正常形態(tài)的紅細(xì)胞直徑約8 μm、雙凹圓盤狀，分布在散點(diǎn)圖中熒光強(qiáng)度較低的區(qū)域，尿液中的紅細(xì)胞可因多種因素的影響而使其變形。本文通過(guò)對(duì)2000例尿液中有形成分分析，UF-1000i尿沉渣分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞的假陽(yáng)性率占17.9%，常引起假陽(yáng)性的有形成分分別如下:結(jié)晶、酵母樣菌、細(xì)菌、脂肪滴、卵磷脂小體。大小形態(tài)與紅細(xì)胞相似的尿酸結(jié)晶和雙凹形草酸鈣結(jié)晶，在散點(diǎn)圖中與紅細(xì)胞交叉分布，易造成假陽(yáng)性;酵母樣菌、脂肪滴或卵磷脂小體、數(shù)個(gè)非晶形結(jié)晶或細(xì)菌聚集成大小如紅細(xì)胞，通過(guò)儀器分析，其熒光強(qiáng)度和散射光強(qiáng)度與紅細(xì)胞相似，可對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)造成干擾。假陰性率占8.6%，影紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片則常是引起假陰性的主要原因。這類細(xì)胞因其體積小、形態(tài)不規(guī)則，熒光強(qiáng)度極弱、位于低熒光區(qū)，儀器不能辨認(rèn)可造成假陰性。尿中出現(xiàn)大量血紅蛋白尿，沉渣中無(wú)紅細(xì)胞，潛血試驗(yàn)呈陽(yáng)性，常見(jiàn)于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、血型不合輸血、急性溶血疾病、病毒感染、手術(shù)后所致紅細(xì)胞大量破壞等疾病，報(bào)告結(jié)果時(shí)須強(qiáng)調(diào)注明其物理性狀，以提示尿中紅細(xì)胞溶解，并及時(shí)和臨床聯(lián)系。干化學(xué)檢測(cè)紅細(xì)胞的假陽(yáng)性率占10.2%，主要的影響因素有:產(chǎn)過(guò)氧化物酶的細(xì)菌、尿液中含強(qiáng)氧化劑、某些藥物、對(duì)熱不穩(wěn)定酶等;干化學(xué)檢測(cè)紅細(xì)胞的假陰性率較高，占19.5%，主要的影響因素是尿液中含有大量的VitC，卡托普利、羅丁緩釋片亦可降低測(cè)試靈敏度。

UF-1000i尿沉渣分析儀檢測(cè)白細(xì)胞的假陽(yáng)性率達(dá)20.1%，常引起假陽(yáng)性的因素主要有:上皮細(xì)胞、非晶形鹽類結(jié)晶、大量細(xì)菌、小圓上皮細(xì)胞、滴蟲等。干擾機(jī)制可能是尿中非晶形鹽類結(jié)晶、小圓上皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞等成分的大小及染色程度與白細(xì)胞類似，產(chǎn)生的散射光、熒光及電阻信號(hào)與白細(xì)胞部分重疊[4];另外當(dāng)尿液中有大量細(xì)菌聚集成團(tuán)時(shí)，其散射光、熒光信號(hào)與白細(xì)胞相似，也有可能使白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果呈假性升高。在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，孕婦尿液中常有大量的上皮細(xì)胞，會(huì)導(dǎo)致白細(xì)胞假性增多。白細(xì)胞的假陰性率較低，僅占3.3%，白細(xì)胞破碎常是引起假陰性的主要原因。對(duì)于肉眼血尿、混濁的尿標(biāo)本，建議沖洗儀器，待儀器空白值通過(guò)后再進(jìn)行下一個(gè)標(biāo)本的測(cè)試，以免污染下一個(gè)標(biāo)本造成假陽(yáng)性。尿干化學(xué)通過(guò)粒細(xì)胞漿內(nèi)的酯酶檢測(cè)白細(xì)胞，中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞均有白細(xì)胞酯酶，試帶法呈陽(yáng)性結(jié)果，而淋巴細(xì)胞不含這種酯酶呈陰性結(jié)果。干化學(xué)檢測(cè)白細(xì)胞的假陽(yáng)性率占11.8%，主要的影響因素是陰道分泌物污染，分泌物中的鱗狀上皮細(xì)胞漿內(nèi)含有的磷酸酯酶與粒細(xì)胞酯酶化學(xué)性質(zhì)相似導(dǎo)致假陽(yáng)性;假陰性率占14.3%，主要的影響因素是淋巴細(xì)胞或者尿液中含有大量的葡萄糖(＞30 g/L)、高濃度白蛋白(＞5 g/L)及一些藥物如呋喃妥因、慶大霉素、頭孢氨芐、先鋒霉素;草酸濃度增高時(shí)可抑制反應(yīng)，也可導(dǎo)致干化學(xué)中的白細(xì)胞酯酶呈陰性反應(yīng)[2]。

綜上所述，多種因素可能干擾UF-1000i尿沉渣分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞、白細(xì)胞。在分析紅細(xì)胞過(guò)程中，易受結(jié)晶、酵母樣菌及其他大量雜菌、精子等干擾，當(dāng)儀器出現(xiàn)報(bào)警時(shí)，必須用鏡檢確認(rèn)[5];也有學(xué)者認(rèn)為，當(dāng)尿沉渣分析儀與干化學(xué)檢測(cè)結(jié)果不一致和出現(xiàn)異常散點(diǎn)圖時(shí)，報(bào)告管型、酵母樣菌、精子、不均一紅細(xì)胞時(shí)沉渣鏡檢十分必要[6]。而白細(xì)胞易受上皮細(xì)胞、非晶形鹽類結(jié)晶、大量細(xì)菌、小圓上皮細(xì)胞、滴蟲等的影響。目前，UF-1000i和尿干化學(xué)檢測(cè)尿液只能快速篩查，一定要重視沉渣鏡檢，尿沉渣鏡檢被公認(rèn)為尿液有形成分檢查的經(jīng)典方法，只有三者結(jié)合互檢，才能有效排除假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，為臨床相關(guān)疾病的診斷和治療提供真實(shí)可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。

[1]叢玉隆，馬駿龍，李云蓮，等.尿沉渣測(cè)定四種方法參考值范圍調(diào)查.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1997，20(4):229-230．

[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:290-295．

[3]程穎，程燃.UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀影響因素的探討.重慶醫(yī)學(xué)，2006，35(4):349．

[4]陳忠，鄒曉月，袁立新.UF-100尿沉渣分析儀和干化學(xué)檢測(cè)尿中紅細(xì)胞和白細(xì)胞及管型的干擾因素分析.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2008，12(4):534-536．

[5]叢玉隆，馬駿龍.幾種檢測(cè)尿紅細(xì)胞方法的價(jià)值與互補(bǔ)關(guān)系.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，25(5):263-264．

[6]Ottiger C，Huber A R.Quantitative urine particle analysis:integrative approach for the optimal combination of automation with UF2100 and microscopic review with KOVA cell chamber.Clin Chem，2003，49(4):617-623．