閆明啟 朱承超 曲丹

(濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院第一療養(yǎng)區(qū)，266071)

療養(yǎng)對(duì)涉核人員抗氧化能力的影響研究

閆明啟 朱承超 曲丹

(濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院第一療養(yǎng)區(qū)，266071)

目的 研究療養(yǎng)對(duì)涉核人員機(jī)體輻射損傷和抗氧化能力的影響。方法 選取某部涉核療養(yǎng)人員60名，隨機(jī)分為干預(yù)組和非干預(yù)組，每組30人。另選非涉核療養(yǎng)人員15人為對(duì)照組。全部實(shí)驗(yàn)對(duì)象均進(jìn)行常規(guī)療養(yǎng)和飲食，干預(yù)組在常規(guī)療養(yǎng)的基礎(chǔ)上施加營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充和心理疏導(dǎo)等干預(yù)措施。分別在實(shí)驗(yàn)前、后檢測(cè)各組人員淋巴細(xì)胞增生活性與DNA損傷水平、紅細(xì)胞溶血度、血清脂質(zhì)過(guò)氧化物(MDA)含量和總抗氧化能力(T-AOC)等指標(biāo)。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)后，干預(yù)組的平均MDA含量、紅細(xì)胞溶血度和DNA損傷水平均較非干預(yù)組顯著降低，而T-AOC和淋巴細(xì)胞增生活性則顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 綜合療養(yǎng)干預(yù)措施可改善涉核人員機(jī)體的氧化損傷狀況，提高抗氧化能力。

療養(yǎng)干預(yù)；輻射；損傷；抗氧化

涉核人員長(zhǎng)期因從事核接觸作業(yè)，很容易發(fā)生不同程度的輻射損傷，導(dǎo)致機(jī)體白細(xì)胞減少、脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高、抗氧化能力降低等生理生化改變[1]。有研究報(bào)道，植物多酚和大豆復(fù)合物等可降低涉核人員的脂質(zhì)過(guò)氧化水平[2-3]，對(duì)輻射損傷有一定防護(hù)作用。本文以來(lái)我院療養(yǎng)的某部涉核官兵為對(duì)象，探討了營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充和心理疏導(dǎo)等綜合療養(yǎng)干預(yù)措施對(duì)涉核人員機(jī)體輻射損傷和抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料 酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo公司產(chǎn)品，倒置顯微鏡和CO2培養(yǎng)箱為日本OLYMPUS公司產(chǎn)品，小牛血清和1640培養(yǎng)基為美國(guó)Gelman Sciences和GLBCD BRL公司產(chǎn)品，血清總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒由南京建成生物技術(shù)公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 選取來(lái)我院進(jìn)行保健療養(yǎng)的某部涉核人員60名，均為男性，年齡25～40歲，隨機(jī)分為干預(yù)組和非干預(yù)組，每組30人。另選取同樣保健療養(yǎng)的非涉核人員15人作為對(duì)照組。全部實(shí)驗(yàn)對(duì)象的臨床健康狀況、核接觸的時(shí)間、方式與劑量均基本一致，對(duì)本次實(shí)驗(yàn)知情同意。

實(shí)驗(yàn)期間，各組均按常規(guī)保健療養(yǎng)的方式進(jìn)行休養(yǎng)、生活和飲食。干預(yù)組則在每周第1天和第4天各服用維生素C 100 mg、維生素B25 mg、維生素A膠丸1粒(10 000單位)和維生素E膠丸1粒(100 mg)，并每周安排1次心理疏導(dǎo)和舞會(huì)，與涉核人員心理溝通，減輕其焦慮、憂郁、恐懼心理。

實(shí)驗(yàn)期為30 d。實(shí)驗(yàn)對(duì)象均于來(lái)到我院療養(yǎng)的第2天和實(shí)驗(yàn)結(jié)束的當(dāng)天清晨各抽取空腹靜脈血6 mL，每份血樣分為不抗凝和肝素抗凝兩種處理。不抗凝血樣分離血清備檢，抗凝血樣分離淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞，制成密度為1×109/L的淋巴細(xì)胞懸液和1%的紅細(xì)胞懸液備檢。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 淋巴細(xì)胞增生活性 用四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)[4]。將淋巴細(xì)胞懸液接種于96孔板，每孔100 μL，每份血樣分為給予和不給予氧化劑兩種處理，各設(shè)4個(gè)平行孔。氧化劑為終濃度100 mmol/L的H2O2。置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)24 h，加入濃度為5 g/L的MTT液20 μL/孔繼續(xù)培養(yǎng)4 h，取棄每孔上清液并加入DMSO 200 μL，用酶標(biāo)儀測(cè)定細(xì)胞吸光度值。

1.3.2 紅細(xì)胞溶血度 每個(gè)樣本分為A、B兩個(gè)管，每管加入2 mL紅細(xì)胞懸液。A管加終濃度為100 mmol/L的H2O2，B管加等量蒸餾水，混勻。分別置于37℃水浴箱溫浴0.5 h，3 000 r/min離心5 min，取上清液，用721分光光度計(jì)在540 nm波長(zhǎng)比色。溶血度(%)＝(A管吸光度值×B管吸光度值)×100%。

1.3.3 血清MDA和T-AOC 按照試劑盒提供方法檢測(cè)。

1.3.4 淋巴細(xì)胞DNA損傷水平 采用DNA堿性解鏈熒光分析法測(cè)定血淋巴細(xì)胞DNA損傷水平[5]，DNA含量用熒光強(qiáng)度(D值)表示，計(jì)算公式為D＝(P－B)/(T－B)×100%計(jì)算，式中T為總熒光強(qiáng)度，B為非DNA物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，P為除去受損傷DNA后的熒光強(qiáng)度。

2 結(jié)果

2.1 淋巴細(xì)胞增生活性 實(shí)驗(yàn)前，干預(yù)組和非干預(yù)組淋巴細(xì)胞增生活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但兩組均較對(duì)照組顯著性降低(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)后，干預(yù)組經(jīng)給予和不給予氧化劑兩種處理后均較非干預(yù)組顯著升高(P＜0.05，表1)。

2.2 T-AOC、MDA和紅細(xì)胞溶血度 實(shí)驗(yàn)后，干預(yù)組和非干預(yù)組的MDA和紅細(xì)胞溶血度均較實(shí)驗(yàn)前顯著降低而T-AOC則升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

2.3 淋巴細(xì)胞DNA損傷水平 實(shí)驗(yàn)前，干預(yù)組和非干預(yù)組淋巴細(xì)胞DNA含量水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但兩組均較對(duì)照組顯著性降低(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)后，兩組DNA含量均較實(shí)驗(yàn)前升高，且干預(yù)組升高程度大于非干預(yù)組(P＜0.05)，DNA損傷程度降低明顯。各組DNA含量(D值)及損傷度的測(cè)定結(jié)果(表3)。

表1 各組實(shí)驗(yàn)前后淋巴細(xì)胞增生活性檢測(cè)結(jié)果(±s)

表1 各組實(shí)驗(yàn)前后淋巴細(xì)胞增生活性檢測(cè)結(jié)果(±s)

注：與實(shí)驗(yàn)前非干預(yù)組比較，aP＞0.05；與實(shí)驗(yàn)后非干預(yù)組比較，bP＜0.05；與氧化劑(＋)組比較，cP＜0.05

干預(yù)組非干預(yù)組組別 n 氧化劑(+) 氧化劑(-)實(shí)驗(yàn)前 30 0.77±0.06a 0.40±0.09c實(shí)驗(yàn)后 30 0.83±0.08b 0.50±0.05bc實(shí)驗(yàn)前 30 0.76±0.05 0.41±0.03c實(shí)驗(yàn)后 30 0.80±0.03 0.45±0.07c非涉核 對(duì)照組 15 0.96±0.07 0.59±0.08c

表2 各組實(shí)驗(yàn)前后脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果(±s)

表2 各組實(shí)驗(yàn)前后脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果(±s)

注：與實(shí)驗(yàn)前干預(yù)組和非干預(yù)組比較，aP＜0.05；與實(shí)驗(yàn)前非干預(yù)組比較，bP＞0.05；與實(shí)驗(yàn)后非干預(yù)組比較，cP＜0.05

干預(yù)組組別 n T-AOC(U/mL) MDA(nmol/mL) 紅細(xì)胞溶血度(%)實(shí)驗(yàn)前 30 14.56±1.53b 4.89±0.43b 24.24±1.02b實(shí)驗(yàn)后 30 16.12±1.67c 4.49±0.37c 22.89±1.13c實(shí)驗(yàn)前 30 14.91±1.09 4.94±0.35 24.78±0.89實(shí)驗(yàn)后 30 15.25±1.52 4.61±0.35 23.99±1.01非涉核 對(duì)照組 15 17.80±1.55a 4.04±0.44a 20.85±0.93a非干預(yù)組

表3 各組實(shí)驗(yàn)前后淋巴細(xì)胞DNA損傷檢測(cè)結(jié)果(±s)

表3 各組實(shí)驗(yàn)前后淋巴細(xì)胞DNA損傷檢測(cè)結(jié)果(±s)

注：與實(shí)驗(yàn)前非干預(yù)組比較，aP＞0.05；與實(shí)驗(yàn)后非干預(yù)組比較，bP＜0.05

組別 n DNA含量(D值) 損傷度(%)干預(yù)組 實(shí)驗(yàn)前 30 37.06±1.71a 29.80實(shí)驗(yàn)后 30 42.82±1.93b 18.89非干預(yù)組 實(shí)驗(yàn)前 30 37.31±2.06 29.32實(shí)驗(yàn)后 30 40.33±1.62 23.60非涉核 對(duì)照組 15 52.79±1.59 0.00

3 討論

涉核人員長(zhǎng)期接觸放射性核素，會(huì)引起機(jī)體不同程度的氧化損傷，致使抗氧化能力降低[6]。淋巴細(xì)胞具有很高的輻射敏感性，輻射損傷后抗氧化能力減弱，增生活性降低。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)前干預(yù)組和非干預(yù)組淋巴細(xì)胞增生活性均低于對(duì)照組，說(shuō)明涉核人員淋巴細(xì)胞增生活性下降。實(shí)驗(yàn)后干預(yù)組和非干預(yù)組增生活性均升高，且干預(yù)組升高幅度大于非干預(yù)組，說(shuō)明療養(yǎng)后涉核人員淋巴細(xì)胞增生活性得到了改善；干預(yù)組較非干預(yù)組改善更為明顯。體外加入氧化劑培養(yǎng)結(jié)果也可見(jiàn)，雖然兩組增生活性均降低，但干預(yù)組降低的幅度小于非干預(yù)組，提示干預(yù)組抗氧化能力高于非干預(yù)組，療養(yǎng)期間實(shí)施的綜合干預(yù)措施對(duì)保護(hù)淋巴細(xì)胞增生活性有良好作用。

MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其含量反映了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)程度的強(qiáng)弱和機(jī)體細(xì)胞受自由基損傷的程度[7]。MDA升高，提示脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，機(jī)體受到了氧化損傷。紅細(xì)胞溶血度與機(jī)體的抗氧化水平密切相關(guān)，發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)時(shí)，H2O2可交聯(lián)紅細(xì)胞膜上的磷脂和蛋白質(zhì)，也可氧化蛋白質(zhì)的巰基，損傷紅細(xì)胞，發(fā)生溶血[8]。T-AOC是衡量機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)，機(jī)體受到氧化損傷時(shí)T-AOC水平降低。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)前，干預(yù)組和非干預(yù)組的MDA和紅細(xì)胞溶血度明顯高于對(duì)照組，而T-AOC降低，說(shuō)明兩組人員已受到氧化損傷。實(shí)驗(yàn)后MDA和紅細(xì)胞溶血度均下降，且干預(yù)組較非干預(yù)組下降更明顯，T-AOC水平提高，說(shuō)明綜合療養(yǎng)干預(yù)措施能有效提高機(jī)體抗氧化能力。

DNA損傷水平可敏感反映機(jī)體氧化損傷狀況，核接觸人員可因輻射線激發(fā)體內(nèi)形成大量自由基而導(dǎo)致DNA損傷[9]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)前干預(yù)組和非干預(yù)組的DNA含量均低于對(duì)照組，說(shuō)明涉核人員機(jī)體受到氧化損傷。實(shí)驗(yàn)后兩組的DNA含量均較實(shí)驗(yàn)前增高，且干預(yù)組較非干預(yù)組增高更為明顯，DNA損傷度明顯恢復(fù)，說(shuō)明綜合療養(yǎng)干預(yù)措施對(duì)改善涉核人員機(jī)體氧化損傷狀況、促進(jìn)輻射損傷的康復(fù)有良好效果。

綜合本次實(shí)驗(yàn)可以認(rèn)為，療養(yǎng)尤其是施加了綜合療養(yǎng)干預(yù)措施，對(duì)提高涉核人員機(jī)體抗氧化能力，降低氧化損傷水平，促進(jìn)輻射損傷的康復(fù)有良好作用。

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Objective To study the influence of rehabilitation on radiation damage and antioxidant capacity of nucleus-related personnel.Methods 60 nucleus-related convalescents were randomly divided into the intervention group and the non-intervention group with 30 people in each group.Another 15 non-nucleus-related convalescents formed the control group.All experimental subjects were given conventional rehabilitation and diet，while the intervention group were given extra nutritional supplements and psychological counseling.The indexes of lymphocytic proliferation activity，DNA damage level，erythrocytic hemolysis extent，MDA content，and T-AOC before and after the experiment were measured.Results After the experiment，the average MDA content，erythrocytic hemolysis extent，DNA damage level of the intervention group were clearly lower than those of the non-intervention group，while T-AOC and lymphocytic proliferation activity clearly increased.The differences were of statistical significance(P＜0.05).Conclusion Comprehensive rehabilitation intervention measures can improve the oxidative damage status of nucleus-related personnel，and enhance their antioxidant capacity.

Rehabilitation intervention；Radiation；Damage；Antioxidant

1005-619X(2012)12-1068-02

2012-11-06)