杜發(fā)茂 劉娟麗 高 芬

1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，青海西寧 810001；2.青海省人民醫(yī)院內(nèi)科，青海西寧 810007

高原低壓、低氧環(huán)境所致肺動脈高壓是喪失習(xí)服人群發(fā)病的核心，低氧后紅細(xì)胞增多加重心臟負(fù)荷，此次通過觀察高原肺動脈高壓大鼠重返平原前后紅細(xì)胞計數(shù)、肺動脈壓力變化的規(guī)律，間接說明紅細(xì)胞增多與肺動脈高壓的關(guān)系，同時也為慢性高原病低轉(zhuǎn)治療提供實驗室基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取清潔級雄性Wister大鼠，共計112只為實驗對象，大鼠購于甘肅中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，體重180～250 g，鼠齡9～10周，將雄性大鼠隨機(jī)分為：低壓低氧第10、20、30 天組，重返平原第10、20、30、90 天組， 對照組在平原喂養(yǎng)并處置，共計8 組，每組各14只。

1.2 低氧肺動脈高壓造模方法

98只Wister大鼠置于模擬海拔5000m低壓低氧艙（氧艙參數(shù)：溫度：16.9～24℃；濕度：37.3%～51.0%；壓力：396～397 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），每天低壓處理 22 h，低壓低氧第10、20、30 天為時間點，每次取 14只 Wister大鼠腹腔注射20%烏拉坦（5mL/kg），麻醉成功后，分離右側(cè)頸外靜脈，將直徑0.9 mm的硅膠管經(jīng)頸外靜脈“V”形切口送入至右心房，經(jīng)右心室進(jìn)入肺動脈，硅膠管另一端與有創(chuàng)血壓監(jiān)護(hù)儀相連，記錄平均肺動脈壓，測完平均肺動脈壓后取靜脈血測定血常規(guī)。血常規(guī)測定紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容、平均紅細(xì)胞體積、平均血紅蛋白含量、血小板計數(shù)等指標(biāo)。

1.3 實驗動物低轉(zhuǎn)方法

Wister大鼠肺動脈高壓造模成功后，將Wister大鼠低轉(zhuǎn)至陜西咸陽飼養(yǎng)（陜西咸陽海拔386 m）。以重返平原第10、20、30、90 天為時間點，每次取14只大鼠，分別按上述方法測定重返平原組大鼠上述指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)使用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，方差齊時組間比較采用LSD-t檢驗，方差不齊時，組間比較采用Games-Howe檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Wistar大鼠重返平原前后肺動脈平均壓變化

低壓低氧第20、30 天組Wister大鼠平均肺動脈壓與對照組比較明顯升高，低壓低氧第30 天組平均肺動脈壓最高；與低壓低氧第30 天組比較，重返平原第20、30、90 天組明顯降低（P<0.05）。 與對照組比較，重返平原第10、20、30 天組大鼠MPAP仍然較高，重返平原第90 天組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 Wistar大鼠重返平原前后肺動脈平均壓變化（n=14，±s）

表1 Wistar大鼠重返平原前后肺動脈平均壓變化（n=14，±s）

注：與對照組比較，★P<0.05；與低壓低氧第10 天組比較，△P<0.05；與低壓低氧第30 天組比較，*P<0.05

組別 肺動脈平均壓（mm Hg）對照組低壓低氧第10 天組低壓低氧第20 天組低壓低氧第30 天組重返平原第10 天組重返平原第20 天組重返平原第30 天組重返平原第90 天組F值P值17.91±2.76 18.55±0.50 25.78±3.78★△27.81±3.26★△27.78±2.68★22.28±1.74★*23.91±2.20★*18.93±3.43*16.29<0.001

2.2 Wistar大鼠重返平原前后血常規(guī)變化

低壓低氧第10、20、30 天組紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容與對照組比較增加明顯（P<0.05）。重返平原各組與低壓低氧第30 天組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （均P<0.05），重返平原90 天組紅細(xì)胞計數(shù)與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），重返平原組間紅細(xì)胞計數(shù)變化比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

重返平原第20、30、90 天組血紅蛋白、血細(xì)胞比容與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 Wistar大鼠重返平原前后血常規(guī)變化（n=14，±s）

表2 Wistar大鼠重返平原前后血常規(guī)變化（n=14，±s）

注：與對照組比較，★P<0.05；與低壓低氧第30 天組比較，*P<0.05

組別 紅細(xì)胞計數(shù)（個/L）血紅蛋白（g/L）血細(xì)胞比容（%）對照組低壓低氧低氧第10 天低壓低氧低氧第20 天低壓低氧低氧第30 天重返平原第10 天重返平原第20 天重返平原第30 天重返平原第90 天F值P值7.73±0.43 10.64±0.43★10.10±0.81★10.40±1.35★9.11±1.40*8.61±0.21*8.54±0.15*9.91±0.62*★9.63 0.001 170.87±6.42 228.16±5.29★223.17±17.64★227.11±8.68★161.72±31.18*152.42±5.79*151.75±6.94*160.20±42.73*16.98 0.044 46.51±3.8567.03±2.22★66.31±5.00★65.50±5.03★56.03±3.93*55.50±0.95*54.67±1.98*53.24±1.68*13.29 0.002

3 討論

從實驗結(jié)果來看，隨著低壓低氧時間的延長，平均肺動脈壓逐漸升高，持續(xù)低壓低氧第10 天時尚未出現(xiàn)明顯的肺動脈壓增高表現(xiàn)，低壓低氧第20 天平均肺動脈壓明顯增高，第30 天達(dá)到實驗最高值。低壓低氧第30 天達(dá)到高原肺動脈高壓，這與李生花等[1]、李娟等[2]高原肺動脈高壓動物造模時間一致。Palasiewicz等[3]也曾報道健康人在海拔3 700～4 200 m行走3周后會引起肺動脈高壓。

在低壓低氧環(huán)境中平均肺動脈壓隨時間延長而增高，這主要是由于以下原因所致：進(jìn)入高原后由于低氧刺激，加之高原干燥脫水，垂體ACTH釋放增多，甲狀腺激素分泌加強(qiáng)，這些激素分泌高峰一般在低氧第10 天左右[4]，一方面加強(qiáng)組織器官的新陳代謝，另一方面也是機(jī)體快速達(dá)到適應(yīng)的要求；由于低氧縮血管物質(zhì)增多或者由于血管調(diào)節(jié)失衡，縮血管因素占優(yōu)勢導(dǎo)致肺血管收縮導(dǎo)致平均肺動脈壓增高。

重返平原第10 天組平均肺動脈壓較低壓低氧第30 天組稍有降低，但重返平原第20、30 天組平均肺動脈壓明顯降低，重返平原第90 天組平均肺動脈壓已基本接近正常對照組水平。隨著重返平原時間的延長，平均肺動脈壓也呈時間依賴性迅速降低，結(jié)合以上情況說明肺動脈高壓大鼠重返平原后平均肺動脈壓具有可逆性。與袁慧等[5]報道的重返平原后主肺動脈與右肺動脈內(nèi)徑均隨著時間的延長有所降低相同。也與王秀娟等[6]做的久居高原者重返平原后脫適應(yīng)問題調(diào)查結(jié)果相似，對于心肺病變時間較短的高原疾病，脫離高原環(huán)境后可完全適應(yīng)，這種適應(yīng)的病理改變很有可能就是組織改變的可逆性[7]。

從數(shù)據(jù)分析來看，紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容第10 天內(nèi)迅速上升，在第30 天時達(dá)到實驗高峰值，這與李小濱[8]報道急進(jìn)高原家兔紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容變化規(guī)律相同，均在1周左右達(dá)到最高值；紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定值高于魏春英[9]對Wistar大鼠實施慢性間歇性減壓缺氧 15d 后測定值（RBC 6.8 ×1012/L，HB 186 g/L），這可能與低氧處理時間、低氧處理方式不同所致，此次實驗低氧處理每天22 h左右，共計多出魏春英實驗組210 h，未達(dá)到本實驗第10 天要求。低氧組第20、30 天時血紅蛋白變換差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），原因可能與慢性高原病全血黏度是適度的增高而不是過度的增高有關(guān)。過度的缺氧導(dǎo)致變形性紅細(xì)胞的增加，全血黏度穩(wěn)定在相對略高值附近，另外與EPO/EPOR間接動員內(nèi)皮原始細(xì)胞和骨髓上皮祖細(xì)胞通過直接加強(qiáng)新生血管形成系統(tǒng)有關(guān)。脫離低壓低氧環(huán)境后紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容迅速下降，在重返平原組第10 天后紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容下降明顯，但仍高于對照組，在重返平原組第90 天后基本恢復(fù)正常，與對照組無差異。

由于缺氧，腎入球小動脈血流減少，導(dǎo)致EPO分泌增多，紅細(xì)胞增多，機(jī)體缺氧初期起到代償作用，使機(jī)體缺氧有所改善，適應(yīng)高原低氧環(huán)境下正常生理功能。由于血管調(diào)節(jié)、低氧相應(yīng)器官繼發(fā)病理變化，紅細(xì)胞數(shù)量過度增加，形成高原性紅細(xì)胞增多癥[10]，血細(xì)胞比容（Hct）增高促使血液黏度增加，加重了肺血管阻力，加速了肺動脈高壓的發(fā)生，引起一系列的病理改變，解除低氧后紅細(xì)胞增殖消除。

從肺動脈平均壓與血紅蛋白變化來看，二者消張規(guī)律相一致，在低壓低氧時隨時間延長而增加，在第30 天同時達(dá)到最高值，脫離此環(huán)境快速下降，但從時間來看，重返平原第20 天組血紅蛋白、血細(xì)胞比容與低壓低氧第30 天組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），重返平原第10 天組其數(shù)值就達(dá)到對照組水平，而平均肺動脈壓返回平原后也在逐漸下降，而到第90 天才達(dá)到對照水平可能與消除從建血管有關(guān)，所以綜合上述有理由說明血紅蛋白是肺動脈高壓形成的重要因素。

[1] 李生花，靳國恩.Bosentan預(yù)防大鼠低氧性肺動脈高壓形成的作用[J].華西藥學(xué)雜志，2008，23（4）：429-430.

[2]李娟，孫新，畢輝，等.低壓低氧性大鼠肺動脈高壓模型的建立[J].臨床心血管病雜志，2008，24（4）：297-301.

[3] Palasiewicz G，Uaupbaeva DA，Rouxh LE，et al.Three week stay at height of 3700-4200 m.causes mild pulmonary hypertension in healthy men[J].Pneumonol Alerqol Pol，1998，66：545-550.

[4] 李澎，李國彤，姜志皛，等.急進(jìn)高原者垂體 ACTH、TSH、FSH、LH及其靶腺激素變化觀察[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，26（5）：153-154.

[5] 袁慧，魏連忠.超聲檢測由高原返回內(nèi)地居住居民的肺動脈改變[J].華西醫(yī)學(xué)，2008，23（4）：823.

[6] 王秀娟，朱洪俊.久居高原者重返平原后脫適應(yīng)問題調(diào)查[J].高原醫(yī)學(xué)雜志，1997，7（4）：25-26.

[7] 劉娟麗，高芬.慢性高原肺動脈高壓大鼠重返平原后肺動脈壓力變化[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，32（1）：5-8.

[8] 李小濱.高原實驗動物血常規(guī)若干試驗指標(biāo)分析[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1993，（3）158-159.

[9] 魏春英.高原鼠兔低氧適應(yīng)的血液學(xué)特征[J].高原醫(yī)學(xué)雜志，2009，19（4）：23.

[10] 黃文超.高原紅細(xì)胞增多與高血粘度發(fā)生的相關(guān)分析[J].西南軍醫(yī)，2010，12（6）：1047-1048.