王 巍 ，余 翔 ，周祥敏

(1.重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 408000;2.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121)

復(fù)方小兒退熱栓由南板藍(lán)根浸膏粉、對(duì)乙酰氨基酚、人工牛黃等成分組成，具有解熱鎮(zhèn)痛、利咽解毒、祛痰定驚的功效，對(duì)小兒發(fā)熱、上呼吸道感染、支氣管炎肺熱咳嗽等癥具有較好的療效。該制劑的藥品標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)乙酰氨基酚的含量測(cè)定采用紫外分光光度法[1]。該方法專屬性較差，不能完全排除雜質(zhì)的干擾，具有一定的局限性。筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[2－5]，首次采用反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方小兒退熱栓中對(duì)乙酰氨基酚的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)，包括四元梯度、VWD紫外可見(jiàn)檢測(cè)器、Agilent色譜工作站、自動(dòng)進(jìn)樣器;Sartorius－ME235S型電子天平(Max 230g;d=0.01 mg);Shimadzu UV－2501PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為 100018－200408，含量100.0%);復(fù)方小兒退熱栓(江西九華藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20110401，20110504，20110709);甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.05 mol/L醋酸銨溶液－甲醇(90∶10);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):244 nm;柱溫:30 ℃，進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品20.78 mg，置20 mL量瓶中，加0.01 mol/L氫氧化鈉溶液適量，振搖使溶解，用0.01 mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取本品10粒，精密稱定，切成小片，精密稱取復(fù)方小兒退熱栓0.694 80 g(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚0.10 g)，置碘量瓶中，精密加入0.01 mol/L氫氧化鈉溶液100 mL，在60℃水浴加熱20 min，時(shí)時(shí)振搖，冷卻至室溫，置冰浴中冷卻45 min，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取不含對(duì)乙酰氨基酚的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照品溶液色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間位置上未出現(xiàn)吸收峰，說(shuō)明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。在此條件下，對(duì)乙酰氨基酚與其他組分達(dá)到基線完全分離，分離度 R大于1.5，理論板數(shù)以對(duì)乙酰氨基酚計(jì)算大于4 000。高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品液 2，4，8，10，12，16，20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值(Y)對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量(X)進(jìn)行處理，回歸方程為 Y=3 870.6 X －34.386，r=0.999 9。結(jié)果表明，對(duì)乙酰氨基酚進(jìn)樣量在 0.207 8 ～ 2.078 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密進(jìn)樣同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚峰面積的 RSD為0.18%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):精密取同一批樣品(批號(hào)為20110401)，依法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.27%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣10 μL，測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.31%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密量取2.2項(xiàng)下已知含量的樣品(批號(hào)為20110401)續(xù)濾液1 mL，共6份，分別置20 mL量瓶中，分成3組，分別精密加入對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液(0.103 9 mg/mL)8，10，12 mL，平行2次，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得，分別測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)乙酰氨基酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按擬訂方法測(cè)定，用高效液相色譜法(HPLC法)測(cè)定含量，按外標(biāo)法計(jì)算3批樣品中對(duì)乙酰氨基酚的含量，同時(shí)用紫外分光光度法(UV法)測(cè)定其含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

根據(jù)對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液紫外掃描結(jié)果，在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液在203 nm和244 nm波長(zhǎng)處有吸收峰，但因在203 nm波長(zhǎng)處溶劑等因素的干擾較大，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇244 nm。

紫外分光光度法測(cè)定的對(duì)乙酰氨基酚含量偏高，有可能是樣品中所含雜質(zhì)有一定的干擾。而高效液相色譜法靈敏度高，專屬性好，有利于含量測(cè)定。

曾比較了多種不同的流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)選用0.05 mol/L醋酸銨溶液－甲醇(90∶10)使得對(duì)乙酰氨基酚色譜峰形對(duì)稱尖銳，基線平直，系統(tǒng)穩(wěn)定，出峰保留時(shí)間、理論板數(shù)達(dá)到理想的效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，本法方法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，樣品回收率高，可用于復(fù)方小兒退熱栓的質(zhì)量控制。

[1]WS3－B－2748－97，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十四冊(cè))[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:236.

[3]曾 嶸，文 為.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方小兒退熱栓中膽紅素含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25(11):1 206 － 1 207.

[4]李國(guó)強(qiáng).HPLC法測(cè)定復(fù)方通感片中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因含量研究[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2011，18(24):42 －43，47.

[5]李莉明，彭向東，陽(yáng)國(guó)平，等.HPLC－MS/MS同時(shí)測(cè)定人血漿中對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因含量的方法學(xué)研究[J].中南藥學(xué)，2010，8(6):419－422.